Экспресс-диагностика неклостридиальных анаэробных инфекций иммунофлюоресцентным методом

• Автор: Хлопунова, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 197 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ
ГЛАВА 1 ХАРАКТЕРИСТИКА НЕКЛОСТРИДИАЛЬНЫХ АНАЭРОБОВ И ЭКСПРЕССНЫХ МЕТОДОВ ИХ ОБНАРУЖЕНИЯ обзор литературы

1.1 Классификация семейства Ваего1с1асеае.

1.2 Морфологические, культуральные и ферментативные

свойства

1.3 Неклостридиальные анаэробы представители

нормальной флоры человека .

1.4 Роль неклостридиальных анаэробов как этиологическо

го фактора гнойносептических заболеваний .

1.5 Факторы патогенности

1.6 Антигенная структура бактероидов
1.7 Получение гипериммунных сывороток
1.7.1 Выбор животныхпродуцентов иммуноглобулинов .
1.7.2 Получение антигенов и выбор схемы иммунизации
1.8 Экспрессметоды обнаружения бактероидов
1.8.1 Реакция агглютинации
1.8.2 Реакция непрямой гемагглютинации
1.8.3 Иммунофлюоресцентиый метод.
1.8.4 Иммуноферментный метод
1.8.5 Реакция коагглютинации4
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ4
2 .1 Материалы.4
2.1.1 Микроорганизмы.
2.1.2 Питательные среды4
2.1.3 Технические средства для культивирования неклостридиальных анаэробов4
2.1.4 Животные
2.1.5 Характеристика обследованных больных
2.2 Методы исследований
2.2.1 Методы получения гипериммунных сывороток к антигенам В.Тгадв и Р.шеапподепса .
2.2.2 Методика получения флюоресцирующих антител к
В.гадз
2.2.3 Взятие, доставка и исследование клинических
материалов
2.2.4 Статистическая обработка полученных результатов
ГЛАВА 3. ОБОСНОВАНИЕ ОПТИМАЛЬНОЙ СХЕМЫ ИММУНИЗАЦИИ ЖИВОТНЫХПРОДУЦЕНТОВ СПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИТЕЛ ПРОТИВ НЕКЛОСТРИДИАЛЬНЫХ АНАЭРОБОВ.
3.1 Получение биомассы В.гадз и Р.шеапподепса
и приготовление из не антигенов
3.2. Обоснование оптимальной схемы иммунизации
животных.
3.2.1 Иммунизация кроликов
3.2.2 Иммунизация мышей
3.3 Заключение.7
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ СПЕЦИФИЧНОСТИ И ЧУВСТВИТЕЛЬНОСТИ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО АНАЛИЗА КАК МЕТОДА ВЫЯВЛЕНИЯ НЕКЛОСТРИДИАЛЬНЫХ АНАЭРОБОВ
4.1 Специфичность.
4.1.1 Специфичность кроличьих сывороток.
4.1.2 Специфичность кроличьих иммуноглобулинов . .
4.1.3 Специфичность ИАЖ мышей 8
4.2 Чувствительность
4.2.1 Чувствительность НМФА на основе иммунных
сывороток крови кроликов.
4.2.2 Чувствительность НМФА па основе иммунных асцитических жидкостей мышей
4.2.3 Чувствительность ПМФА.
4.3 Сравнительная оценка диагностической эффективности экспериментального и коммерческого конъюгатов в ПМФА.
4.4 Сравнительная оценка эффективности прямого и непрямого методов иммунофлюоресцентного выявления ВДгадШэ в пробах.
4.5 Сравнительная оценка диагностической эффективности бактериологического и иммунофлюоресцентного методов
4.5.1 Диагностическая эффективность при экспозиции проб в анаэробных и аэробных условиях. . . .
4.5.2 Влияние на диагностическую эффективность присутствующих в пробе фагоцитов.
4.5.3 Особенности обнаружения неклостридиальных
анаэробов при их ассоциации с другими видами микроорганизмов .
4.6 Заключение
ГЛАВА 5. ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ИММУНОФЛЮОРЕСЦЕНТНОГО
МЕТОДА ВЫЯВЛЕНИЯ НЕКЛОСТРИДИАЛЬНЫХ АНАЭРОБОВ В КЛИНИЧЕСКИХ МАТЕРИАЛАХ.
5.1 Исследования материалов от больных с гнойносептическими процессами.
5.1.1 Сравнительная эффективность иммунофлюоресцентного и бактериологического методов. . .
5.1.2 Сравнительная оценка эффективности НМФА и
5.1.3 Эффективность исследования клинических материалов, инфицированных бактероидами в ассоциации с другими видами микроорганизмов
5.1.4 Эффективность исследования клинических материалов, содержащих фагоциты .
5.2 Исследование материалов от больных дизентерией .
5.3 Тестирование активности неклостридиальных анаэробов в инфекционном процессе.
5.4 Заключение. . .
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


По теме диссертации опубликовано научных работы, внедрено 3 рационализаторских предложения. По результатам исследования разработаны и утверждены Начальником ГВМУ МО РФ Методические рекомендации по выявлению и идентификации возбудителей анаэробной хирургической инфекции неклостридиальной природы с помощью непрямого варианта иммунофлюоресцентного анализа , Методические рекомендации по микробиологической диагностике раневых инфекций в лечебнодиагностических учреждениях армии и флота . Методические рекомендации по ускоренному выявлению и идентификации неклостридиальных анаэробов прямым методом иммунофлюоресцентного анализа находятся в стадии утверждения. Разработанные и апробированные нами в практике препараты для постановки прямого и непрямого вариантов иммунофлюоресцентного анализа с целью выявления неклостридиальных анаэробов применяют в клиниках Военномедицинской академии МО РФ при осуществлении научноисследовательской и лечебнодиагностической работы. Работа выполнена в соответствии с тематическим планом научноисследовательских работ ГВМУ МО РФ и НИИ ВМ МО РФ. Список литературы включает источник отечественных авторов и 2 источника зарубежных авторов. В диссертации приведены таблиц и 5 рисунков. Каждый из этих родов включал в себя по несколько видов и подвидов бактерий. В последующем род ii был исключн из этого семейства 3 . Vi ,. Из всех неспорообразующих анаэробов, входящих в семейство i, наибольшее клиническое значение имеют два вида i ii и v ii, которые вызывают до 0 гнойносептических инфекций различной локализации , , , 8, , , . Систематика неклостридиальных анаэробов, основанная на иммунологических данных, учитывает наличие в капсульном материале как общеродовых, так и общевидовых антигенов. Это позволило некоторым авторам 0 разбить вид В. Таблица 1. Другие авторы, на основании результатов реакции агглютинации с выделенными от больных анаэробами рода Ваего1с1е5 более 0 штаммов , разделили их на семь групп А, В, С, Б, Е1, Е2, Е1Е2 , , 9, табл. Таблица 1. В. Ы1еЪал. Ъатл. Наблюдавшиеся при этом незначительные перекрестные реакции дали авторам основание предположить возможность проведения дальнейшего совершенствования классификации. В последующем было установлено, что В. А, . В, Ви1даЬиз серотипу С, В. Иазоп1э серотипу И, В. Е1, Е2, Е1Е2 6, 7. Причем, серотипы Е1, Е2 и Е1Е2, как считают эти авторы, представляют собой весьма гетерогенную группу. Гетерогенность ВгадШэ доказана биохимическими и серологическими исследованиями, из которых следует, что штаммов группы БЛгадШв принадлежит к серотипу Е1Е2. При этом антиген Е определяет патогенность возбудителя. Таким образом, как видно из вышеизложенного, классификация неклостридиальных анаэробов еще не устоялась и постоянно подвергается пересмотру и совершенствованию , 7, 1, 3. Бактерии рода Ваего1с1ез являются плеоморфными, грамотрицательными неспорообразующими палочками с закругленными концами. Некоторые штаммы образуют капсулу. Неподвижные или двигающиеся с помощью леритрихальных жгутиков. Хемоорганотрофы. Метаболизируют углеводы и пептоны. Продуктами брожения у несахаралитических видов являются янтарная, молочная, уксусная, муравьиная и пропионовая кислоты, иногда спирты . Все виды данного рода облигатные анаэробы. Окисление питательной среды тормозит их рост, а добавление сыворотки крови стимулирует , 7, . Колонии белые, сероватожемчужные, ровные, выпуклые. В. ii ферментируют глюкозу, рамнозу, трегалозу. Обладают каталазной активностью, большинство штаммов разжижают желатину, восстанавливают эскулин и не восстанавливают нитраты в нитриты, устойчивы к желчи 8 . Молодые колонии беловатопрозрачные 0, мм в диаметре, старые колонии коричневого или черного цвета. Анаэробные неспорообразующие микроорганизмы являются одними из основных представителей нормальной флоры человека 9, 3, 9, 5. Главное место их обитания пищеварительный тракт. В полости рта встречаются практически все клинически значимые возбудители, главной экологической нишей которых являются десневые карманы. Соотношение количества аэробов к количеству анаэробов в слюне составляет .