Функциональная активность лейкоцитов, перенесших криоанабиоз при -20°С

• Автор: Деветьярова, Ольга Нурзадиновна
• Шифр специальности: 03.00.13, 14.00.29
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Киров
• Количество страниц: 122 с. : ил.

Содержание

Список использованных сокращений.

Введение.

Глава I. Обзор литературы. Современное состояние проблемы

введения лейкоцитов в хололовой анабиоз при температуре С

1.1. Функциональные свойства лейкоцитов.

1.2. Методы получения лейкоцитного концентрата и его применение

1.3.Сроки хранения лейкоцитов при различных температурах

1.4. Концепции и теории криоповреждения и криозащиты плазматических мембран

1.5. Криопротекторы и криоконсерванты, используемые при

замораживании лейкоцитов

1.6. Методы криокоисервирования лейкоцитов
Глава II. Материалы и методы исследований.
Глава III. Результаты экспериментальных исследований
3.1. Разработка метода введения лейкоцитов в Холодовой анабиоз при С.
3.1.1. Применение экспоненциальной программы для замораживания лейкоцитов до С.
3.1.2. Выбор оптимального состава хладоограждающего раствора
3.1.3. Изучение влияния длительности хранения применяемого хладоограждающего раствора на сохранение его криозащитных
свойств.
3.2. Исследование функциональных и морфологических свойств лейкоцитов крови человека до введения в Холодовой анабиоз С и после выхода из
3.2.1. Действие криозащитного раствора на сохранность лейкоцитов
3.2.2. Определение оптимального срока хранения лейкоцитов. .
3.2.3. Исследование функциональных и морфологических
свойств лейкоцитов крови человека при оптимальном сроке хранения с разными вариантами хладоограждающего раствора
3.3. Изучение биологических особенностей разработанного хладоофаждающего раствора для лейкоцитов.
3.3.1. Изучение острой токсичности хладоофаждающего раствора
3.3.2. Изучение хронической токсичности хладоофаждающего раствора.
3.3.3. Изучение пирогснности хладоофаждающего раствора.
3.3.4. Изучение переносимости экспериментальными животными
трансфузий концентрата лейкоцитов, замороженных с
разработанным хладоофаждающим раствором
Глава IV. Обсуждение результатов экспериментальных исследований
Выводы.
Список использованной литературы


Цель исследования определить функциональную активность лейкоцитов, перенесших Холодовой анабиоз при С, достигнутый применением экспоненциальной программы охлаждения и нового криозащитного раствора. Изучить жизнеспособность и морфологический состав лейкоцитов, фагоцитарную и метаболическую активность нейтрофилов и моноцитов, перенесших криоанабиоз С продолжительностью 1 суток под защитой оптимального варианта хладоограждающего раствора. Оценить в опытах на животных острую и хроническую токсичность и пирогенность оптимального хладоограждающего раствора и установить переносимость аутологичных . Научная новизна. В лабораторноэкспериментальном исследовании впервые изучены функциональные и морфологические свойства лейкоцитов, вышедших из холодового анабиоза при С, достигнутого с использованием оригинального хладоограждающего раствора и экспоненциальной программы замораживания, показано, что в этих условиях сохранить фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов, целостность плазматической мембраны лейкоцитов, стабильность их морфологического состава и их общее количество на высоком уровне возможно в течение суток. Теоретическая и практическая значимость. Результаты работы расширяют представления о механизмах криоповреждения и криозащиты лейкоцитов крови человека, в том числе о высокой жизнеспособности лейкоцитов в условиях применения гексаметиленбистетраоксиэтилмочевины ГМБТОЭМ и оксиметилэтилпиридина сукцината ОМЭПС при С. Дано научное обоснование криозащитных свойств разработанного хладоограждающего раствора, ингредиентами которого являются вещества отечественного производства криопротектор смешанного действия ГМБТОЭМ и мембраностабилизирующее и антиоксидантное вещество ОМЭПС. РФ от года. Кроме того, в опытах на экспериментальных животных доказана безвредность этого раствора на клеточном и организменном уровнях. Для высокой функциональной и морфологической сохранности лейкоцитов крови человека, подвергнутых холодовому анабиозу при С, предложен эффективный нсдорогостоящий и доступный метод, включающий в себя применение хладоограждающего раствора, медленной экспоненциальной программы охлаждения, быстрого отогрева. Доказано, что применение экспоненциальной программы замораживания лейкоцитов обеспечивает высокую эффективность криоконсервирования и является более предпочтительной, т. Установлено, что для осуществления данной процедуры замораживания не требуется применение дорогостоящей жидкоазотной технологии, возможно использование электрического морозильника для осуществления экспоненциальной программы и не требуется высокой квалификации обслуживающего персонала. Функциональная активность и морфологическая полноценность лейкоцитов, введенных в Холодовой анабиоз при С, сохраняются на высоком уровне в течение суток. Экспоненциальная программа введения лейкоцитов в Холодовой анабиоз способствует сохранению их жизнеспособности и потому наряду с разработанным хладоограждающим раствором может использоваться для замораживания лейкоцитов при температуре С. Апробация работы. Результаты работы доложены на Всероссийской научной конференции Актуальные проблемы регионального экологического мониторинга теория, методика, практика Киров, , на заседании Кировского отделения физиологического общества имени И. П. Павлова Киров, , на научной сессии Кировского филиала Российской Академии Естествознания Киров, , Ученом Совете Института физиологии Коми НЦ УрО РАН Сыктывкар, , Международной конференции Сохранение генетических ресурсов Санкт Петербург, , заседании Кировского областного научного общества гематологов и трансфузиологов Киров, . Личное участие автора в получении результатов. Автором были выполнены все исследования по изучению функциональных свойств нативных и размороженных лейкоцитов и проведена статистическая обработка результатов исследования. Автор принимал участие в разработке метода введения лейкоцитов в Холодовой анабиоз при С, в проведении биологических испытаний криозащитного раствора и в написании статей. Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 печатных работ, из них 3 в центральной печати имеется 1 патент.