Особенности формирования и функционирования ядрышкового аппарата в условиях пространственного разобщения хромосом

• Автор: Мухарьямова, Кадрия Шамильевна
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 87 с. : ил.

1. Ультраструктура ядрышка

2. Ьелки ядрышка

а аргентофильные белки

б фактор инициации транскрипции РНК полимеразы1, ЦБР

в фибрилларин, маркер раннего процессинга рРНК

г белок В, маркер сборки прерибосом

3. Нуклсологснсз ядрышка

4. Микроядерные клетки

IV. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

1. Объект исследования

2. Стандартные условия получения микроядер

3. Условия обработки клеток актиномицином Д
4. Условия обработки клеток 5,6днхлороРрибофуранозил
бензимидазолом ДРБ
5. Выявление основных химических компонентов ядрышка
а выявление РНПкомпонентов с помощью реакции Брате
б выявление Лфильных белков ядрышка
г реакция Фельгена
д иммуноцитохимическое изучение клеток
6. Определение транскрипционной активности ядрышек в микроядерных клетках
а радиоавтографический метод
б нерадиоавтографический подход к определению транскрипционной активности ядрышек с помощью Бр УТФ
7. Электронная микроскопия
8. Морфометрические измерения
V. РЕЗУЛЬТАТЫ
1. Динамика клеток с микроядрами
2. Общая характеристика и число ядрышек в клетках с микроядрами
3. Характеристика белковых компонентов ядрышка в клетках с микроядрами
а окрашивайте азотнокислым серебром
б выявление иВБ
в окраска на фибрилларин
г окраска на В
д двойное окрашивание клеток антителами к фибрилларину и В
е двойное окрашивание клеток антителами к белку В и к ламину В 4.Определение транскрипционной активности в клетках с микроядрами
а радиоавтографический метод
б нерадиоавтографический метод с использованием бролгированного уридинтрифосфата
5.Особенности ультраструктурной организации в клетках с микроядрами
6. Характеристика белковых компонентов ядрышка в нормальном митозе
а АЯОР белки
б Белок фактор инициации транскрипции ИВ Б
в Фибрилларин
г Белок В
д Окрашивание метафазных хромосом антителами к белкам В и фибрилларину в условиях гипотонического шока 5
е Ламин В
ж Включение БрУТФ в митотические тетки
VI. ОБСУЖДЕНИЕ
1. Динамика клеток с микроядрами
2. Особенности макроорганизации ядрышек в клетках с микроядрами
1. Особенности химического сосгава микроядрышек на разные сроки их
созревания
4. Особенности функционального состояния микроядрышек
5. Особенности функционирования и организации микроядрышск в зависимости ог степени разобщения индивидуальных микроядер
6. Судьба основных ядрышковых белков в митозе и природа материала
в микроядрышках
7. Внеядрышковые внутриядерные включения, содержащие основные ядрышковые белки
VII. ВЫВОДЫ
VIII. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
Введение


Одним из подходов к его решению является изучение функционирования ядрышек в микроядрах По этому поводу опубликован ряд интересных работ ЬаЫсН е а. ЬаЫсН е а1. Киреев и др. Кроме того, микроядра являются хорошей моделью для изучения механизмов сборки ядрышка на последних стадиях митоза. Изучение кинетики формирования ядрышек в условиях пространственного разобщения хромосом позволяет выявить закономерности взаимодействия отдельных компонентов ядрышка при их реконструкции в митозе и способствует выяснению природы факторов, обеспечивающих миграцию предшественников ядрышек из цитоплазмы в реформирующиеся ядра. В настоящее время сведения по данным вопросам в литературе отсутствуют. Основная цель настоящей работы заключалась в изучении закономерностей сборки и функционирования ядрышкового аппарата в условиях пространственного разобщения хромосом. В качестве условий для получения микроядер использовали гипотоническую обработку живых клеток СПЭВ растворами низкой ионной силы, что позволило получить большое число отдельных микроядер на разных стадиях их формирования 2а1яерта е а. Киреев и др. Эта же методика позволила нам получать микроядра на разных стадиях формирования. Цели и задачи работы. Основная цель настоящей работы заключалась в изучении цитохимических, иммуноцитихимических и функциональных особенностей ядрышкового аппарата в клетках с микроядрами. Конкретные задачи работы заключались в следующем. Подобрать условия для максимального разобщения хромосом в составе микроядер формирующихся в клетках СПЭВ при их выходе из блока. Проследить судьбу клеток с микроядрами и ответить на вопрос способны ли они вступать в митоз. Описать динамику числа, размеров и морфологии ядрышек в клетках с микроядрами на разные сроки их формирования. РНК, блки, фактор инициации транскрипции иВБ, белок раннег о процессинга фибрилларин и белок позднего процессинга В. Б Описать особенности ультраструктурной организации ядрышек в клетках с микроядрами. Изучить функциональную аетивность микроядер и ядрышек на разные сроки их формирования. Описать динамику активации рибосомных генов и поведение основных ядрышковых компонентов блки, иВБ, фибрилларин, В при формировании ядрышек в митозе. Сопоставить кинетику нуклеологенеза в нормальном митозе с динамикой формирования ядрышек в клетках с микроядрами. Выяснить, какие этапы биогенеза рибосом и ядрышек находятся в наибольшей зависимости от пространственного объединения хромосом. Обзор литературы. Ядрышко является обязательной органеллой для подавляющего большинства эукариотических клеток. Оно формируется в результате транскрипционной активности основных рибосомных генов, кодирующих , и 5,8 рРНК рДНК. Эти гены собраны в один или несколько кластеров, располагающихся в специализированных участках хромосом, получивших название ядрышкообразующих районов ЯОР , , V, iv, . В ядрышках происходит синтез и процессинг первичных рРНПтранскриптов прерРНК и образование зрелых , рРНК. По мере роста рРНПтранскрипта он связывается с различными специфическими ядрышковыми белками, такими как нуклеолин, фибрилларин, В, а также белком зрелых рибосом I . РНК, которая транскрибируется вне ядрышка iv, . Таким образом, в конечном участке транскрипции образуется рибонуклеопротеид с коэффициентом седиментации , Кроме того, в состав ядрышек входят малые ядрышковые РНК мякРНК, которые не содержатся в зрелых рибосомах. Эти мякРНК участвуют в раннем процессинге рРНК , , , а также осуществляют регуляцию сборки прерибосомных частиц i а. В состав большой прерибосомной частицы входит 5 рРНК, которая кодируется генами, не располагающимися внутри ядрышка. Таким образом, формирование рибосомных частиц требует кооперативного взаимодействия генопродуктов разных хромосом. Однако, механизмы взаимодействия хромосом, вовлеченных в биогенез рибосом, до сих пор остаются до конца не выясненными. Одним из подходов к их решению является морфологический анализ ядрышек в различных экспериментальных условиях, поскольку известно, что структурная организация ядрышка является отражением его функциональной активности.