Протеазная активность клинических штаммов клебсиелл, связанная с инактивацией секреторного иммуноглобулина А

• Автор: Агапова, Ольга Валерьевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 120 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. i i как возбудители

внутрибольничной инфекции.

1.2. Факторы патогенности i i

и их генетический контроль.

1.3. Ферменты патогенности и их роль

в развитии инфекционного процесса

1.3.1. Iпротеазная активность

различных видов бактерий

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Используемые штаммы, среды.
Микробиологические методы.
2.1. Определение Iпротсазной
активности клинических изолятов i i
2.2. Определение чувствительности к антибиотикам.
Генетические методы.
2.3. Конъюгативный перенос плазмид.
2.4. Анилиз штаммов на наличие плазмидной ДК
и условия проведения электрофореза в агарозном геле
2.5. Выделение плазмидной ДИК
Молекулярногенетические методы.
2.6. Элиминация плазмид из штаммов К.i.
2.7. Методика использования случайной амплификации полиморфной ДНК типирование применительно к бактериям рода i.
2.8. Полимеразная цепная реакция.
Методы изучения персистентных свойств штаммов с плазмидой протеазной активности и без нее в модельных опытах i viv и i vi.
2.9. Внутрибрюшинное заражение белых мышей.
2 Культура клеток Нер2.
2 Культура перитонеальных макрофагов морской свинки.
2 Определение натоморфологических изменений во внутренних органах при вну грибрюшннном
заражении мышей
Методы статистического анализа.
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Коллекция клинических штаммов i i
и их общая характеристика.
3.2. Частота встречаемости Iпротеазной
активности среди клинических изолятов К i
3.3. Выявление генов, контролирующих Iпротеазную активность,
у штаммов i i.
3.4. Распространение Iпротеазной активности
среди клинических штаммов различных видов бактерий
3.5. Внутривидовая дифференциация
с использованием типирования
Iпротеолитических штаммов i i.
3.6. Маркеры антибиогнкорезистентности
госпитальных штаммов i i
3.7. Природа генетического контроля Iпротеазной активности.
3.7.1. Передача плазмиды, несущей маркеры Iпротеазной активности
в конъюгативном скрещивании.
3.8 Роль плазмиды I в развитии инфекционного процесса.
3.8.1. Изучение плазмиды I, на модели
культуры клеток Нер2.
3.8.2. Изучение роли плазмиды I,
на модели перитонеальных макрофагов морской свинки
3 8 3 Изучение роли плазмиды I, в развитии инфекционного
процесса при внутрибрюшинном заражении мышей генетически связанной парой .ii
3.9 Модель генерализованной клебсиеллсзной инфекции
на белых мышах
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Провести генотипирование Iпротеазных штаммов с помощью метода случайной амплификации полиморфной ДНК типировання. На генетических связанных парах штаммов, отличающихся но наличию Iпротеазной активности, определить роль плазмиды, детерминирующей изучаемый признак, в развитии инфекционного процесса. Научная новизна. Установлено, что клинические штаммы . I. Впервые показано, что тены, детерминирующие признак Iпротеазной активности входят в состав сложной плазмиды. Продемонстрирована роль плазмиды, которая детерминирует протеазную активность, в развитии персистентной клебсиеллезной инфекции. Показана перспективност эпидемиологического маркирования различных клинических штаммов клебсиелл по профилю случайноамплифицированнон ДНК. Отработаны методы РАГА, ПЦР для определения у клинических штаммов различных видов бактерий Iпротеазной активности. Практическая значимость работы. Целесообразность выявления Iпротеазной активности у клинических штаммов клебсиелл определяется способностью таких изолятов обуславливать формирование затяжного инфекционного процесса. Для тестирования нротеолитичсских госпитальных штаммов клебсиелл предложен быстрый метод скрининга большого числа изолятов в очаге клебсиеллезной инфекции и эпидемиологического маркирования изолятов с помощью полимеразной цепной реакцией и типирования. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Начальным этапом инфекционного процесса является колонизация бактериями открытых полостей макроорганизма. В большинстве случаев этот этап проходит незамеченным, бессимптомно. Далее в зависимости от патогенности возбудителя и восприимчивости хозяина он может привести к развитию инфекционного заболевания, бактерионосительства или закончиться элиминацией микроорганизма . В этот момент микроб взаимодействует с клеточными и гуморальными защитными механизмами хозяина. Патогенные и условно патогенные бактерии используют различные механизмы для защиты, в том числе и ферменты секрстируемые энзимы бактериальной природы, подавляющие иммунные факторы защиты хозяина 5,. Поэтому исследование данной проблемы, связанное с поиском секретируемых факторов патогенности бактерий, позволяющих избежать механизмов защиты, имеет как теоретическое, так и прикладное значение, но еще многие вопросы остаются не до конца ясными 6, . Ниже в связи с рассматриваемой проблемой мы анализируем данные литературы, касающиеся роли клебсиелл при развитии форм инфекционного процесса и данные об известных факгорах патогенности клинических штаммов клебсиелл, включая протеолитические ферменты, участвующие в колонизации эпителия, обеспечивающие устойчивость к гуморальным факторам защиты макроорганизма и способность размножаться i viv. На протяжении последних десятилетий отмечаются существенные изменения в структуре инфекционной патологии человека. На фоне снижения уровня заболеваемости некоторыми классическими инфекциями имеет место рост числа заболеваний, вызываемых условно патогенными микроорганизмами. Последние часто возникают в больничных условиях и называются внутрибольничными, госпитальными или нозокомиальными. Проблема внутрибольничных инфекций в последние годы приобрела исключительно большое значение для многих стран мира. В этом отношении наша страна не является исключением. Рост заболеваемости внутрибольничными инфекциями обусловлен следующими причинами демографическими изменениями в обществе, прежде всего увеличением удельного веса лиц старших возрасгных групп увеличением числа лиц, относящихся к контингентам риска хронические больные, новорожденные, недоношенные дети, онкологические больные, оперированные и др. I, 2, 8, , , , . Высокий уровень внутрибольничной заболеваемости и летальности, а также большой экономический ущерб позволяют рассматривать внутрибольничные инфекции как одну из более важных проблем современного здравохранения 7. Установлено, что внутрибольничные инфекции ВИ являются одной из основных причин заболеваемости и смертности госпитализированных больных и широко распространены во всем мире .