Выделение актиномицетов из почвы с использованием КВЧ-излучения

• Автор: Ли, Юлия Валентиновна
• Шифр специальности: 03.00.07
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 155 с. : ил

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Методы предварительной обработки природных образцов для

селективной изоляции актиномицетов

1.1. Предварительная обработка природных образцов химическими

веществами

1.2. Использование физических факторов для выделения актиномицетов

1.3. Комплексные методы выделения актиномицетов

1.4. Выделение актиномицетов с использованием биологических

факторов.
Глава 2. Использование КВЧизлучения в биологии
Глава 3. Сукцессионный подход к выделению актиномицетов из почвы.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 1. Материалы и методы исследования.
1.1. Объекты исследования
1.2. Обработка почвенных образцов гелийнеоновым лазером
и магнитным полем
1.3. Обработка почвы и суспензий спор культур актиномицетов
КВЧволнами
1.4. Сукцессионный анализ
1.5. Выделение и количественный учет актиномицетов.
1.6. Изучение таксономического положения выделенных
культур актиномицетов.
1.7. Исследование антибиотических свойств выделенных
культур актиномицетов.
Глава 2. Разработка нового метода выделения актиномицетов с использованием
обработки почвенных суспензий КВЧизлучением.
2.1. Предварительное изучение воздействия лазера, магнитного поля и
КВЧизлучения на селективное выделение актиномицетов из почвы. .
2.2. Исследование закономерностей выделения культур актиномицетов
из почвенных образцов, обработанных КВЧволнами
2.2.1. Подбор условий обработки почвенных суспензий КВЧволнами.
2.2.2. Изучение родового состава актиномицетов, выделенных из почвенных образцов, не обработанных и обработанных КВЧволнами
2.2.3. Обработка суспензий спор чистых культур актиномицетов
КВЧизлучением.
2.2.4. Изучение антибиотических свойств выделенных культур
актиномицетов
Глава 3. Разработка нового комплексного метода, включающего обработку почвенных суспензий КВЧизлучением и сукцессионный анализ для селективного выделения актиномицетов
3.1. Динамика численности актиномицетов в ходе сукцессии.
3.2. Динамика численности актиномицетов в ходе контрольной сукцессии и
сукцессии с обработкой почвенных суспензий КВЧизлучением
3.3. Изучение родового состава актиномицетов, выделенных в ходе контрольной сукцессии и сукцессии с обработкой почвенных суспензий КВЧизлучением
3.4. Изучение антибиотических свойств выделенных культур
актиномицетов.
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Он заключался в приготовлении суспензии из воздушносухой почвы на основе 1 раствора хлорамина Т с последующим посевом на V. Предобработка раствором хлорамина Т позволяла подавить рост немицелиальыых прокариот и нежелательных актиномицетов, вырастающих на чашках. Для выделения олигоспоровых актиномицетов родов ii, i, i, и была предложена предобработка почвенных образцов растворами хлорамина Б Михайлова, . Интересно отметить, что используя не тепловую обработку, а химический фактор предобработки почвенных образцов удалось выделить термофильную группу актиномицетов. Так, обработка почвенных образцов серином приводила к высокой селективной изоляции термофильных актиномицетов i . Для выделения актиномицетов из почвенных образцов Р. Н. и его коллегами был предложен метод, который заключался в инкубации образцов почвы с карбонатом кальция во влажных условиях . Петри при температуре С. Влажную атмосферу создавали путем прикрепления с помощью проволочной петли ко дну чашки нескольких кусочков стерильной фильтровальной бумаги, смоченных стерильной дистиллированной водой. В институте по изысканию новых антибиотиков им. Г.Ф. Гаузе сотрудники лаборатории продуцентов модифицировали этот метод Алферова, Терехова, . Предложенная Тэао Р. Н. с соавторами глюкозосоевая среда была заменена на органический агар 2 Гаузе, так как он прозрачен и на нем развивались более крупные колонии актннонмицетов, хотя количество колоний на обеих средах было одинаковым. Тэао Р. Н. с соавторами применяли способ посева почвенной суспензии внутрь агара, что оказалось неудобным, так как колонии, растущие в толще агара трудно выделять. В модифицированном методе предложено проводить высев на поверхность агар изо ванной среды. Использованный метод обработки почвы карбонатом кальция во влажных условиях позволил увеличить количество выделенных ахтиномицетов разных родов, например, таких как Зйърютусев, АсйпотсиЬлга Атусокаорзгз, МгсготопоБрога, Косагсйорш, ЫосагсИо11е, РготкготопоБрога, Зперярогаприт. В литературе имеются сведения о влиянии ионов кальция на процессы регуляции у культур порядка АсйпотусеШея на способность к образованию воздушного мицелия и инициацию прорастания спор Каит М. Кирилова и др. Поэтому авторы модифицированного метода пришли к выводу о том, что увеличение количества выделенных культур при обработке почвы карбонатом кальция могло быть связано с повышением числа проросших или инициированных к прорастанию спор в популяции Алферова, Терехова, . Как видно из вышеприведенных литературных данных, одни из веществ, используемых для обработки природных образцов, являются ингибиторами роста микроорганизмов, а другие их стимуляторами. Так, для селективного выделения культур рода i предлагалось обрабатывать почвенную супензию либо 6 Ус раствором дрожжевого экстракта, либо 0. С . Дрожжевой экстракт и додецилсульфат натрия являлись активаторами спор актиномицетов. После этого смесь была подвергнута воздействию 1. С в течение минут. При использовании данного метода наблюдалось значительное увеличение выделенных культур рода i за счет стимуляции прорастания искомых спор н ингибирования фенолом банальной микрофлоры. Добавление хлороквина 0 мкгмл и 0. в результате уменьшения роста i . После указанной обработки доля культур рода среди выделенных актиномицетов составляла , а количество бацилл было снижено на по сравнению с контролем , . Таким образом, различные химические вещества оказывали как стимулирующее, так и ингибирующее действие на микрофлору почвы. Применение комбинаций различных химических веществ для обработки природных субстратов приводило к высокой селективности выделения определенных таксонов актиномицетов. Помимо методов ингибирования нежелательной микрофлоры и стимуляции роста актиномицетов существует ряд методов направленных на преодоление взаимосвязи почвамикроорганизм.