Структурно-функциональная организация и генно-инженерная модификация липополисахарида Yersinia pestis

• Автор: Шайхутдинова, Рима Завдатовна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 128 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ, СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ

ВВЕДЕНИЕ Ю

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 ИСТОРИЯ ОТКРЫТИЯ ЛПС

1.2. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ.

1.3. ФИЗИКОХИМИЧЕСКИЕ И БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЛПС

1.4. СТРУКТУРА МОЛЕКУЛ ЛПС

1.5. ХИМИЧЕСКАЯ И ГЕННОИНЖЕНЕРНАЯ МОДИФИКАЦИЯ ЛПС

1.6. ЗАКЛЮЧЕНИЕ ПО ОБЗОРУ ЛИТЕРАТУРЫ

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. ШТАММЫ МИКРООРГАИЗМОВ
2.2. ПЛАЗМИДЫ.
2.3. СРЕДЫ И УСЛОВИЯ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ
2.4. БАКТЕРИОФАГИ.
2.5. ЛАБОРАТОРНЫЕ ЖИВОТНЫЕ
2.6. ГЕННОИНЖЕНЕРНЫЕ МАНИПУЛЯЦИИ.
2.6.1. КОНСТРУИРОВАНИЕ ПЛАЗМИДЫ, СОДЕРЖАЩЕЙ ДЕФЕКТНЫЙ
ГЕН 1рхМ
2.6.2. ПОЛУЧЕНИЕ ШТАММОВ У. рехИз, СОДЕРЖАЩИХ ДЕФЕКТНЫЙ
ГЕН 1рхМ
2.6.3. КОМПЛЕМЕНТАЦИЯ ШТАММА . i, СОДЕРЖАЩЕГО
ДЕФЕКТНЫЙ ГЕН Ix.
2.7. БИОХИМИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
2.7. . МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛПС.
2.7.2. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИМЕСЕЙ В ПРЕПАРАТАХ ЛПС.
2.7.3. МЕТОДЫ ХИМИЧЕСКОГО АНАЛИЗА
2.7.4. МЕТОДЫ БИОФИЗИЧЕСКОГО АНАЛИЗА СТРУКТУРЫ ЛПС
2.7.5. ХИМИЧЕСКАЯ МОДИФИКАЦИЯ ЛПС
2.8. ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКИЕ МЕТОДЫ
2.8.1. ОПРЕДЕЛЕНИЕ Ш ПРЕПАРАТОВ ЛПС . i
2.8.2. СРАВНЕНИЕ ИММУНОГЕННОЙ АКТИВНОСТИ ИСХОДНОГО И
МУТАНТНОГО ШТАММОВ . i.
2.8.3 ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОДУКЦИИ
2.8.4. СРАВНИТЕЛЬНАЯ ОЦЕНКА БЕЛКОВОГО ПРОФИЛЯ ШТАММОВ,
. i
2.8.5. СКРИНИНГ АНТИСЫВОРОТОК
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ.
3.1 ЗАВИСИМОСТЬ ХИМИЧЕСКОЙ СТРУКТУРЫ ЛПС
ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РАЗЛИЧНЫХ ВНУТРИВИДОВЫХ ГРУПП i ОТ ТЕМПЕРАТУРЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ.
3.2. ЗАВИСИМОСТЬ ЭНДОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛПС ОТ ЕГО СТРУКТУРЫ.
3.3. ГЕННОИНЖЕНЕРНАЯ МОДИФИКАЦИЯ СТРУКТУРЫ ЛПС
ii i
3.3.1. КОНСТРУИРОВАНИЕ ШТАММОВ . i, ДЕФЕКТНЫХ НО ГЕНУ
3.3.2. СТРУКТУРА ЛПС ШТАММА . i, СОДЕРЖАЩЕГО ДЕЛЕЦИЮ
В ГЕНЕ Ix.
3.3.3 КОМПЛЕМЕНТАЦИЯ ШТАММА . i ЕУНШЭГМрхМ
ПЛАЗМИДОЙ 9Ix.
3.3.4. ВЛИЯНИЕ ДЕЛЕНИИ В ГЕНЕ Ix НА БИОЛОГИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ВИРУЛЕНТНЫХ И АТТЕНУИРОВАННЫХ ШТАММОВ
i
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ИСТОЧНИКОВ


Сгр. Глава 1. МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ОЧИСТКИ. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ. Глава 2. ПЛАЗМИДЫ. БАКТЕРИОФАГИ. ГЕННОИНЖЕНЕРНЫЕ МАНИПУЛЯЦИИ. ПОЛУЧЕНИЕ ШТАММОВ У. КОМПЛЕМЕНТАЦИЯ ШТАММА . ДЕФЕКТНЫЙ ГЕН Ix. . МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ ЛПС. ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРИМЕСЕЙ В ПРЕПАРАТАХ ЛПС. ОПРЕДЕЛЕНИЕ Ш ПРЕПАРАТОВ ЛПС . МУТАНТНОГО ШТАММОВ . Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ. ПРЕДСТАВИТЕЛЕЙ РАЗЛИЧНЫХ ВНУТРИВИДОВЫХ ГРУПП i ОТ ТЕМПЕРАТУРЫ КУЛЬТИВИРОВАНИЯ. ЗАВИСИМОСТЬ ЭНДОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ЛПС ОТ ЕГО СТРУКТУРЫ. КОНСТРУИРОВАНИЕ ШТАММОВ . Ix. СТРУКТУРА ЛПС ШТАММА . В ГЕНЕ Ix. КОМПЛЕМЕНТАЦИЯ ШТАММА . ПЛАЗМИДОЙ 9Ix. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. ВЫВОДЫ. СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ согласно М. и . vi . ИНИПЧИ СДВ Иркутский научноисследовательский противочумный инсти тут Сибири и Дальнего Востока ИОХ РАН Институт органической химии им. Н.Д. x миристоилтрасфераза ii i у . Дгидроксимиристиновых кислот в Е. АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Липополисахариды ЛПС специфические компоненты внешней мембраны грамотрицатсльных бактерий, в значительной степени обусловливающие физикохимические и биологические свойства бактериальных клеток. ЛПС обеспечивает целостность и стабильность мембраны, ее нормальное функционирование селективную проницаемость, межклеточные взаимодействия i О. Кроме того, эти молекулы играют существенную роль во взаимоотношениях паразитхозяин и являются одним из основных факторов патогенности грамотринательных бактерий . . Молекулы ЛПС, как правило, состоят из липида, называемого липидом А, который ковалентно связан с гетерополисахаридными цепями, включающими две субструктуры коровые олигосахариды непосредственно связаны с липидом А и Оспецифическис цени, которые представляют собой повторяющиеся олигосахаридные единицы. Такой тип структуры придает ЛПС амфифильный характер изза гидрофобное липида А и гидрофильное гетерополисахаридных цепей i . Липид А часть молекулы ЛПС, ответственная за его эндотоксическую активность, то есть способность вызывать эндотоксичсский шок, возникающий в результате лавинообразной экспрессии провосиалительных цитокинов, основным из которых является . i А. i С. К настоящему времени получены данные, свидетельствующие о зависимости эндотоксической активности ЛПС для млекопитающих от количества, длины, степени насыщенности жирнокислотных остатков, а также наличия фосфатных групп в липидной чаези молекулы ЛПС. Показано, что максимальной эндотоксической активностью обладает ЛПС с дифосфорилированным липидом А, состоящим из двух р1,6связанных остатков глюкозамина, ацилированный шестью жирными кислотами i Е. Н.