Влияние лектина Paenibacillus polymyxa на некоторые метаболические процессы животных

• Автор: Мухачева, Елена Сергеевна
• Шифр специальности: 03.00.07, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Саратов
• Количество страниц: 139 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК УСЛОВНЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие сведения о лектинах бактерий

1.2. Биологическая активность лектинов.

2 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Объект исследования

2.2. Материалы и методы исследования

2.2.1. Выделение и очистка лектина ЛИ РаетЬасг рЫутуха .

2.2.2. Иммунизация животных лектином, воспроизведение экспериментального гипотиреоза и стресса
2.2.3. Разделение белков плазмы крови и определение их молекулярной массы
2.2.4. Метод электроблотиш а.
2.2.5. Метод лектинодота.
2.2.6. Метод выделения альвеолярных и перитонеальных макрофагов
2.2.7. Моделирование процесса фагоцитоза.
2.2.8. Определение индекса завершенности фагоцитоза
2.2.9. Метод выделения лизосом.
2.2 Метод определения активности кислой фосфатазы.
2.2 Метод определения активности катепсинов.
2.2 Метод определения активности амииотрансфсраз
2.2 Метод определения концентрации глюкозы в крови
2.2 Метод определения концентрации молочной кислоты в крови
2.2 Метод определения концентрации общего белка плазмы крови
2.2 Метод определения концентрации мочевины в сыворотке крови
2.2 Метод определения концентрации малонового диальдегида.
2.2 Метод определения активности пероксидазы.
2.2 Метод определения концентрации церулоплазмина в крови
2.2 Метод определения активности каталазы
2.2 Статистическая обработка данных
2.3. Результаты исследований и их обсуждение
2.3.1. Исследование воздействия лектина 1II на белковый спектр плазмы крови белых крыс интакгных и при экспериментальном гипотиреозе.
2.3.2. Исследование специфического взаимодействия лектина ЛИ с белками плазмы крови i vi
2.3.3. Изменение активности кислых гидролаз лизосом печени при введении лектина интактным животным и животным с развивающимся гипотиреозом
2.3.4. Влияние лектина ЛИ на активность фагоцитоза клеток стафилококка
2.3.5. Воздействие лектина ЛИ на интенсивность перекисного окисления липидов и некоторые звенья антиоксидантной защиты самцов и самок крыс при стрессе
2.3.6. Изменения активности аминотрансфераз сыворотки крови при стрессе, введении лектина и комбинированном воздействии
2.3.7. Воздействие лектина ЛИ на метаболические параметры углеводного
и белкового обмена самцов и самок крыс при стрессе
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ ЛИТЕРАТУРНЫХ ИСТОЧНИКОВ
Список условных сокращений
I аланинаминотрансфераза
АМФ альвеолярные макрофаги
АОЗ антиоксидантная защита
аспартатаминотрансфераза
АФК активные формы кислорода
ГА гсмагглютинирующая активность
ИЗФ индекс завершенности фагоцитоза
Кон А конканавалин А, лектин vi ii
Л1, ЛИ лектины iix
МДА малоновый диальдегид
МС маннозоспецифичность
МР маннозорезистенггность
ПМФ перитонеальные макрофаги
ПОЛ перекисиое окисление липидов
ТБК 2тиобарбитуровая кислота
ТЛ термолабильность
ТС термостабильность
ТХУ трихлоруксусная кислота
ФГА фитогемагглютинин
лектин i iv
1 лектин i
иммуноглобулин
лектин Vi
I, II лекгины i
фосфатносолевой буфер
смесь лектинов фитолакки
агглютинин коры i
лектин клубней
лектин проростков семян пшеницы
V лектин i ii
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Стратегия взаимодействия микроорганизмов с окружающей средой, Россия, ИБФРМ РАН, Саратов, , третьем конгрессе Науки о человеке Россия, СГМУ, Томск, , на конференции профессорскопреподавательского состава и аспирантов по итогам научноисследовательской и учебнометодической работы за год СГАУ им. Н.И. Вавилова, Саратов, . Работа выполнена на кафедре биохимии и биофизики биологического факультета СГУ им. Н.Г. По теме диссертации опубликовано 7 работ. Диссертация состоит из введения, двух глав, включающих обзор литературы, описание материалов и методов исследования, изложение полученных материалов и их обсуждение, заключения, выводов и списка использованных литературных источников. Работа изложена на 9 страницах, иллюстрирована рисунками и содержит таблиц. Список использованных литературных источников включает 1 наименование, в том числе зарубежных. Бактериальные гемагглютинирующие белки были впервые описаны . Была отмечена агглютинация кроличьих эритроцитов культурами и фильтратами некоторых видов и Vii. В году появились первые сообщения об обнаружении у эшерихий гемагглютинина, тесно связанного с бактериальной клеткой и отсутствующего в супернатантах и фильтратах культур. Из изученных штаммов ii i агглютинировали эритроциты различных животных только штаммов , . Как оказалось, такая селективная гемагглютинация являлась характерным свойством многих бактериальных гемагглютининов. Позднее было показано, что некоторые бактериальные токсины например, токсины эшерихий, стафилококков, бацилл агглютинировали не только эритроциты, но и лейкоциты, тромбоциты, сперматозоиды различных животных , . В одном из первых, достаточно полном обзоре бактериальных гемагглютининов, вышедшем в году, были подытожены все имеющиеся к тому времени сведения о гемагглютининах бактерий, рассматривались разные типы вызываемой бактериями гемагглютинации, но механизм этого явления оставался неизвестным i, i, . Дальнейшие исследования с помощью таких методов, как электронная микроскопия, иммунохимия, рентгеноструктурный анализ, а также совершенствование методов выделения и очистки белков сделали возможным выявление клеточных структур, ответственных за агглютинирующие свойства бактерий, изучение их строения и свойств. Лектины микробов важные факторы патогенности, играющие ключевую роль в инфицировании и колонизации бактериями макроорганизма. Исследования молекулярных основ патогенности бактерий показали, что первой ступенью инфекционного процесса является специфическая адгезия бак
термальных клеток к клеткам различных тканей хозяина. Для многих бактерий показано, что их поверхностные адгезины участвуют в прикреплении к клеткаммишеням, связываясь с гликоконъюгатами клеток. Было также показано, что прикрепление бактерий к животным клеткам специфически ингибируется маннозой i, i, . Было высказано предположение, что именно лектиноподобные молекулы на поверхности бактерий опосредуют их прикрепление к остаткам маннозы, локализованным на эпителиальных клетках. Впоследствии было обнаружено, что и другие сахара могли ингибировать процесс прикрепления различных бактерий к клеткамхозясвам. Однако изза широкого распространения маннозоспецифичной адгезии среди грамотрицатсльных бактерий их стали разделять на маннозоспецифичные МС и маннозорезистеитные МР бактерии i, , , . Адгезия последней группы ингибировалась различными сахарами, в том числе фукозой, галактозой, ацетилглюкозамином, сиаловой кислотой i . Было также установлено, что бактериальные поверхностные лектины могут присутствовать в различной форме, чаще всего в виде пилей фимбрий. Наиболее четко роль бактериальных адгезинов лектинов в связывании патогенных и условно патогенных бактерий с клетками проявляется для бактерий, имеющих на поверхности фимбрии. В зависимости от морфологического типа фимбрии могут содержать или не содержать гемагппотинины i, ii, . Участие пилей в МСадгезии . МСгемагглютинирующей активностью, проявляемой бактериями. Рецепторами в желудочнокишечном тракте являются содержащие маннозу гликопротеины гликокаликса эпителиальных клеток.