Получение, характеристика и биотехнологические аспекты применения поли- и моноклональных антител к антигенам Vibrio cholerae О1 Инаба и Огава

• Автор: Сырова, Наталия Алексеевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.23
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 156 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Антигены холерного вибриона.

ГЛАВА 2. Методы контроля синтеза антигенов в биотехнологии

производства химических вакцин

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

ГЛАВА 4. ИММУНОХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА

СЕРОТИПОСПЕЦИФИЧЕСКИХ АНТИГЕНОВ V. С ПРИМЕНЕНИЕМ ПОЛИКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ

4.1. Сравнительное исследование специфической активности диагностических холерных адсорбированных сывороток

Инаба и Огава.

4.2. Получение и характеристика мышиных поликлональных антител
к препаратам Оантигенов V. Инаба и Огава.
ГЛАВА 5. ОСОБЕННОСТИ ГИБРИДОМНОЙ БИОТЕХНОЛОГИИ ПОЛУЧЕНИЯ МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ К СПЕЦИФИЧЕСКИМ ЭПИТОПАМ V. ОХ ИНАБА И ОГАВА
5.1. Создание банка гибридом и стратегия отбора позитивных клонов
5.2. Изучение стабильности антителопродукции гибридом
i vi и i viv
5.3. Иммунохимические свойства моноклональных антител.
ГЛАВА 6. РАЗРАБОТКА И СТАНДАРТИЗАЦИЯ РАЗЛИЧНЫХ ВАРИАНТОВ ТИФА В ПРОЦЕССЕ ПРОИЗВОДСТВА И КОНТРОЛЯ КОНЕЧНОГО ПРОДУКТА ХОЛЕРНОЙ БИВАЛЕНТНОЙ ХИМИЧЕСКОЙ ТАБЛЕТИРОВАННОЙ ВАКЦИНЫ
6.1. Изучение биокинетики синтеза Оантигена при масштабируемом культивировании производственных штаммов холерного вибриона глубинным методом.
6.1.1. Изучение синтеза Оантигена при масштабируемом культивировании производственных штаммов холерного вибриона в ДИА с применением поликлональных антител
6.1.2. Изучение синтеза Оантигена при масштабируемом культивировании производственных штаммов холерного вибриона в ДИА с применением панели МКА
6.2. Анализ содержания Оантигена на этапах получения полуфабрикатов и готовых лекарственных форм холерной бивалентной химической таблетированной вакцины
ГЛАВА 7. ТЕХНОЛОГИЧНОСТЬ И ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ МЫШИНЫХ ПОЛИ И МОНОКЛОНАЛЬНЫХ АНТИТЕЛ ПРИ ПРОЦЕССАХ ПРОИЗВОДСТВА И КОНТРОЛЯ ДИАГНОСТИЧЕСКИХ И ПРОФИЛАКТИЧЕСКИХ ПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ ХОЛЕРЫ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
ЛИТЕРАТУРА


Использование иммуноферментных тестсистем на основе разноэпитопных МКА впервые дало возможность осуществить мониторинг за синтезом Оантигена в процессе масштабируемого культивирования производственных штаммов V. В и М на уровне индивидуального эпитопа. ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ РАБОТЫ состоит в создании на основе поликлональных антител к препаратам Оантигенов V. Инаба и Огава и разноэпитопных МКА экспериментальной иммуноферментной тестсистемы для быстрого и эффективного контроля в ТИФА и ДИА продукции Оантигенов на основных этапах приготовления холерной бивалентной химической таблетированной вакцины. Разработанные экспериментальные иммуноферментные тестсистемы апробированы в технологической линии производства холерной бивалентной химической таблетированной вакцины и находятся на стадии внедрения с оформлением изменений в соответствующую нормативную документацию. По материалам диссертационного исследования составлены Методические рекомендации по определению в дотиммуноанализе содержания липополисахарида Vii серогруппы на этапах экспериментального производства химической холерной вакцины, одобренные Ученым советом РосНИПЧИ Микроб протокол 5 от июня г. Материалы диссертационного исследования используются при чтении лекций по общей микробиологии и лабораторной диагностике инфекционных болезней на курсах специализации врачей и биологов по особо опасным инфекциям и курсах усовершенствования врачей по бактериологии, иммунологии и эпидемиологии при РосНИПЧИ Микроб. Кроссреактивность и относительно низкая специфичность диагностических холерных адсорбированных сывороток связана с их гетерогенностью и присутствием антител к белкам наружной мембраны с м. Инаба и Огава биоваров классического и Эль Тор. Препараты химически выделенных и полученных кипячением термостабильных Оантигенов не являются идентичными антигенными субстанциями за счет принципиальной разницы в структурной композиции составляющих их полипептидных и углеводных компонентов. Применение в качестве иммунизирующего агента выделенных регламентированными методами Оантигснов V скокгае серотипов Инаба и Огава обеспечивает выработку у инбредных мышей линии ВАЬВс поликлональных моноспецифических антител в высоких титрах, превосходящих по специфичности и активности коммерческие диагностические холерные адсорбированные сыворотки. Разработаны и оптимизированы основные биотехнологические аспекты получения препаративных количеств мышиных поли и моноклональных типоспецифических антител, перспективных для конструирования на их основе современных высокочувствительных иммуноферментных тестсистем для выявления Оантигена не менее 0,0, мгмл в полуфабрикате независимо от модификации иммуноанапиза, 0,0, мгмл в ДИА и 0,,5 мкгмл в ТИФА в готовой лекарственной форме, соответственно. Экспериментальные иммуноферментные тестсистемы на основе мышиных поли и моноклональных антител дают возможность более эффективно, чем регламентированные методы контроля РИД и РИГА с холерной адсорбированной Осывороткой определять содержание и активность Оантигена на всех основных стадиях производства и приготовления холерной бивалентной химической таблетированной вакцины, что указывает на перспективу их применения в качестве современных высокочувствительных методов контроля биосинтеза данного антигена и позволит снизить себестоимость выпускаемой продукции за счет большей рентабельности и технологичности процесса приготовления указанных тестсистем. Оантигена, одного из компонентов выпускаемого в РосНИПЧИ Микроб профилактического препарата против холеры, с целью повышения его содержания в готовой лекарственной форме и, следовательно, улучшения качества холерной бивалентной химической таблетированной вакцины. АПРОБАЦИЯ РАБОТЫ. Волгоград, . ПУБЛИКАЦИИ. По материалам диссертации опубликовано работ. ОБЪЕМ И СТРУКТУРА РАБОТЫ. Диссертация состоит из введения, обзора литературы 2 главы, собственных исследований 5 глав, заключения, выводов и списка литературы, включающего 9 источников, из них зарубежных 3. Объем диссертации составляет 6 страниц машинописного текста, включая таблиц и рисунков.