Влияние паразитической инвазии на формирование клеточного иммунного ответа насекомых на примере личинок стрекоз рода Aeschna (отряд odonata)

• Автор: Крюкова, Наталья Анатольевна
• Шифр специальности: 03.00.09
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 143 с. : ил.

Оглавление
Введение

Глава 1 Литературный обзор

1.1 Классификация гемоцитов

1.2 Роль гемоцитов в иммунном ответе насекомых

1.2.1 Фагоцитоз

1.2.2 Гранулообразование и капсулообразование

1.3 Гуморальный иммунитет

1.3.1 Агглютинирующая система

1.3.2 Коагуляция

1.3.3 Фенолоксидазная система

1.4 Генерация активированных кислородных метаболитов у насекомых
1.5 Влияние паразитической инвазии на иммунный ответ насекомых
1.6 Заключение
Глава 2 Материалы и методы
2.1 Насекомые
2.2 Паразитологический анализ
2.3 Сбор гемолимфы и получение суспензии гемоцитов
2.4 Идентификация типов гемоцитов при помощи световой микроскопии
2.5 Идентификация гемоцитов с помощью хлортетра
циклина
2.6 Флуорохромирование растительных лектиыов и использование их в идентификации гемоцитов
2.7 Определение агглютинирующей активности гемолимфы
2.8 Получение фракций гемолимфы с агглютинирующей актизностью
2.9 Получение поликлональной антисыворотки к агглютининам гемолимфы
2. Выявление агглютининов в гемоцитах
2. Электронная микроскопия гемоцитов
2. Выделение бактерий из гемоцитов
2. Аффинная хроматография
2. Электрофоретическое разделение белков
2. Электрофоретический перенос в сочетании с иммунноферментным анализом
2. Инъецирование стрекоз бактериальными клетками и суспензией сефадекса
2. Инъецирование стрекоз цистами трематод
2. Регистрация фенолоксидаз в клетках крови
2. Регистрация активированных кислородных метаболитов в клетках крови
Глава 3 Результаты
3.1 Морфофункциональная дифференциация
гемоцитов
3.2 Агглютинины
3.3 Паразиты личинок стрекоз рода АезсЬ.па
3.3.1 Бактериальные инфекции
3.3.2 Микроспоридии
3.3.3 Трематоды Заключение Выводы
Список литературы


И. Юрловой за помощь при определении паразитологического материала, к. Ю.Я. Соколовой за помощь при идентификации паразитологического материала и проведение электронной микроскопии, к. И. М. Дубовскому и к. В.В. Мартемьянову за помощь при проведении исследований, к. С.А. Бахвалову и к. М.Ф. Хвощевской за обсуждение рукописи и ценные критичкские замечания. В формировании клеточного иммунного ответа насекомых участвуют клетки кроветворной ткани, перикардиальные клетки, а также фиксированные и свободноциркулирующие клетки лимфы гемоциты, выполняющие ключевую роль в иммунном ответе насекомых и являющиеся клетками мезодермального происхождения. Гемоциты участвуют в процессах жизнедеятельности организма з метаморфозе, синтезе ряда ферментов, дифференцировке тканей и т. Популяция их неоднородна не только по морфологическим, но и по функциональным критериям, что может быть связано как со степенью зрелости клеток, так и с выполняемыми функциями i, . К настоящему зремени можно насчитать до названий типов клеток насекомых, но за ними часто скрывается та или иная модификация клетки, связанная с видом исследуемого насекомого, его возрастом или физиологическим состоянием. Кроме того, идентификация клеток может быть затруднена в случае не ярко выраженных признаков определенного типа, либо в том случае, когда проявляются признаки нескольких типов клеток. i, , . Рг, плазматоциты Р1 , зноцитоиды Ое , сферулоциты , тромбоцитоиды и 4 типа гранулодитов I, II, III, IV . В работе авторы опирались как на морфологические и ультраструктурные характеристики, так и на функциональные особенности клеток. Как показывает опыт, использование исключительно данных характеристик при определении клеток, явно не достаточно. В настоящее время при идентификации клеток крови используются как цитохимические маркеры наличие ферментативной активности, так и иммунохимические моноклональные и поликлональные антитела к компонентам клеточных мембран гемоцитов. Данные маркеры используются наряду с морфофункциональными критериями при классификации клеток i , i, . В своей работе мы используем адаптированный вариант классификации по работам iе , , i и . Прогемоциты Рг небольшие, округлые клетки 26 мкм , с большим ядром, множеством свободных рибосом и хорошо различимым шероховатым эндоплазматическим ретикулом . Для них характерен высокий митотический индекс и вероятно Рг, являются предшественниками всех дальнейших типов клеток. Плазматоциты Р1 агранулярные или с незначительным количеством гранул клетки. Для обоих типов характерно наличие большого числа свободных рибосом и хорошо развитого . Для плазматоцитов характерно также, наличие лизосом и мультивезикулярных тел в цитоплазме. Е обоих типах гемоцитов регистрировали кислую фосфатазу и неспецифические эстеразы i, . Все плазматоциты способны к фагоцитозу и активно участвуют в процессах грануло и капсулообразования. Отличительной чертой Р1 является высокая адгезивная способность. Гранулоциты слегка вытянутые клетки 67 мкм х 89 мкм с округлым ядром45мкм, в цитоплазме содержится большое количество гранул, митохондрий, мультивезикулярных тел,, свободных рибосом. Гранулоциты участвуют в процессах инкапсуляции и фагоцитоза. В клетках данного типа отмечают активность кислой фосфатазы и неспецифических эстераз i, . Иногда из этого типа клеток выделяют коагулоциты Со округлые клетки в пределах 9 мкм в диаметре, отличающиеся меньшим количеством гранул. В цитоплазме Со была зарегистрирована фенолоксидазная активность i . Основная функция и Со участие в процессах коагуляции и капсулообразования. Эноцитоиды Ое крупные клетки мкм , овальные или сферические с небольшим ядром35 мкм. В цитоплазме содержится большое количество свободных рибосом, и малое количество митохондрий, а также слабо развит аппарат Гольджи и . В цитоплазме Ое встречаются гранулярные включения.