Влияние длительного культивирования in vitro на морфофизиологические характеристики и генетическую стабильность линий каллусной ткани солодки голой

• Автор: Чибиряев, Сергей Владимирович
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Уфа
• Количество страниц: 140 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика растений рода солодка i

1.1.1. Использование солодки в народном хозяйстве

1.2. Общая характеристика культивируемых i vi клеток

и тканей растений

1.3. Сомаклональная вариация культивируемых клеток i vi

1.4. Анализ полиморфизма генома методом полимеразной

цепной реакции

1.5. Организация митохондриального генома растительной

клетки
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Объект исследований
2.2. Условия культивирования каллусной ткани
2.3. Условия стерилизации
2.4. Определение прироста сырой биомассы каллуса
2.5. Определение размеров клеток каллуса
2.6. Спектрофотометрический метод количественного определения пигментов
2.7. Спектрофотомстрический метод определения содержания
глицирризиновой кислоты
2.8. Спектрофотомстрический метод определения суммарного содержания фенольных соединений
2.9. Экстрагирование фитогормонов из растительной навески
2Определение содержания фитогормонов методом ИФА
2. .Выделение тотальной ДНК .
2Выделение митохондриальной ДНК
2 Полимеразная цепная реакция
2 Расщепление митохондриальной ДНК рестрицирующими эндонуклеазами
2 Электрофоретическое разделение ДНК в агарозном геле
2 Использованные реактивы
3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Получение линий каллусной ткани солодки голой
3.2. Характеристика линий каллусной ткани солодки голой
3.3. Влияние света на морфофизиологические параметры каллусной ткани солодки голой
3.4. Анализ скорости роста линий каллусной ткани солодки голой
в зависимости от времени года
3.5. Способ ускорения роста каллусной ткани солодки г олой
3.6. Содержание фенольных соединений и глицирризиновой кислоты в каллусной ткани солодки голой в ходе длительного культивирования
3.7. Содержание фитогормонов в каллусной ткани солодки голой
3.8. Анализ тотальной ДНК длительно культивированных i vi линий каллусной ткани солодки голой методом ПЦР
3.9. Анализ митохондриальной ДНК длительно культивированных
i vi линий каллусной ткани солодки голой методом ПДРФ ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


При втором способе непрерывное культивирование клетки выращивают в ферментерах, при этом постоянно добавляется питательная среда, а часть клеточной суспензии удаляется. Клеточные суспензии используются для производства различных веществ в больших количествах. Сюда относятся ферменты, алкалоиды, полифенолы, эфирные масла и т. Кроме этого, суспензии применяются как модели для изучения различных физиологических, морфологических и биохимических процессов, протекающих в клетках Калинин и др. Мусияка, . Меристемы ткани верхушки побега. Для получения растений из меристем последние срезаются вместе с 12 листовыми примордиями и высаживаются в питательную среду. Калинин и др. Мусияка, . Каллусом является недифференцированная ткань, возникающая при делении дедифференцированных клеток паренхимной ткани изолированных сегментов эксплантов различных органов растений. В регуляции образования и роста каллусной ткани определяющее место отводят фитогормонам, поэтому для стимуляции роста и развития клеток в питательную среду вносят ауксины и цитокинины. Первичным каллусом называют каллус, возникший непосредственно на экспланте в асептических условиях. Полученный первичный каллус затем отделяют и пересаживают на новую питательную среду. Это приводит к образованию стерильной культуры каллусной ткани. Каллусную ткань можно поддерживать неограниченно длительное время. Через определенные промежутки времени дней культуру каллусов разделяют на фрагменты и высаживают на новую питательную среду. При пересадке удаляются участки, подверженные некрозу. В качестве питательной среды для каллусов используют среды Мурасиге и С куга, Уайта, Гамборга и Эвелега, Эллера Калинин и др. Исходный кусок ткани экспланта обладает гетерогенностью, кроме этого гетерогенность также может возникнуть непосредственно при культивировании каллусов Валиева, Мардамшин, . За счет этой разнокачественности путем клеточной селекции можно получить линии с различными свойствами. Клеточными линиями называют культуры, возникшие из одного экспланта и различающиеся по одному или нескольким признакам Бутенко, . Каллусные линии могут различаться по окраске, консистенции, скорости роста, содержанию вторичных мегаболитов. По консистенции каллусы делятся на рыхлые и плотные. Плотные, в отличие от рыхлых, состоят из тесно упакованных клеток Калинин и др. У плотных каллусов количество полисахаридов клеточной стенки выше такового у рыхлых. Ржержабек, Горелова, . Это может быть связано с более высокой дифференцировкой клеток у каллусов с плотной консистенцией, так как вторичные метаболиты синтезируются и накапливаются в специализированных клетках которых меньше в рыхлых каллусных тканях Мардамшин и др. Как плотные, так и рыхлые каллусные ткани можно получать путем регулирования состава питательной среды. Обнаружено, что плотные каллусы могут спонтанно переходить в рыхлые, а в обратном направлении этот процесс не идет , i, . У большинства культур женьшеня, стевии, живучки и др. Носов. Это может быть связано с увеличением плоидности клеток в процессе длительного культивирования, с потерей болсс продуктивных клеток изза их слабого роста, с ослаблением генетической информации о вторичном обмене Запрометов, i . Козыренко и др. Румянцева и др. Однако известны случаи синтеза вторичных соединений на высоком уровне и при длительном культивировании. В частности, штаммы культуры клеток диоскореи дельтовидной i i синтезировали стероидные гликозиды в большом количестве в течение почти лет Бутенко и др. Каллусы можно выращивать как на свету, так и в темноте. Действие света имеет большую роль для процессов роста и развития культивируемых i vi клеток, в частности он может инициировать процессы эмбриогенеза и тканевой дифференцировки , . Свет является необходимым фактором для поддержания фотосинтетической активности культивируемых клеток i, . Воздействие света на синтез вторичных метаболитов может иметь неоднозначный характер.