Влияние антиоксидантов на структурно-функциональное состояние эритроцитов крови собак при окислительном стрессе

• Автор: Иванова, Ирина Павловна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Нижний Новгород
• Количество страниц: 127 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Сокращения и условные обозначения ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Характеристика эритроцитов в норме и в условиях окислительного стресса.

1.1.1. Мембрана эритроцитов. Функционирование

мембраносвязанных ферментов.

1.1.2. Биохимические процессы в зрелом эритроците

1.2. Воздействие озона на клетку. Физикохимические, биохимические и окислительные свойства озона.

1.3. Современные представления о свободнорадикальном окислении.

1.4. Антиоксидантные системы клетки. Синтетические и природные антиоксиданты.

1.4.1. Классификация антиоксидантов.

1.4.2. Основные группы препаратов, ингибирующих свободнорадикальное окисление.
Глава 2, Материалы и методы исследования.
2.1.Схема эксперимента.
2.2Характеристика исследу емых соединений.
2.3. Оценка структурно функционального состояния эритроцитов.
2.3.1 .Гематологические исследования.
2.3.2.Определение кислотной резистентности.
2.3.3. Определение ультразвуковой резистентности.
2.4.Эксгракиия липидов из эритроцитов.
2.4.1. Получение моноламелярных липосом.
2.5. Методы, используемые для оценки аитирадикальных свойств.
2.6. Оценка состояния перекисного окисления липидов.
2.6.1. Измерение интенсивности хемилюминесценции.
2.6.2. УФ спектроскопия первичных и вторичных продуктов ПОЛ.
2.6.3. Анализ содержания малонового диальдегида.
2.6.4. Флюоримстрический метод определения оснований Шиффа.
2.7. Анализ антиоксидантных ферментов.
2.7.1. Определение активности супероксиддисмутазы.
2.7.2. Определение активности катал азы.
2.8. Анализ спектра липидов.
2.9. Математическая обработка результатов исследования.
Глава 3. Влияние озона на структурнофункциональное состояние эритроцитов.
3.1. Влияние озона на эритроциты в динамике.
3.2. Изучение липидного спектра эритроцитов
после обработки озоном.
3.3. Перекпсное окисление липидов и активность антиоксидантных ферментов эритроцитов после воздействия озоном.
Глава 4. Оценка антирадикальных и антиоксидантных свойств используемых соединений.
Глава 5. Влияние антиоксидантов и озона на структурнофункциональное состояние эритроцитов.
5.1. Гематологические исследования. 7
5.2. Состояние псрскисного окисления липидов.
5.3. Оценка липидного спектра эритроцитов после инкубации с антиоксидантами.
5.4. Изменение активности антиоксиданты х
ферментов
Глава 6. Обсуждение результатов.
ВЫВОДЫ
Список литературы


Избыточное образование перекисей приводит к серьезным нарушениям биомембран полному окислению ненасыщенных липидов, нарушениям структуры и функции белков, нуклеиновых кислот, мембраносвязанных ферментов, и, в конечном счете, к гибели клеток Афанасьев , Деев , Зенков , Бышевский , Александрович . Важно, что патогенетическое значение имеет не столько усиление ПОЛ, сколько истощение и срыв собственной антиоксидантной системы клетки. Меньшикова , , Трубников , Орлова . Исследование систем, регулирующих интенсивность ПОЛ, факторов, которые вызывают изменение скорости этого процесса, и изучение механизмов действия веществ, способных снимать эти изменения, являются актуальными. Возникает необходимость поиска и скрининга физиологически активных веществ антиокислительного действия, выявление их специфических свойств, позволяющих влиять на ПОЛ. ЦЕЛЬ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ. Цель работы заключалась в оценке влияния природных и синтетических антиоксидантных препаратов на структурно функциональное состояние эритроцитов крови собак в условиях моделирования окислительного стресса озоном. Изучить структурно функциональные изменения в эритроцитах крови собак вызванные окислительным стрессом. Создать в условиях i vi модель окислительного стресса посредством воздействия на эритроциты озона. Оценить характер действия антиоксидантов на эритроциты в условиях экспериментального окислительного стресса, вызванного озоном. НАУЧНАЯ НОВИЗНА. Показаны изменения структурно функциональных свойств эритроцитов i vi при моделировании окислительного стресса путем воздействия озоном в концентрации мкг л озоно кислородной смеси. Разработан новый методический подход к изучению антирадикальной и антиоксидантной активности веществ на клеточном уровне. Впервые исследованы антирадикальные и антиоксидантные свойства препаратов природного происхождения буфатина, мочевины, роданитов и синтетического препарата гутимина. Восстановление структурнофункциональных свойств эритроцитов после развития окислительного стресса, вызванного воздействием озона, присуще всем изученным веществам. Показано, что наиболее активными антирадикальньши свойствами обладает синтетический препарат гугимин, который был намного эффективнее природных роданитов в условиях модельных экспериментов. По сравнению с другими изучаемыми в данной работе препаратами антирадикальные и антиокислительные свойства наиболее выражены у препарата природного происхождения буфатина, который эффективен в более низкой кщщентрации, чем другие исследованные вещества. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ. Полученные в работе данные вносят существенный вклад в понимание механизма действия озона на эритроциты. Разработанный нами метод позволяет провести обоснованный скрининг и оценку антиоксидантных свойств препаратов, которые могут использоваться, как стабилизаторы свободнорадикальных процессов. Результаты исследования могут найти свое применение в ветеринария и медицине. Практическая ценность работы закреплена авторским свидетельством К 5 от г. Способ активации систем антиоксидантной зашиты организма и патентом на изобретение И 2 от г. Способ оценки антиокислительной активности химических и биохимических соединений Результаты работы и разработанные способы используются при выполнении научноисследовательских работ в ЦНШ1 НГМА. ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ. Озон, в концентрации мкгл озонокислородной смеси, воздействуя на отмытые от плазмы эритроциты собак, вызывает деструктивные изменения в мембране, нарушает структурно функциональные свойства эритроцитов и ведет к разрушению клеток. Препараты буфаггин концентрация 9 М, гутимин, мочевина, роданистый аммоний, роданистый гуанидин и роданистый натрий концентрация 7 М. Использование буфатина, гутимиыа, мочевины, роданистого аммония, роданистого гуанидина и роданистого натрия непосредственно перед воздействием озоном приводит к снижению содержания внеклеточного гемоглобина, увеличению количества неразрушенных эритроцитов, снижению уровня конечных продуктов перекисного окисления липидов, уменьшению содержания лизофосфатидилхолина, увеличению количества холестерина и восстановлению структурнофункциональных свойств эритроцитов. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ.