Информативность полимеразной цепной реакции для диагностики туберкулеза легких

• Автор: Ларионова, Елена Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 146 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 8

1.1. Род микобактерий.

1.2. Микробиологические методы обнаружения и идентификации микобактерий.

1.3. Молекулярногенетические методы в детекции микобактерий.

1.4. Применение ПЦР в лабораторной диагностике туберкулеза.

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы.

2.2 Методы.

Глава 3 ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ С

КУЛЬТУРАМИ i i
3.1. ороговая чувствительность выявления ДНК М. i.
3.2. Выделение ДНК из культуры М.i v.
Глава 4 УСЛОВИЯ, НЕОБХОДИМЫЕ ДЛЯ
ПРОВЕДЕНИЯ ПОЛИМЕРАЗНОЙ ЦЕПНОЙ РЕАКЦИИ
4.1. Подготовка образцов мокроты.
4.2. Выбор способа выделения ДНК из мокроты.
4.3. Установление оптимального объема образцов мокроты для проведения ПЦР.
4.4. Сравнительное исследование чувствительности и специфичности ПЦР тестсистем.
Глава 5 ПОЛИМЕРАЗНАЯ ЦЕПНАЯ РЕАКЦИЯ В
ДИАГНОСТИКЕ ТУБЕРКУЛЕЗА ЛЕГКИХ
5.1. Роль ПЦР в выявлении возбудителя в мокроте больных разными формами туберкулеза легких.
5.2. Обнаружение ДНК .i у больных туберкулезом легких в процессе лечения.
5.3. Повышение результативности ПЦР при дополнительном культивировании мокроты.
Глава 6 ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ ПЦР
РАЗЛИЧНЫХ ОБРАЗЦОВ ДИАГНОСТИЧЕСКОГО МАТЕРИАЛА ОТ БОЛЬНЫХ ТУБЕРКУЛЕЗОМ ЛЕГКИХ
6.1. Исследование биоптатов тканей.
6.2. Бронхоальвеолярные смывы, плевральные экссудаты и моча.
6.3. Использование крови в качестве диагностического материала.
6.4. Повышение результативности при использовании комплекса 5 диагностических образцов.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ 9
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Микобактерии этого комплекса повсеместно встречаются в окружающей среде, их выделяют из почвы, воды, растений, пыли и продуктов питания i . i К. Н. . Все виды М. i . i К. Н. . Однако, заболевания, вызываемые микобактериями этого комплекса, представляют серьезную проблему для клиницистов. В последние десятилетия значение М. СПИДассоциированных заболеваний ii . ., . ., . . . . i . i . . i . . . Основными клинически значимыми видами микобактерий являются . К микобактериям туберкулезного комплекса относятся близкородственные микобактерии . .vi , . .ii. Все они не образуют спор, являются кислотоустойчивыми, медленнорастущими, нехромогенными микобактериями, отличающиеся положительным ниациновым и нитратредуктазным тестами. Микобактерии туберкулеза имеют форму палочек, прямых или слегка изогнутых, размер которых составляет 0. .i часто растет в виде кос или шнуров кордфактор, в которых бактерии имеют параллельное расположение . , В. На большинстве плотных сред микобактерии образуют выпуклые, шероховатые, морщинистые колонии неправильной формы, чаще всего кремового цвета. Время генерации . С до С. Инкубация в атмосфере, содержащей 5 СО2, ускоряет рост микобактерий туберкулеза. М.i наиболее часто выделяемый в клинических лабораториях вид микобактерий. Доля М. Финляндия, Швеция, Германия i Н. ii Н. России Оттен Т. Ф., . Поскольку М. М.i x, и нетуберкулезные микобактерии НТМБ Оттен Т. Ф., . Обнаружение возбудителя туберкулеза в биологическом материале является одной из основ лабораторной диагностики во фтизиатрии. Этой цели подчиняются все известные методы. Обязательным диагностическим минимумом являются методы бактериоскопии и посева на плотные среды. Одновременное микроскопическое исследование и посев на питательные среды производят после деконтаминации и центрифугирования диагностических образцов. Наиболее простой и быстрый метод выявления микобактерий микроскопическое исследование образцов на наличие кислотоустойчивых палочек. Образцы окрашивают основным фуксином методы ЦиляНильсена или Киньона, или флуорохромными красителями аураминродамин . ., . . . . . . . . . ., . ., . . . Однако чувствительность бактериоскопии чрезвычайно низка нижний предел составляет 15x5 клеток на миллилитр образца. При использовании бактериоскопических методов невозможно дифференцировать М. Кроме того, существуют такие виды бактерий, как и i, которые также являются кислотоустойчивыми i . . . Вейсфейлер Ж. Г., ii Т. М., . . . . . , . В качестве питательного субстрата для роста микобактерий туберкулеза наиболее часто используют плотные питательные среды ЛевенштейнаИенсена, ФиннI или агаризованную среду Миддлбрук 7Н Биргер М. О., . ., . ., М. . . Как правило, инициальный рост появляется на сутки с момента посева. Культуры выращивают при С в течение 6 недель. Некоторые виды микобактерий требуют особых условий культивирования. .i температурный оптимум С, а также необходим гемин . ., . ., i . К. . . . . Покровский В. И., . Медленный рост микобактерий ограничивает диагностические возможности традиционных лабораторных методов, обеспечивающих подтверждение диагноза туберкулеза у различных групп пациентов. .i выявляются лишь при случаев активного туберкулеза легких, а в клинике внелегочного туберкулеза удельный вес их выявления еще ниже Вишневский Б. И., Качанова Н. К., . При туберкулезных менингитах лишь в 3 случаев обнаруживается рост микобактерий на питательных средах, чувствительность микроскопического метода составляет 3. i . i В. . i . В. .