Иммунные реакции гемолимфы прямокрылых насекомых при микроспоридиозе

• Автор: Токарев, Юрий Сергеевич
• Шифр специальности: 03.00.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 169 с. : ил

1.1 Иммунная система беспозвоночных и инфекционный патогенез.

1.1.1 Иммунитет и резистентность беспозвоночных

Основные факторы иммунитета беспозвоночных клеточные защитные реакции распознавание чужого и активация защитных реакгщи

1.1.2 Взаимодействие патогенов с защитными системами хозяев.

Проникновение в организм и избегание распознавания чужого подавление зспцитных реакций хозяина

1.2 Краткая характеристика микроспоридий.

1.2.2 Микроспоридии как паразиты животных Жизненный цикл микроспоридий взаимодействие микроспоридии с клеткой хозяина

1.2.2 Сельскохозяйственное значение микроспоридий.

Микроспоридии вредных и полезных членистоногих, микроспоридии в борьбе с прямокрылыми насекомыми

1 3 Паразитохозяинные отношения микроспоридий и животныххозяев.

1.3 .1 Взаимодействие с иммунной системой позвоночных хозяев Врожденная устойчивость к микроспоридиозу ранние индуцируемые реакции адаптивный иммунитет
1.3 .2 Микроспоридиозы насекомых
Популяционный уровень паразитохозяинных отношений, взаимоотношения паразита и хозяина на уровне организма защитные реакции насекомых при микроспоридиозе
Г лава 2. Материалы и методы исследований. .
2.1 Насекомые и микроорганизмы Насекомые простейшие бактерии и грибы.
2.2 Методы микроскопических исследований Гистологические препараты и световая микроскопия флюоресцентная микроскопия электронная микроскопия.
2.3 Изучение агглютининов гемолимфы.
2.3.1 Определение агглютинирующей активности.
2.3.2 Методы выделения и фракционирования белков Гельхроматография электрофорез аффинная хроматография.
2.4 Эксперименты i vi первичная культура гемоцитов сверчков и определение жизнеспособности клеток первичная культура перитонеальных макрофагов мышей
проведение реакции фагоцитоза i vi.
Глава 3. Заболевания прямокрылых насекомых, содержащихся в культуре.
3.1 Микроспоридиоз, вызванный i патогенез микроспоридиоза этапы и сроки развития заболевания влияние инфекционной дозы на течение заболевания
3.2 Микроспоридиоз перелетной саранчи, вызванный патогенез микроспоридиоза реакции двух изолятов саранчи на микроспоридиоз.
3.3 Диагностика энтомопатогенов методом флюоресцентной микроскопии выявление ЦИК окрашивание калъкофлюором.
Обсуждение
Глава 4. Защитные реакции гемоцитов прямокрылых насекомых.
4.1 Система защитных реакций клеток гемолимфы насекомых основные типы гемоцитов и гемопоэз связь меланизации гемолимфы с гемоцитами эндогенные ингибиторы фенолоксидаз гемолимфы
4.2 Защитные реакции двупятнистого сверчка при патогенезе.
4.2.1 Реакции гемоцитов на микроспоридиоз, вызванный i Фагоцитоз спор микроспоридий меланизация и инкапсуляция зараженных тканей динамика
защитных реакции в онтогенезе заражение лткроспоридиями гемопоэтического
органа сверчка
4.2.2 Реакции гемоцитов на кокцидиоз, вызванный i i
4 .3 Защитные реакции перелетной саранчи при патогенезе
Обсуждение
Глава 5 Связывающие белки гемолимфы двупятнистого сверчка.
5.1 Агглютинирующая активность гемолимфы Выявление агглютинирующей активности специфичность агглютинации чужеродных клеток ингибиторная специфичность агглютининов
5.2 Выделение связывающих белков Гельхроматография афффинная
хроматография.
5.3. Агглютинирующая активность гемолимфы при микроспоридиозе
Обсуждение.
Глава 6. Взаимоотношения микроспоридий с клетками хозяев i vi.
6.1 Кратковременное культивирование гемоцитов двупятнистого i Выделение гемоцитов и определение жизнеспособности условия поддержания первичной культуры гемоцитов
6.2 Фагоцитоз спор микроспоридий i vi Оценка морфофункционаз ьного состояния клетокэффекторов и клетокмишеней при проведении экспериментов фагоцитоз спор микроспоридий гемоцитами сверчка фагоцитоз спор . i
мышиными перитонеальными макрофагами
ОбсуждениеП
Заключение
Список литературы.
СПИСОК ОСНОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ
АО акридиновый оранжевый
АФК активированные формы кислорода
ВТ i iii
ДАФИ диамидинофенилен индол
ДОФА дигидроксифенилаланин
ДСН додецилсульфат натрия
ЗТФР забуференный Трисом физиологический раствор
ЗФФР, ЗФР забуференный фосфатами физраствор
КБ какодилатный буфер
ЛФХ лизофосфатидилхолин
ПААГ полиакриламидный гель
Трис трисгидроксиаминометан
ТХУ трихлоруксусная кислота
ФО фенолоксидаза
ФСК фетальная сыворотка коров
ФТМ фенилтиомочевина
ЭДТА этилендиаминтетраацетат двунатриевая соль
ЭМ электронная микроскопия
ЭФ электрофорез
ВВЕДЕНИЕ


Это обуславливает изолирующее, детоксицирующее и киллерное значение процессов меланогенеза беспозвоночных при контакте с патогенами ii , . Агглютинины. Способность лектинов связываться с углеводными детерминантами молекул на поверхности клетокмишеней обуславливает их участие в регуляции разнообразных межклеточных взаимодействий Королев, , , Изучение взаимодействий углеводсвязываклцих белков гемолимфы беспозвоночных с различными тестклетками i, , , i, i, , в том числе с бактериями ii, , , i, , паразитическими протистами i . Способностью связывать чужеродные молекулы и клетки по типу гидрофобных взаимодействий обладают липопротеины, например, аполипофорин III гемолимфы i те Пап На, не содержащий гликозилированных участков Ii . Взаимодействие аполипофорина III i с рядом бактериальных липоиолисахаридов ЛПС также позволяет предположить участие этого белка в распознавании чужого Ii, , i . Лектины и другие белки, вызывающие аггрегацию эритроцитов и других типов тестклеток, объединяют под общим названием агглютинины Глупов, . К настоящему времени из различных насекомых выделено свыше 0 белковых соединений, обладающих антибактериальной активностью . Цитотоксическое действие данных соединений по отношению к микроорганизмам и другим клеткаммишеням осуществляется различными способами, их активность преимущественно направлена на дестабилизацию клеточной оболочки за счет гидролиза полимеров клеточной стенки лизоцим, нарушения ионного градиента дефензины, цекропины, харибдотоксин или взаимодействия с кардиолипинами плазматической мембраны сапецины Глупов и Бахвалов, . Глупов, Бахвалов, . Детоксицирующая и антиоксидантная система. АФК и азота, в организме хозяина i . Для обезвреживания и удаления потенциально опасных для насекомого соединений большое значение могут иметь ферментативные Серебров, ii . Салтыкова, , Барабой, системы детоксикации ксенобиотиков и свободных радикалов Ферменты, такие как эстеразы, сульфатазы, амидазы и пр. Белан и Мельников, Точная роль подобных соединений в системе защиты беспозвоночных не определена. Функционирование детоксицирующих ферментов подробно изучено при моделировании микозов и повреждения покровов насекомых Серебров, , . Основные реакции клеточного иммунитета включают фагоцитоз, инкапсуляцию чужеродных тел и инфильтрацию зараженных тканей V, , , i, Глупов, Бахвалов, . Эти реакции позволяют локализовать и обезвредить клетки паразитов и опухолей, чужеродные молекулы а в экспериментальных условиях по моделированию контакта с инородным телом абиотический материал, коллоидные частицы Тыщенко, , ii . Способностью фагоцитировать обладает широкий спектр клеток внутренней среды организма беспозвоночных адипоциты и мицетоциты, эноциты, перикардиальные, эпителиальные и фолликулярные клетки Сагауоп, , i, , Глупов, Бахвалов,
Захват мелких частиц, обладающих признаками чужого, осуществляемый свободноциркулирующими и прикрепленными гемоцитами, приводит к их изоляции в фагосомах и деградации под действием лизосомальных ферментов, активирующихся в кислой среде фаголизосомы, образующейся при слиянии фагосом с лизосомами , i i, . Глупов и др. Начальные этапы клеточных защитных реакций гемолимфы насекомых характеризуются образованием клампов агглютинировавших клеток крови, и дегрануляцией гранулоцитов, выделяющих коагулоген, лизоцим, компоненты проФО системы и хемотакгические факторы, привлекающие в очаг воспаления плазматоциты Глупов и др. Галактионов, . При повреждении покровов и контакте внутренней среды организма с чужеродным материалом возникает комплекс взаимосвязанных защитных реакций. На первом этапе свободноциркулирующие клетки крови гемоциты беспозвоночных осуществляют распознавание чужого и адгезируют к поверхности чужеродных тел i, Активированные гемоциты, реагирующие на повреждение, проявляют адгезивные свойства, мифационную активность и изменения ферментативной активности , , Глупов, , Лозинская и др. Сходным образом гемоциты реагируют на повреждение в отсутствие патогенов и чужеродных тел других типов, например, в эксперименте на инъекцию стерильного физиологического раствора , Глупов, Лозинская и др. Глупов, .