Влияние салициловой кислоты на протеомы листьев и корней гороха

• Автор: Егорова, Алевтина Михайловна
• Шифр специальности: 03.00.12
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 134 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
Оглавление

Список использованных сокращений

Введение

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Протеомные исследования растений

1.2. Способы защиты растений от патогенов.

1.3. Салициловая кислота в растениях

1.4. Программируемая клеточная смерть клеток растений.

1.5. Системная приобретенная устойчивость.

1.6. Патогенидуцируемые и СКиндуцируемые изменения содержания белков.

Глава 2. Объекты и методы исследования.
2.1. Объекты исследования.
2.2. Условия выращивания и обработки
2.3.ротеомные исследования.
2.3.1. Выделение белков
2.3.2. Определение количества белка по методу Лоури
2.3.3.Разделение растворимых белков методом двумерного электрофореза
2.3.4. Обработка гелей.
2.3.5. Триптический гидролиз белков
2.3.6. Получение и спектров белков
2.3.7. Идентификация белков
2.4. Определение программируемой клеточной смерти
2.4.1. Окраска корней красителем Эванс голубой v
2.4.2 Выделение и электрофоретическое разделение ДИК.
2.4.3. Детекция 0.
2.5. Химические реактивы и материалы.
Глава 3. Результаты и их обсуждение.
3.1. Влияние СК на рост корней проростков гороха.
3.1.2. Влияние СК на общее содержание растворимых белков в листьях
и корнях гороха
3.2. Влияние салициловой кислоты на протеом листьев гороха.
3.1.2. Салицилатиндуцируемые белки листьев
3.3. Влияние салициловой кислоты на протеом корней гороха.
3.3.1. Влияние СК мкМ на протеом корней гороха
3.3.2.Результаты идентификации СКиндуцируемых белков корней
3.4. Салициловая кислота как индуктор программируемой клеточной смерти.
3.5. Влияние СК 0 мкМ на протеом корней гороха.
3.5.1. Результаты идентификации белков корней индуцируемых
1 ООмкМ С К
3.6. Салицилат индуцируемое изменение синтеза белков.
3.6.1. Взаимодействие СК с факторами транскрипции
3.6.2. Возможные причины и последствия СК индуцируемого исчезновения ,редуктазы оксофитодисновой кислоты.
3.6.3. Возможная роль СКиндуцируемого образования комплексообразующих белков.
Заключение
Выводы
Список использованной литературы


V , , тогда как термины протеомика и протеом были предложены в году i . Протеомика преследует цель инвентаризации всех белков, закодированных в геноме определенного организма. Количество видов белков в организме составляет от 1 до 5 млн. Говорун, Арчаков, , что делает задачу полной инвентаризации белков трудно выполнимой. Изучаются протеомы различных органов организма, а порой и протеомы органоидов клетки. Методическая база протеомики включает набор постоянно развивающихся методов разделения и анализа, направленных на получение возможно более полной информации о наборе, содержании, первичной структуре белков, их посттрансляционных модификациях и т. Говорун, Арчаков, . Протеомный анализ стал мощным методом для функциональной характеристики растений. В связи с доступностью информации о нуклеотидных последовательностях в генах и на основе прогресса, достигнутого в определении последовательности аминокислот в белках с помощью массспектром етри и, протеомный подход открывает новые перспективы исследования влияния различных факторов на синтез, деградацию, содержание и роль различных белков в ответных реакциях растений, в том числе имеющих важное хозяйственное значение v . По данным i . Главным образом статьи по протеомике посвящены работам с дрожжами и человеком . . . В статье, опубликованной в г. iv . В году различные исследовательские лаборатории и группы проводили протеомный анализ органов, тканей, суспензионных культур в общей сложности около 0 работ, из них стадиям развития растений было посвящено статей, ортноидам клеток , действию гормонов и других сигнальных молекул 8, действию абиогенных стрессоров 1, патогенов , особенностям взаимодействия белков 4 и посттрансляционным модификациям белков 8 работ i . Велика роль протеомики в познании молекулярных механизмов адаптации и иммунитета, основой которых является функционирование около сигнальных систем клеток Тарчевский, . Имеются данные i . Особо следует отметить работы по протеому растений, геном которых расшифрован арабидопсис ii Iiiiv, , рис . . С каждым годом расширяется список растений, являющихся объектом протеомных исследований. Так к вышеупомянутым растениям можно добавить виноград Vii vii . i . i . Кроме того, продолжается работа над секвенированием геномов сои, томата, кукурузы, люцерны, картофеля, сорго iv . Суть протеомного метода состоит в выделении белков из ткани, их разделении и идентификации. Ряд обзоров и публикаций посвящен методам растительной нротсомики описанию методов, включая многочисленные протоколы для извлечения белков из разных типов тканей растений i, i, , протоколы для субфракционирования и обогащения белковых проб, массспектрометрического анализа и идентификации белков Говорун, Арчаков, i . Приготовление белковых образцов является важным этапом в протеомных исследованиях. По сравнению с другими организмами, выделение белков из растений сложнее, поскольку в клетках растений содержится большое количество протеаз и соединений, мешающих протеомному анализу. Это полифенолы, полисахариды, липиды, крахмал и другие соединения. Кроме того, в некоторых тканях растений очень велико содержание отдельных так называемых мажорных белков например, РУБИСКО в листьях и некоторых запасных белков в семенах, которые при окрашивании электрофореграмм мешают увидеть белки, отличающиеся невысоким содержанием. В настоящее время нет общепринятого идеального протокола одновременного извлечения всех типов белков из растительной ткани для последующего их электрофореза. Выбор протокола может меняться в зависимости от внимания различных исследователей к тем или иным типам белков. Основной метод, используемый сегодня для извлечения белков это метод осаждения с помощью трихлоруксусной кислоты ТХУ и ацетона, который был взят для проведения протеомных анализов и нами.