Микроинъекции ДНК онкогенных вирусов в полярную плазму ранних эмбрионов Drosophila melanogaster : эмбриологические и генетические эффекты

• Автор: Набирочкин, Сергей Дмитриевич
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 212 c. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
Введение .

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Факторы, определяющие ядерную детерминацию в раннем развитии эмбрионов i

1.2. Эксперименты по генетической трансформацииживотных Глава П. Материалы и методы

Список сокращений .

Глава Ш. Результаты

3.1. Развитие полярных клеток ранних эмбрионов i в норме и при экспериментальных воздействиях после коротковолнового ультрафиолетового облучения и микроиньекцки воды и раствора ДНК .
3.2. Инъекции интактного вируса саркомы Рауса и клонированных фрагментов ретровирусных ДШС в ранние эмбрионы i .

3.3. Шкрошъекцип ДНК аденовируса 7 в ранние эмбрионы i

Глаза 1У. Обсуждение полученных результатов .

Выводы .
Список использованной литературы


После инъекций плазмиды 6 ,в которой ТКген вируса герпеса находится под контролем промоторнорегуляторного участка металлотионеинового гена, мыши, экспрессия вирусной ДНК была зарегистрирована в клетках печени 7 мышеи из . Уровень экспрессии тшлидинкиназного гена возрастал под действием 2 в раз,но не изменялся при введении глюкокортикоидов i . i . В разных линиях трансгенных мышей уровень экспрессии ТКгена варьировал никакой корреляции между уровнем экспрессий и числом копий ТКгена в геноме трансформантов обнаружить не удалось. Белее того, не наблюдалось и стойкой передачи характера экспрессии в ряду поколении она могла и усиливаться и уменьшаться у потомков по сравнению с родителями. Потомство 2х мышей было в этом отношении подробно изучено. Оказалось, что вариабельность экспрессии при передаче чужеродной ДНК потомству может быть связана как со структурными перестройками экзогенных ДНК, так и с изменением характера их метилирования ii,i2. О значении метилирования экзогенных ДНК, как об одном из возможных механизмов регуляции их экспрессии, сообщают и Яниш с сотрудниками. Им удалось показать, что провирусная ДНК вируса лейкемии Молони метилируется в геноме трансгенных мышей на по потенциальным сайтам метилирования. У таких трансгенных мышей вирусная ДНК не экспрессируется . ДНК протяженные делеции в центральной части провирусной ДНК. Эти же авторы показали, что на время экспрессии провирусной ДНК влияет место е интеграции в геном реципиента i,,i, . i . i . Итак, экспрессия экзогенных ДНК в геноме трансгенных мышей носит,как правило, неспицифический характер. i . . Бринстер с соавторами вводили в пронуклеус мышиных зигот перестроенный функциональноактивный ген легкой цепи у. Авторы полагают, что за правильный характер экспрессии отвечает небольшая интронная последовательность тканеспецифический энхансер X иммуноглобулинового гена. По всей видимости, структурные перестройки иммуноглобулиновых генов не играют существенной роли в определении тканевой специфичности экспрессии, поскольку, хотя в норме в клетках печени X иммуноглобулиновый ген не перестроен, у трансгенных мышей он экспрессируется только в селезенке Вг1ег е1. После инъекций в мышиные зиготы гена гормона роста крысы удалось получить трансгенных мышей, отличающихся ускоренным ростом. В этой работе был продемонстрирован физиологический эффект, специфический для гена гормона роста, и показано, что,в целом,существует положительная корреляция между уровнем транскрипции введенного гена, содержанием гормона роста в крови и скоростью роста трансформантов. Ьтег еь. В1гпЪе,Ечапв,. ДНК передается потомству как моногенный Менделевский признак, что указывает на интеграцию чужеродных генов в один сайт хромосомы реципиента отклонения от этого правила объясняются, скорее всего, мозаицизмом клеток родителей передача экзогенной ДНК потомству чаще происходит без е структурных перестроек i. ,i, . ДНК, хотя и обнаружена в большей части работ, носит сложный, в основном неспицифический характер. Разительный контраст с работами, выполненными на млекопитающих, представляют собой опыты по переносу генов у дрозофилы. . i . i,i,. Отличительной чертой экспериментов ПО переносу генов у i является то, что в них вектором служил элемент, эндогенный транспозон, ответственный за гибридный дисгенезис, так называемого, РМтипа i,i,3ХВ работе Спрэдлинга и Рубина, в качестве реципиента была использована мутантная линия лух , несущих в Ххромосоме мутацию , индуцированную дефектным элементом, который сам к транспозиции не способен мутация остается стабильной. При введении в эмбрионы этой линии ингактного элемента у мух, вылетевших из оперированных яиц, утация становится нестабильной. В ДНК таких мух был обнаружен янтактный элемент. Интеграция его, как показали эксперименты по гибридизации i i , происходит во все хромосомы реципиента.