Изменение реактивности сердечно-сосудистой системы у крыс с экспериментально пониженным уровнем эндотелина-1 в крови

• Автор: Гаврилова, Светлана Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 141 с. : ил

Содержание крыс.

Схемы иммунизации.

Измерение массы, систолического артериального давления и ректальной температуры.

Оценка ориентировочноисследовательского поведения крыс методом Открытое поле.

2.2. Приготовление проб для анализов содержания эндотелина в плазме крови, антител в сыворотке крови и для определения параметров

Свертывания крови.

2.3. Эксперименты на изолированных сосудах.

Приготовление препарата изолированной хвостовой артерии крысы.

Установка для проведения экспериментов на изолированных сосудах. Приготовление физиологического раствора.
Трансмуральная электрическая стимуляция нервных окончаний, находящихся в стенке сосуда.

2.4. Определение содержания эндотелина в плазме крови.

2.5. Определение титра антител в сыворотке крови.
2.6. Определение содержания катехоламинов в тканях крыс.
2.7. Определение показателей системы свертывания крови.
Определение содержания фибриногена в крови крыс.
Определение активированного частитного тромбопластинового времени АЧТВ
и протромбиново о времени плазмы ПВ.
2.8. Эксперименты i viv.
Приготовление катетеров.
Имплантация катетеров.
Установка для проведения экспериментов на целом животном. Иммобилизаниоонный стресс.
2.9. Протоколы экспериментов.
Порядок проведения экспериментов с животными, иммунизированными конъюгатом гемоцианина и эндотелина1.
Протоколы экспериментов с животными, иммунизированными конъюгатом БСАЕТ1, БСАЕТ3, и смесью двух конъюгатов.
2 Статистическая обработка результатов.
3. Результаты экспериментов.
3.1. Влияние неспецифической иммунизации на физиологический статус крыс.
3.1.1. Изменения, вызванные неспецифическои иммунизацией гемоцнанином. Изучение реактивности препарата изолированной хвостовой артерии крыс, иммунизированных гемоцианином, на сосудосуживающие и сосудорасширительные факторы.
Изменение АД и ЧСС у бодрствующих крыс, иммунизированных гемоцианином, в ответ на введение сосудорасширяющих и сосудосуживающих веществ в экспериментах i viv.
3.1.2. Изменения, вызванные неспецифическои иммунизацией бычьим сывороточным альбумином БСА.
Изучение реактивности препарата изолированной хвостовой артерии крыс на сосудосуживающие и сосудорасширительные стимулы.
3.2. Влияние иммунизации против эндотелина на физиологический статус крыс.
3.2.1. Изменения в организме крыс, вызванные иммунизацией конъюгатом гемоцианина с эндотелином1 гемЕТ1.
Изучение реактивности препарата изолированной хвостовой артерии крыс, иммунизированных конъюгатом гемЕТ1 на сосудосуживающие и сосудорасширительные факторы.
Изменение АД и ЧСС у крыс иммунизированных к эндотелину1 в ответ на введение сосудосуживающих и сосудорасширяющих препаратов.
3.2.2. Изменения в организме крыс, вызванные иммунизацией конъюгатом бычьего сывороточного альбумина с эндотелином1 БСАЕТ1.
Изучение реактивности препарата хвостовой артерии крыс на сосудосуживающие и сосудорасширитсльные стимулы.
4. Обсуждение результатов.
Изменения в организме крыс, вызванные неспецифической иммунизацией белкаминосителями в смеси с полным адъювантом Фрейнда Влияние иммунизации к эндотелину на параметры сердечнососудистой системы и поведение крыс.
5. Выводы.
6. Список литературы.
7. Список сокращений
Введение


Еще в меньшей степени по аминокислотному составу различаются между собой рецепторы одного подтипа у разных видов животных. Например, гомологии обнаружено между бычьим и человеческим ЕТв рецепторами. ЕТс рецептор был выделен из меланофоров и сердца лягушки X vi i. Его основным отличием от других типов рецепторов является избирательность по отношению к ЕТ3 ЕТ3ЕТ1ЕТ2. В организме млекопитающих этот тип рецептора пока не обнаружен. Интересным является тот факт, что внутрнмембранные домены молекул ЕТд и ЕТм рецепторов имеют наибольшее количество гомологичных аминокислот, тогда как основные отличия между типами рецепторов сосредоточены в и С концевых последовательностях и интрацеллюлярпых петлях. С конец молекулы играет большую роль при взаимодействии с белком и передачи сигнала внутрь клетки. Было установлено, что взаимодействие эндогелинов с рецепторами А или В типа может приводить к активации трех классов протеинов i, , . Причем, бслок определенного типа может взаимодействовать только с определенным структурным доменом рецептора, белок другого типа будет связываться другим доменом. Таким образом, существуют определенные структурнофункциональные отношения между рецептором и белком при передаче сигнала в клетку. Взаимодействие рецептора и протеина приводит к активации системы вторичных посредников. Через белок осуществляется активация аденилатциклазы, взаимодействие с i приводит к ингибированию аденилатциклазы и активации потенциал зависимых Са2 каналов. Через активируется фосфолипаза С и неселективные катионные каналы. IТосле взаимодействия эндотелинов с рецепторами могут включаться другие механизмы передачи сигнала, активация фосфолипазы А2 и фосфолипазы i, , активация метаболизма арахидоновой кислоты. Таким образом, ответ клетки на действие эндотелина может зависеть от изоформы самого лиганда, типа рецепторов, на которые он подействовал и от наличия определенных белков, опосредующих передачу сигнала внутрь клетки. Считается, что сократительный ответ гладкомышечных клеток сосудов опосредуется активацией инозитольного обмена, высвобождение 0 из эндотелиальных клеток зависит от активации аденилатциклазы. ЕТд и ЕТв рецепторы закодированы в двух различных генах, в 4 и хромосомах. Так как последовательности, кодирующие два типа рецепторов похожи, сходна и структурная организация обоих типов рецепторов . Клиренс эндотелина. В организме млекопитающих время полужизни эндотелина составляет около 1. Такое короткое существование обеспечивается эффективным клиренсом пептида в почечных, легочных и кишечных сосудах i . Показано, что взаимодействие 1 с рецепторами ЕТв приводит к интернализации и эндоцитозу комплексов рецепторпептид. Далее происходит деградация эндотелина, какие ферменты участвуют в этом процессе пока еще до конца неясно Vii . Однако. В ряде исследований было обнаружено, что внутривенное введение неселективных антагонистов ЕТдЕТцили селективного антагониста ЕТв эндотелиновых рецепторов, но не ЕТд приводит к увеличению уровня циркулирующего в крови пептида . Сейчас считается, если при использовании антагонистов эндотелиновых рецепторов, уровень пептида в крови увеличивается, происходит блокада ЕТв рецепторов. Распространение эндотелина в ссрдсчнососудистой системе. Физиологическая и патофизиологическая роль. Роль эндотелина в регуляции тонуса сосудов. После того, как i . ЕС5о0 рМ, и максимальная реакция сосуда оказалась сравнимой с максимальным же ответом на предъявление I. Если вспомнить, что выделен он был из клеток эндотелия сосудов, а действие оказывал на гладкую мышцу тех же сосудов, станет понятным почему казалось, что найден фактор, который является виновником всех сердечнососудистых заболеваний, связанных с увеличением артериального давления или с вазоспазмами, приводящими к закупоркам сосудов, к ишемиям и инфарктам. Однако, исследования, проведенные в течение всего этого времени, позволяют говорить о том, что роль эндотелинов в функционировании организма значительно шире, чем просто участие в регуляции кровяного давления и патологиях сердечнососудистой системы.