Совершенствование серологической диагностики легионеллеза

• Автор: Карбышев, Гериард Львович
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Докторская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Ростов-на-Дону
• Количество страниц: 0 с. : 301 ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. СЕРОЛОГИЧЕСКАЯ ДИАГНОСТИКА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗА ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Характеристика возбудителя, экология и таксономическое положе ние

1.2. Антигенная структура и структурнофункциональная организация факторов патогенности . i
1.3. Распространение представителей рода i среди человече ской популяции и в объектах окружающей среды

1.4. Серологическая диагностика легионеллеза

1.4.1. Реакция непрямой иммунофлюоресценции

1.4.2. Иммуноферментный анализ

1.4.3. Реакция микроагглютинации

1.4.4. Реакция непрямой гемагглютинации
1.4.5. Реакция латексной агломерации
1.4.6. Радиоиммунный анализ
1.4.7. Реакция прямой иммунофлюоресценции
1.4.8. Иммунохроматографический анализ
1.4.9. Реакция агглютинации
1.4 Реакция коагглютинации
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ АНТИГЕННОЙ СТРУКТУРЫ . i
3.1. Изучение белков . i серогрупп
3.2. Изучение белковых антигенов i серогрупп
3.3. Изучение ЛПС антигенов . i серогрупп
ГЛАВА 4. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ИСПЫТАНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНОГО СЕРОГРУППЫ 1 АНТИГЕННОГО ПОЛИМЕРНОГО СУХОГО ДЛЯ РАО
4.1. Получение и характеристика полимерного носителя
4.2. Подбор условий получения растворимого легионеллезного антигена в качестве сенситина и его характеристика
4.3. Получение диагностикума легионеллезного серогруппы 1 антигенного полимерного сухого для РАО
4.4. Экспериментальные исследования диагностикума легионеллезного серогруппы 1 антигенного полимерного сухого
4.5. Исследования больных с острыми заболеваниями органов дыхания с помощью диагностикума легионеллезного серогруппы 1 антигенного полимерного сухого
4.6. Изучение длительности сроков хранения диагностикума
4.7. Государственные испытания диагностикума легионеллезного серогруппы I антигенного полимерного в ГИСК им. Л.А. Гарасевича
4.8. Свойства диагностикума выявлять антитела к . i других серогрупп
ГЛАВА 5. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ИСПЫТАНИЯ ДИАГНОСТИКУМА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНОГО СЕРОГРУППЫ I ИММУНОГЛОБУЛИНОВОГО ПОЛИМЕРНОГО СУХОГО
5.1. Получение кроличьих легионеллезных сывороток
5.2. Конструирование диагностикума легионеллезного серогруппы 1 иммуноглобулинового полимерного сухого для РАО
5.3. Экспериментальные исследования диагностикума
5.4. Испытания диагностикума легионеллезного серогруппы 1 иммуноглобулинового полимерного
ГЛАВА 6. КОНСТРУИРОВАНИЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫЕ ИСПЫТАНИЯ НАБОРА ЛЕГИОНЕЛЛЕЗНЫХ СЕРОГРУПП 1 7 КОАГГЛЮТИНИРУЮЩИХ ДИАГНОСТИКУМОВ
6.1. Получение стафилококкового реагента
6.2. Получение гипериммунных кроличьих сывороток против . i серогрупп
6.3. Конструирование набора легионеллезных серогрупп 1 7 коагглютинирующих диагностику мов
6.4. Изучение специфичное набора легионеллезных серогрупп 1 7 коагглютинирующих диагностикумов
ГЛАВА 7. КРИТЕРИИ СЕРОЛОГИЧЕСКОЙ ДИАГНОСТИКИ ЛЕГИОНЕЛЛЕЗА
7.1. Диагностическая ценность методов выявления антител
7.2. Диагностическая ценность методов выявления антигенов
7.3. Анализ критериев диагностики болезни легионеров
7.4. Алгоритм диагностики легионеллеза
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Авторы показали, что если не применять редуцирующих агентов, то в составе МОМР определяется пептидогликан. В то время как в присутствии указанных агентов МОМР теряет в молекулярной массе. Аналогичные данные о связи МОМР и пептидогликана представлены в исследованиях . Впервые показано, что без применения редуцирующих агентов выделяется высокомолекулярный белковый комплекс с молекулярной массой , состоящий из четырех субъединиц с молекулярной массой . МОМР был очищен и получена кроличья поликлональная сыворотка. В иммуноблоттинге с применением полученной сыворотки полоса МОМР с молекулярной массой определялась у . Авторы показали, что антигенный комплекс МОМР присутствует как у вирулентных, так и у авирулентных штаммов легионелл. Дальнейшие исследования показали, что МОМР ковалентно связан с пептидогликаном через якорный белок с молекулярной массой . Якорный белок в свою очередь связан с субъединицей МОМР через дисульфидные связи. Не денатурированная молекула МОМР в электрофорезе имеет молекулярную массу приблизительно 0 и под воздействием редуцирующих агентов диссоциирует на мономеры с молекулярными массами и в соотношении или , , . Авторы клонировали структурный ген . Ген состоит из отрытой рамки считывания длиной 1 пар оснований и определяет синтез полипептида из 6 аминокислот. Установлено, что ДНК гена высококонсервативна и указанный ген представлен у всех серогрупп . Анализ литературы свидетельствует о том, что МОМР выполняет ряд важных функций для нормальной жизнедеятельности бактериальной клетки. Главной функцией МОМР является его поринобразующая способность. Кроме того, МОМР участвует в процессах распознавания, прикрепления и поглощения . М. . В присутствии комплемента МОМР обеспечивает прикрепление i к человеческим моноцитам и макрофагам i . М, . При формировании протективного иммунитета отмечается слабый серологический и выраженный клеточный иммунный ответ против МОМР . Таким образом, МОМР является родоспецифическим белком . Жгутиковый антиген . Наличие жгутикового аппарата у . В.М. Р . Значение жгутиков как факторов вирулентности установлено . КОЕмл для морских свинок, в то время как для штаммов . КОЕмл. При электронномикроскопическом исследовании культуры . При электрофорезе препаратов жгутиков отмечалась единственная полоса с молекулярной массой . В реакции агглютинации, антифлагеллярная сыворотка, полученная к . С и культурами i после пассажей на твердой питательной среде. Аминокислотный состав жгутиков . Жгутики всех трех серогрупп имеют сходный аминокислотный состав. К. Анализ нуклеотидной последовательности клонированного гена позволил установить наличие открытой рамки считывания длиной нуклеотидов. Ген кодирует белок, состоящий из 5 аминокислот с молекулярной массой ГОа. Сравнительный анализ аминокислотной последовательности белка . Стерминальных последовательностей, что свидетельствует о консерватизме белковой структуры жгутиков. СконструированныйуаЛспецифичсский ДНК зонд гибридизировался с ДНК не только . ДНК других видов рода i. М. . Кроме того, показано, что процесс синтеза жгутика у . К. . Показано, что экспрессия и сборка жгутика у . В то же время показано, что для непосредственного внутриклеточного размножения наличие жгутика не требуется i . Сконструированы жгутиковые и без жгутиковые мутанты . Н vii и линии человеческих макрофагов 7. Отмечено, что у безжгутиковых форм существенно замедлялось внутриклеточное размножение в клетках Н vii и прекращалось на линии 7. У жгутиксодержащих штаммов нарушения внутриклеточного размножения не отмечено ни в одной из моделей. Авторы полагают, что жгутик не является необходимым фактором вирулентности, однако, его экспрессия требуется для инфицирования простейших и фагоцитирующих клеток человека. Авторы показали, что антифлагеллярная сыворотка против серогруппы 1 в РИФ и иммуноблотгинге выявляла из коллекционных штаммов серогрупп 1 , а также из штаммов других видов легионелл. Авторы полагают, что взаимодействие штаммов . Введение в безжгутиковые штаммы . Кокультивирование жгутиковых штаммов .