Неостриатные механизмы реализации эффектов кортиколиберина на поведение и гормональные функции крыс

• Автор: Рыбникова, Елена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 169 с. : ил.

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.И

2.1. Кортиколибериновая система мозга

2.1.1. Кортиколиберин и родсгвснные пси гиды

2.1.2. Ген кортиколиберина и процесс синтеза

2.1.3. Распределение кортиколибсринсргических нейронов

и терминалей в ЦНС

2.1.3.1 Иммуиогистохнмичсскис исследования.

2.1.3.л .и гибридизация мРНК кортиколиберина

2.2. Регуляция кортиколибсринсргических нейронов.

2.2.1. Внутриклеточные механизмы

2.2.2. Нейромедиаторььнейромолуляторы
2.2.3. Глюкокоргикоиды
2.3. Рецепторы коргикодиберина.
2.3.1. Структура, биохимия и фармакология кортиколибериновых рецепторов
2.3.2. Рецеггторы кортиколиберина и системы вторичных посредников.
2.3.2.1 Ддснилатциклаза .
2.3.2. г.Прогеинкиназа С.
2.3.2.3.Кальций
2.3.3. Распределение кортиколибериновых рецепторов в мозге
2.3.4. Регуляция рецепторов кортиколиберина.
2.3.4.1 .КортмколиберинАКТГглюкокоргикоиды.
2.3.4.2.Стрес с
2.4. Физиологические эффекты эндогенного и экзогенною кортиколиберина
2.4.1. Влияние на нейроэндокринные системы
2.4.2. Регуляция автономных процессов.
2.4.3. Кортиколиберин и поведение.
2.5. Кортиколибермн как медиатор стресса
2.6. Неостриатум как интегративный центр мозга
2.6. . Морфофункциональная характерно гика неостриатума
2.6.2. Участие неостриатума в регуляции поведения и
нейроэндокринных процессов.
3. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Характеристика экспериментальных животных
3.1.1. Крысы линии Внстар.
3.1.2. Крысы линии СпрегДоули
3.1.3. Крысы линиий КНА и .
3.2. Методы исследований
3.2.1. я i гибридизация.
3.2.1.1 Разработка специфических олмгонуклеотндных проб для 1. 2 и урокортина
3.2.1 2.Спсцифнчсскис олигонуклсотидныс пробы для ранних генов .
В и I
3.2.1.3.Метод т i гибридизации с использованием олигонуклеотидов
3.2.1.4. Анализ результатов л i гибридизации.
3.2.2. Метод локальных микроинъекций через вживленные в мозг хсмотроды
3.2.3. Методы изучения гормональных функций.
3.2.3.1. Радиоиммунологичсскнй метод определения содержания кортикосгерона в плазме крови.
3.2.3.2. Радиоиммунологический метод определения уровня половых стероидов в плазме крови
3.2.3.3. Флуориметрический метод определения катехоламинов в ткани надпочечников.
3.2.4. Методы изучения поведения
3.2.4.1. Характеристика ориентировочноисследовательского поведения
в тесте открытое поле.
З.2.4.2. Использование челночной камеры для анализа избсгатсльного
поведения
3.2.5. Статистическая обработка данных.
4. РЕЗУЛЬТАТЫ ВЫ ПОЛЫННЫХ ИССЛЕДОВАИЙ
4.1. Распределение кортиколибериновых рецепторов и урокортина в
различных структурах мол а крыс
4.1.1. Экспрессия СЯНЮ мРНКвмоле.
4.1.2. Экспрессия СКНК2 мРНК в мозге.
4.1.3. Экспрессия мРНК урокортина в нсостриатумс
4.2. Влияние микроинъекции кортиколиберина в нсостриатум на экспрессию ранних генов в мозге
4.2.1. Экспрессия ЭшВ мРНК.
4.2.2. Экспрессия сач мРНК
4.2.3. Экспрессия ПА мРНК
4.2.4. Экспресса сип мРНК.
4.3. Поведенческие и гормональные эффекты внутристриатной микроикьекцнн коршколиберина. исследование на крысах Внстар
4.3.1. Ориентировочноисследовательское поведение
4.3.2. Избсгатсльнос поведение.
4.3.3. Эндокринные функции.
4.3.3.1.Гормоны ГАС.
4.3.3.2.Гормоны САС.
4.3.3.3.Половые стероиды
4.3.4. Заключение
4.4. Эффекты внутристриатной микроинъекции кортиколиберина на поведение
и гормональный статус крыс Вистар на фоне дефицита ДА
4.4.1. Ориентировочноисследовательское поведение
4.4.2. Избегательное повеление .
4.4.3. Эндокринные функции.
4 4.3.1.Гормоны ГАС.
4.4.3.2.Гормоны САС
4.4.3.3.Половые стероиды.
4.4.4. Заключение
4.5. Влияние внутристриатной микроннъекщш кортиколнберика поведение
крыс Вистар на фоне введения агониста ДА.
4.5.1. Ориентировочноисследовательское поведение .
4.5.2. Избе1ателыюе поведение.
4.5.3. Заключение.
4.6. Поведение и гормональный статус животных с различной стратегией избегательного поведения после микроинъекции коргнколиберина
в неостриатум исследования на крысах К НА и КГА.
4.6.1. остановка задач
4.6.2. Ориентировочноисследовательское повеление.
4.6.3. Избегатсльнос поведение. .
4.6 4. Эндокринные функции.
4.6.4. М ормоны ГАС
4.6 4.2.Половые стероиды.
4.6.5. Заключение
4.7. Эффекты кортиколиберина у крыс КНА и К ГА на фоне частичного разрушения дофамннсргичсских терминалей неостриатумабОИДА.
4.7.1. Ориентировочноисследовательское поведение.
4.7.2. Избегателыюе поведение.
4.7.3. Эндокринные функции
4.7,3.1.Гормоны ГАС
4.7.3.2 Половые стероиды.
4.7 4. Заключение.
5. ОБСУЖДЕИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ПРИЛОЖЕНИЯ
ЛИТЕРАТУРА


Впервые показано, что для реализации некоторых из этих эффектов , в том числе его действия на избегательнос поведение, симпапь адреномедуллярную и поювую гормональную системы, ключевое значение имеет дофаминергическая система неостриатума. ТЕОРЕТИЧЕСКАЯ И ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ. На основе выполненных исследований впервые сформулировано новое представление о том. Сделанные в результате исследований теоретические обобщения вносят существенный вС1ад в изучение центральных механизмов, осуществляющих iiii адаптивного ответа организма при стрессе, что способствует разработке новых подходов профилактики и лечения болезней адаптации. ЛЦРОЬЛЦИЯ РАБОТЫ. Результаты исследований были представлены и обсуждены на VIII Ii v i i i, v, , XXXIII Ii ii i , , 1 Ii i i, i, , Ii i i iv vi , , на семинарах v i, ivi , i , а также заседаниях лаборатории нейроэндокринологии и лаборатории физиолоши высшей нервной деятельности Институт физиологии им И. ПУБЛИКАЦИИ Основное содержание диссертации отражено в 7 печатных работах. СТРУКТУРА И ОБЪЕМ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, изложения методик, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка литературы, который содержит 6 работ Объем диссертации 9 страниц машинописного текста, включая рисунков и 3 таблицы. ОБ. ЮР ЛИТЕРАТУРЫ. Кортиколибериновая система мозга. Кортиколиберин и родственные пептиды. Кортиколибсрин iii , , членный одноцепочечный полипептид рис. V . Позднее были расшифрованы аминокислотные последовательности человека и крысы, оказавшиеся идентичными друг другу, но отличающиеся от овцы но семи аминокислотам рис. У низших позвоночных также существуют два пептида, сходных с по структуре и активности саувагин и уротензин I рис. Уротеизия I, состоящий из аминокислоты, был описан в каудальной нейросекреторной системе костистых рыб i. Аминокислотные последовательности как уротеизина, так и саувагнна составляют гомологии с последовательностью II рис. Сравнительно недавно у млекопитающих и человека был идентифицирован, а затем и клонирован родствснный пептид, состоящий из аминокислот, урокортин рис 1 V , . Урокортин получил свое название изза высокой гомологии с уро длинном гомологии с уротензином карпа, однако степень гомологии с млекопитающих также значительна При этом урокортин способен реализовывать по крайней мере часть эффектов 1I, поскольку обладает более высокой аффинностью к рецепторам 1 I типа по сравнению с самим . В году с сотрудниками клонировали ген, кодирующий прогормон овцы i . Рис. I. Гомилогия аминокислотных последовательностей II чсловскакрмсы . Г vд Ii . Оба гена содержат два эк зона, разделенных находящимся между ниш нитроном рис. Первый экзон кодирует основную часть 5нефанслируемого района мРНК, в то время как второй экзон содержит вес прогормонкоднрующие участки и некоторые Знстранслирусмыс регионы мРНК. Vv . Регион связывания цДМФ гена был изолирован и перенесен в ГС клепси клегки крысиной феохромощгтомы, в которых он вызвал экспрессию гена хлорамфениколацетилтрансферазы ,, С помощью этой модели было установлено, что участок связывания цАМФ состоит из оснований и локализуется между 8 и 0 основаниями гена. Предшсствешшк , , состоит из 1 аминокислотных остатков рис 2, их которых концевых аминокислоты проявляют особенности сигнальною пагшда, связанного с секреторными белками В секреторных гранулах предшественник расщепляется с образованием членного пептида В дальнейшем Сконси иапида амидирустся рис. Распределение коргиколиберинергических нейронов и терминалей в ЦПС. Расшифровка аминокислотной последовательности открыла возможности для синтеза и получения поликлональных атгител, что послужило мощным стимулом для развития иммуиогисгохнмического и радиоиммунологичсского исследования локализации содержащих нейронов и терминалей в мозге. В результате было обнаружено, что клеточные тела и волокна, дающие позитивную окраску на , распределены в I НС гетерогенно рис 3, анболсс морфологически и функционально изученная популяция нсйронов локализуется в мсдкоклсточной зоне паравентрикулярного ядра ПВЯ гипоталамуса. Ii. Процесс ii II v и сшггсш исшила , , .