Симбиоз Burkholderia cenocepacia с почвенными простейшими в разных экологических условиях

• Автор: Каминская, Анастасия Александровна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2007
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил.

Оглавление
Введение

Обзор литературы

Глава 1. Симбиоз с простейшими как стратегия существования патогенных

бактерий в почвах и водоемах

1.1. Общие сведения об экологии свободноживущих простейших и патогенных

бактерий
1.2. Ультраструктурныс закономерности внутриклеточного паразитизма бактерий в простейших.
1.3. Некоторые молекулярногенетические механизмы паразитизма патогенных бактерий в простейших

1.4. окоящиеся некультивируемые формы патогенных бактерий.

Глава 2. Голь бактсриалыюпротозойиых ассоциаций в формировании

биопленок
Глава 3. Материалы и методы исследований
3.1. Культивирование и идентификация Вигк1ю1бепа сепосераша.
3.2. Культивирование инфузорий
3.3. Совместное культивирование ВигкЪоШепа сепосерааа и ТеЦаЬутспа рупГотш
3.4. Количественный учет ВигкЪоМспа сепосераша и ТеЦаЬушепа рулГотиБ .
3.5. Подготовка проб и постановка полимеразной цепной реакции ПЦР
3.6. Постановка протистоцидпого теста для оценки гетерогенности популяции
ВигкЬоУепа сепоссраша по признаку цитопатогенности.
3.7. Конфокальная лазерная сканирующая микроскопия для ультраструктурного
анализа бакгериальнонротозойной ассоциации
3.8. Статистическая обработка результатов.
Результаты исследований
Глава 4. Вегетативные и покоящиеся формы в популяции ВигМюМепа
сепосераиа в процессе взаимодействия с простейшими
4.1. Моделирование бактериальиопротозойной ассоциации в искусственных и естественной средах.
4.2. Влияние абиотических температура и и биотических простейшие факторов на переход буркхолдерий в покоящееся некультивируемое состояние.
4.3. Адаптивная изменчивость популяции В.сепосерааа и условия длительной резервации покоящихся форм
Глава 5. Роль ассоциации простейших Те1гаЬутепа рупрЬогпш и
бактерий ВпгкЬоШепа сспоссрана в формировании биопленок
5.1. Свойства исходного штамма В. сепосераЫа 0 и его изогенных
5.2. Технология получения биопленок в ассоциации ВигкЬоЫепа сепосерааа и
ТеЦаЬушепа рупГогпнз
5.3. Качественная оценка сформировавшихся биопленок
5.4. Количественная оценка планктонных популяций бактерий и инфузорий
Глава 6. Ультраструктуриын анализ ассоциации ТЧДгайутепа ругйогпш и ВигкЬо11епа сепосерааа в биопленке с помощью конфокального
лазерного сканирующего микроскопа
Заключение.
Литература


Известно, что основным местообитанием псевдомонад и буркхолдерий в природе является ризосфера растений маис, пасленовые, лилейные, где они существенно влияют на другие виды за счет продукции антифунгальных, бактерицидных и антипротозойных веществ. Указывается на симбиотические связи этих возбудителей со свободноживущими почвенными простейшими, которые могут служить резервуарными хозяевами для возбудителей сапронозных инфекций, в том числе и для i i i Пушкарева В. И., . Оставалось неизвестным, способны ли i i переходить в покоящееся состояние и каковы абиотические и биотические факторы, участвующие в этом процессе. Сукачев В. Н., . Псевдомонады и экологически близкий им род i являются возбудителями болезней человека, животных и растений синегнойная инфекция, сап, мелиоидоз, гниль лука и др. Установлено, что бактерии способны колонизировать поверхности различных материалов, образуя биопленки . ., . ., i . i . ., . Доказана способность буркхолдерий формировать биопленки на пораженных органах и тканях Шагинян И. А., Данилина Г. Выявлены тесные биоценотические связи В. Пушкарева В. И., Пушкарева В. И. и др. Р. . . . Цель данной работы оценка возможности и условий перехода i i в некультивируемое покоящееся состояние, а также способности к формированию биопленок в сообществе с простейшими. Оценить структуру и численность популяции . Ш1Р. Определить возможность перехода . Изучить фенотипическую изменчивость основных свойств буркхолдерий в разных экологических условиях. Разработать методические подходы для получения и количественной оценки биопленок, формируемых бактериальнопротозойиым сообществом в искусственных и естественных средах. На ультраструктурном уровне с помощью конфокального лазерного сканирующего микроскопа КЛСМ продемонстрировать динамику взаимодействий буркхолдерий с фагоцитирующими простейшими и исход внутриклеточных событий в планктонных и биопленочных сообществах. Впервые описан переход В. Ыа в покоящееся некультивируемое состояние при взаимодействии с почвенными простейшими Т. Гогпш и в их отсутствие. Установлены динамика и сроки этого процесса при температурах, соответствующих холодному сезону в почвах умеренных широт. Выявлены не известные ранее изменения культуральноморфологических свойств, биохимической активности и пигментообразования вегетативных клеток буркхолдерий в разных экологических условиях. Впервые разработана оригинальная технология получения биопленок, сформированных бактериальнопротозойной ассоциацией на модели В. Т.рупйэгпнз и выявлена ведущая роль инфузорий в их образовании. Впервые с помощью КЛСМ детально охарактеризована в динамике ультраструктура планктонных и биопленочных неподвижных клеток бактерий и простейших. Установлен паразитохозяинный тип симбиотических отношений при обеих формах существования. Важная роль простейших в активной жизнедеятельности В. Ыа и их длительной резервации в объектах окружающей среды определяют целесообразность микробиологического анализа бактериалыюпротозойных ассоциаций при мониторинге как природных водоемов, так и объектов окружающей среды стационаров. ПЦР для выявления некультивируемых покоящихся форм буркхолдерий. ГУ НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи РАМН. Технология получения бактериальнопротозойных биопленок для ультраструктурного изучения методом КЛСМ может найти применение в научноисследовательских учреждениях, занимающихся проблемами симбиологии, экологии бактерий и простейших в природных экосистемах. Материалы диссертации представлены на VI международном конгрессе Экватек Вода экология и технология Москва, , на 1й и 2й Всероссийских научнопрактических конференциях молодых ученых и специалистов Окружающая среда и здоровье Суздаль, Рязань, , IX съезде Всероссийского научнопрактического общества эпидемиологов, микробиологов и паразитологов Москва, . Материалы диссертации используются при чтении лекций студентам кафедры инфектологии ГОУ ВПО ММА им. Сеченова. По результатам исследований опубликованы 6 работ.