Гидроосмотический эффект вазопрессина в собирательных трубках почки крыс и его формирование в постнатальном онтогенезе

• Автор: Батурина, Галина Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.13
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 104 с. : ил.

Содержание

Список сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы

1.1. Регуляция водного обмена в организме млекопитающих. Роль вазопрессина.

1.2. Почка как основной эффектор регуляции водного гомеостаза.

1.3. Транспорт воды через эпителий собирательных трубок почки млекопитающих

1.3.1. Пути реабсорбции воды через эпителий собирательных трубок

1.3.2. Аквапорины белки, формирующие водные каналы

1.4. Механизм регуляции транспорта воды через эпителий собирательных трубок почки

1.4.1. Механизм регуляции вазопрессином водной проницаемости апикальной мембраны клеток собирательных трубок
1.4.2. Альтернативаная регуляция водной проницаемости апикальной мембраны клеток собирательных трубок
1.4.3. Регуляция водной проницаемости базолатеральной мембраны клеток собирательных трубок
1.5. Становление механизма трансдукции сигнала АДГ в постнатальном онтогенезе
1.6. Заключение.
Глава II. Материалы и методы
2.1. Экспериментальные животные.
2.2. Измерение водной проницаемости эпителия собирательных трубок
2.2.1. Получение фрагментов собирательных трубок
2.2.2. Оценка коэффициента водной проницаемости базолатеральной мембраны .
2.2.3. Исследование влияния сЮАУР и РСна водную проницаемость базолатеральной мембраны собирательных трубок.
2.2.4. Исследование водной проницаемости общей поверхности клеток собирательных трубок.
2.3. Обратная транскрипция полимеразная цепная реакция.
2.3.1. Выделение тотальной матричной РЫК.
2.3.2. Обратная транскрипция полимеразная цепная реакция.
2.4. Расчеты.
2.4.1. Расчет коэффициента водной проницаемости базолатеральной мембраны собирательных трубок
2.4.2. Расчет коэффициента водной проницаемости общей поверхности собирательных трубок.
2.4.3. Статистика
Глава III. Результаты исследований.
3.1. Оценка водной проницаемости базолатеральной мембраны собирательных трубок наружного и внутреннего мозгового вещества почки крыс. .
3.2. Экспрессия генов ЛрР 2,3,4 и У2 рецептора вазопресснна в наружном и внутреннем мозговом веществе ночки при дегидратации животных
3.3. Влияние сЮАУР на водную проницаемость общей поверхности клеток собирательных трубок мозгового вещества почки крыс в постнатальном онтогенезе.
3.4. Влияние сЮАУР на водную проницаемость базолатсральной поверхности ОМСЭ животных в постнатальном онтогенезе
3.5. Экспрессия генов АСР 2,3,4 в мозговом веществе почки крыс в ходе постнатального развития
3.6. Заключение
Глава IV. Обсуждение.
Выводы.
Список цитированной литературы


Создание в пашей группе ряда методов оценки водной проницаемости эпителия позволило проводить исследования на изолированных фрагментах собирательных трубок почки. Учитывая все вышеизложенное, были сформулированы цели и задачи настоящего исследования. Целью исследования являлось изучение механизмов становления реакции осморегулирующего эпителия собирательных трубок почки крыс на вазопрессин в ходе постнатального онтогенеза. Получить данные о влиянии водной депривации и V на водную проницаемость базолатеральной мембраны эпителия собирательных трубок внутреннего и наружного мозгового вещества почки взрослых крыс. Оценить содержание мРНК V2 рецептора вазопрессина и аквапоринов 2,3,4 типов в различных зонах мозгового вещества почки дегидратированных и гидратированных крыс. Оценить коэффициент осмотической водной проницаемости Р общей поверхности клеток изолированных собирательных трубок мозгового вещества почки крыс разного возраста. ЮАУР на данный параметр в ходе постнатального онтогенеза. Исследовать онтогенетический профиль экспрессии в мозговом веществе почки крыс генов ключевых звеньев механизма передачи сигнала вазопрессина У2 рецептора, аквапорина 2го типа, а также водных каналов базолатеральной мембраны аквапоринов 3 и 4. Изучить водную проницаемость базолатеральной мембраны эпителия изолированных собирательных трубок почки крыс в ходе постнатального развития. Выявить влияние сЮАУР на Рбазолатеральной мембраны эпителия собирательных трубок мозгового вещества почки крыс в онтогенезе. Научная новизна. С использованием разработанного в нашей лаборатории метода впервые показано, что водная проницаемость базолатеральной поверхности собирательных трубок взрослых крыс повышается как при часовой дегидратации животных, так и при кратковременном воздействии агониста У2 рецепторов вазопрессина сЮАУР на изолированные канальцы. Одним из механизмов, обеспечивающих это повышение, является активация экспрессии генов аквапоринов 2,3,4 и У2 рецептора вазопрессина. Показано, что нестимулированная водная проницаемость общей поверхности клеток собирательных трубок, включающей апикальную и базолатеральную мембраны, в мозговом веществе почки не меняется в ходе постнатального онтогенеза. Установлено, что повышение водной проницаемости общей поверхности клеток собирательных трубок в ответ на сЮАУР отсутствует у и х дневных крысят, и может быть зарегистрировано только к му дню постанального развития. Методом ОТПЦР показано, что содержание мРНК аквапорина 2 и У2 рецептора вазопрессина в мозговом веществе почки повышается в ходе постнаталыюго развития, в то время как содержание мРНК аквапоринов 3 и 4 не меняется. Установлено, что сЮАУР вызывает повышение водной проницаемости базолатсральной мембраны собирательных трубок наружного мозгового вещества почки начиная с х дневного возраста. V возрастает. Практическая значимость. Полученные данные дополняют и расширяют существующие представления о механизмах действия вазопрессина в эпителии собирательных трубок почки. Кроме того, результаты данного исследования могут иметь и прикладное значение, поскольку дефект любого из звеньев механизма передачи гормонального сигнала вазопрессина приводит к нарушениям водносолевого гомеостаза. Апробация материалов диссертации. Материалы диссертации доложены на Всемирном конгрессе по нейрогипофизарным гормонам i, , на XXXIV интернациональном конгрессе физиологических наук i, , на IX Всероссийской конференции по физиологии почек СанктПетербург, , на конференции, посвященной лстию со дня рождения М. Г. Колпакова Эндокринная регуляция физиологических функций в норме и патологии Новосибирск, , на XI международной конференции Новые информационные технологии в медицине, биологии, фармакологии и экологии Гурзуф, , на международной конференции Рецепция и внутриклеточная сигнализация Пущино, , на Всемирном конгрессе по нефрологии ii i i, , на Объединенном конгрессе Нефрология и диализ сегодня Новосибирск, , на III Всероссийской конференции с международным участием Механизмы функционирования висцеральных систем СанктПетербург, . По материалам диссертации опубликовано 5 статей в рецензируемых журналах и тезисов докладов.