Изучение мобилизационной способности плазмиды (фактора переноса) рАР42

• Автор: Хамидуллина, Раиса Гусмановна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 165 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. Общие сведения о плазмидах бактерий.

2. Факторы переноса и другие конъюгатив

ные плазмиды.

3. Неконъгагативные плазмиды.

4. Мобилизация на перенос конъюгативными плазмидами неконъюгативных.

5. Мобилизация и происхождение плазмид лекарственной резистентности бактерий.

ГЛАВА П МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

1. Штаммы бактерий. Плазмиды и фаги.

2. Питательные среды и реактивы.
3. Скрещивания. Выделение трансконъюгантов.
4. Трехродительские скрещивания.
5. Маркирование фактора рАР транспозо
ном Тп5.
6. Определение уровня резистентности бактерий к антибиотикам.
7.Выделение плазмидной ДНК.
8. Рестрикция плазмидной ДНК.
9. Электрофорез плазмидной ДНК.
. Определение активности гзлактамазы ТЕМтипа.
. Изучение пилей, детерминируемых плазмидами.
. Определение спонтанной элиминации плазмид.
. Определение элиминации плазмид, индуцированной этидиумбромидом. .
ГЛАВА Ш
. Определение стабильности коинтегратив
ных плазмид.
. Определение совместимости несовместимости.
. Определение чувствительности бактерий
к донорспецифическим фагам.
. Определение колициногенности бактерий.
РЕЗУЛЬТАТЫ
X. Мобилизационная способность фактора рАР и его транспозонсодержащих вариантов рАРТп1 И 9.
а Определение частоты мобилизации фактором рАР неконъюгативных плазмид.
б Определение частоты мобилизации фактором рАРi неконъюгативных плазмид.
в Определение частоты мобилизации фактором рАРТп9 неконъюгативных плазмид.
2. Поиски и идентификация коинтегративных плазмидных структур в трансконъюгантах, селекционированных из трехродительских скрещиваний .i.
а Определение донорской способности трансконъюгантов, содержащих мобилизующую и мобилизуемую плазмиды.
б Спонтанная элиминация плазмид из клетоктрансконъюгантов, выделенных из трехродительских скрещиваний.
в Индуцированная этидиумбромидом элиминация плазмид из клетоктрансконъюгантов, выделенных из трехродительских скрещиваний.
г Определение совместимости несовместимости исходного фактора переноса с предполагаемыми коинтегративныыи плазмидами.
д Природа инактивации маркера Тсг.
3. Свойства идентифицированных коинтегратив
ных плазмид.
а Определение молекулярных масс коинтегративных плазмид.
б Изучение пилеобразования,контролируемого коинтегративной плазмидой рШ1.
в Определение диапазона трансмиссивности коинтегративных плазмид.
г Определение уровня резистентности к ампициллину. III
д Определение активности влактамазы,детерминируемой коинтегративныыи плазмидами. из
ГЛАВА 1У ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Ц
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Считают, что эта классификация отражает филогенетическое родство между плазмидами одной и той же группы , , . В пользу такого предположения свидетельствуют данные о корреляции между несовместимостью и другими свойствами бактерий. Установлено, что внутри каждой группы несовместимости степень гомологии последовательностей ДНК несовместимых плазмид достаточно высока, тогда как совместимых плазмид из разных групп незначительна ii . Плазмиды внутри одной и той же группы несовместимости характеризуются сходными молекулярными массами ii . , . В пользу сходства между плазмидами из одной и той же группы несовместимости свидетельствует также способность плазмид детерминировать синтез морфологически и серологически сходных пилей на поверхности бактерий , , а. Идентификация мутантов, дефектных по несовместимости, позволила установить, что несовместимость подвержена генетическому контролю Vi, , . В настоящее время известно около групп несовместимости плазмид i групп, по которым могут быть распределены плазмиды различного происхождения А. П.Пехов, ,. Наибольшее количество групп несовместимости групп классифицировано среди подобных плазмид. Плазмида относится к I группе несовместимости,а факторы переноса рАР, рАРАЗ и рАР к группам несовместимости рУП, i и IX А. П.Пехов и др. Е.В. А.П. Пехов, . Недавно была выявлена новая рх группа несовместимости, к которой относится конъюгативная плазмида рАР9 Н. И.Буянова и др. Факторы переноса представляют собой коныогативные плазмиды, которые обладают лишь генами, ответственными за репликацию и конъюгативность. Благодаря этому факторы переноса способны самостоятельно реплицироваться и придавать бактериямхозяевам свойства генетических доноров. Наличие генов конъюгативности трансмиссивности обеспечивает не только собственную передачу самих факторов переноса, но и мобилизацию на перенос бактериальной хромосомы и неконъюгативных плазмид от одних бактериальных клеток к другим А. П.Пехов, . Наиболее изученной конъюгативной плазмидой, впервые обнаруженной в клетках . Р i. Эта плазмида представляет собой кольцевую, ковалентно замкнутую молекулу ДПС с контурной длиной мкм и молекулярной массой мегадальтон ivез, . Фактор может находиться в бактериальных клетках как в автономном, так и в интегрированном состояниях. Показано, что плазмида обладает несколькими инсерционными последовательностями . I2 и I3 , которые ответственны за способность к интеграции в бактериальную хромосому и способность вырезаться из хромосомы вместе с хромосомными сегментами, образуя варианты фактора vi . Известно множество вариантов А. Помимо упомянутого фактора генетического переноса в последние годы были идентифицированы и другие подобные плазмиды. В . i . АР4, рАР, рАР, рАР и рАР А. П.Пехов и др. Е.В. Губарь, А. П.Пехов, . В ii идентифицированы факторы переноса Л ,. i, И рААЮОО А. А.Пехов, , в РР . К , . I , i, . Обнаружены факторы переноса и в бактериях, принадлежащих к различным видам ii . , i . , i ii, Vivi, . i . Способность факторов переноса и других конъюгативных плазмид придавать клеткам донорские свойства обусловлена наличием в их геномах оперонов. Наиболее изученным является рон фактора р . v, i, Ii, i, i, , . В зависимости от контролирующих функций все гены фактора р можно классифицировать на несколько групп. С, О, Р, н, , которые кодируют синтез пилей, необходимых для формирования конъюгирующих пар бактерий, а также для адсорбции на них р специфических фагов. Продукты, синтезируемые под контролем этих генов, взаимозаменяемы у подобных плазмид.