Нарушение активации ядер гепатоцитов крысы в условиях последствия алкилирующего агента (популяционно-клеточное исследование)

• Автор: Вахтель, Николай Маркович
• Шифр специальности: 03.00.11
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 130 c. : ил

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Основные принципы и механизмы алкилирования

1.2. Первичные молекулярные продукты алкипирования важнейших макромолекул клетки

1.3. Генотоксические и мутагенные свойства алкилирующих агентов.

1.4. Модификация повреждений, вызванных алкилирующши агентами

1.5. Воздействие алкиляторов на ядерный хроматин

1.6. Характеристика типичного алкилируадего агента, отечественного противоракового препарата
дшина .

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ЖСЛЕДОВАНИЯ.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

3.1. Разработка метода оценки функционального состояния единичной клетки и клеточной популяции. Модель реорганизации хроматина клеточного ядра
под действием генного индуктора фенобарбитала.
3.2. Исследование ранних этапов последействия дипина
в условиях генной индукции
3.3. Популяционноклеточный анализ гепатоцитов крысы при действии дипина и последующей генной
индукции.
3.3.1. Анализ гепатоцитов интактных и индуцированных фенобарбиталом животных
3.3.2. Анализ процесса активации ядер гепатоцитов крысы в условиях последействия дипина
в дозе мгкг.
3.3.3. Анализ активации ядер гепатоцитов крысы в условиях последействия дшина в дозе
кгкг.
3.3.4. Анализ характера активации ядер гепатоцитов крысы после воздействия дшина на функционально стимулированную печень.
3.3.5. Длительность существования поврендений в клетках печени крыс, приводящих к нарушению активации ядер гепатоцитов
3.3.6. Популяционноклеточный анализ активации ядер гепатоцитов крысы после многократного воздействия дшина .
4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯ.
выводаюо
УКАЗАТЕЛЬ ЛИТЕРАТУРЫ.
О
ВВЕДЕНИЕ


В настоящем исследовании была впервые предпринята попытка оценить адаптивные возможности гепатоцита в условиях последействия терапевтических доз типичного алкипирующего агента дипина с помощью анализа активации клеточного ядра. Было выяснено, что даже терапевтические дозы препарата резко ограничивают возможности перестройки ядра в ходе интенсивной генной индукции. Методами аналитической микроскопии было показано, что после воздействия однократной нецитостатической дозы алкилирующего агента дипина возникают скрытые изменения в системе интерфазного хроматина, которые в условиях интенсивной функциональной нагрузки на белоксинтезиругаций аппарат гепатоцита приводят к нарушению процесса реорганизации клеточного ядра. Такие изменения длительно сохраняются в клетке. Эти факты указывают на то, что контакт даже однократной малой дозы алкилирующего агента с печеночной клеткой оставляет след, затрудняющий прогнозирование ее поведения в самых разнообразных ситуациях активация генома, его репрограммирование, тяжелые интоксикации, контакт с вирусами и т. Выявленные изменения потенциальных возможностей ядра гепатоцита связаны с длительно живущими нарушениями консервативных макромолекул, вероятнее всего, с макромолекулярным комплексом хроматина. Анализ последствий воздействия различных схем, доз и условий введения дшина на процесс структурнометаболической перестройки ядра гепатоцита показал, что наибольший повреждающий эффект малой дозы наблюдается в случае его воздействия на предварительно активированные клетки. Эти результаты указывают, что конечный биологический эффект алкилирования формируется в зависимости от исходного состояния клеток и тех конкретных функциональных нагрузок, которые неизбежны в процессе жизнедеятельности организма. Широкий спектр воздействий, так или иначе повышающих нагрузку на генетический аппарат гепатоцита, позволил вскрыть некоторые общие принципы клеточнопопуляционной регуляции функциональной активности печени. Выявленный в настоящей работе алгоритм структурнометаболических перестроек в популяции ядер гепатоцитов позволяет обнаружить потенциальные функциональные нарушения, предсказать возможную декомпенсацию клеток на ранних этапах. Вышеизложенные новые данные составляют основу для выводов настоящего исследования и в качестве основных положений выносятся на защиту. Разработан метод количественной оценки уровня активации ящерного хроматина гепатоцитов i. Количественный анализ функциональной активности популяции ядер гепатоцитов может быть использован для скрининга генных индукторов среди новых лекарственных препаратов и других биологически активных веществ. Новый метод защищен авторским свидетельством от 2III0 г. Практическое значение данного исследования заключается и в том, что показаны новые свойства дипина препарата, широко используемого в клинической и лабораторной практике. Биологическая активность дипина зависит не столько от дозы, сколько от функционального состояния клеток мишеней. Большинство изменений в клетках печени, инициируемых алкилирующим агентом, и, в частности, потеря биосинтетических и детоксицирующих возможностей являются следствием нарушения процесса реорганизации системы интерфазного хроматина. Выявленные нарушения являются долгоживущими и связаны с модификацией консервативных макромолекул клетки, вероятнее всего с макромолекуяярным комплексом хроматина. Скрытые повреждения аппарата реорганизации ядерного хроматина приводят к нарушению биосинтетической деятельности клеток печени в условиях воздействия генного индуктора фенобарбитала. Активация клеток печени перед воздействием алкилирующего
агента приводит к резкому усилению повреждающего воздействия, что выражается нарушением формулы популяционноклеточного ответа. Некоторые общие принципы популяционной регуляции клеточной активности при воздействии активирующих, репрессирующих и комбинированных воздействий. Ступенчатый характер перестройки системы интерфазного хроматина как способ неспецифической регуляции метаболической активности клеток печени.