Использование люминесцирующих бактерий при оценке фагоцитарной активности нейтрофилов

• Автор: Каримов, Ильшат Файзелгаянович
• Шифр специальности: 03.00.07, 14.00.36
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Оренбург
• Количество страниц: 126 с. : ил.

Содержание
Введение
Глава 1 Обзор литературы. Бактериальная биолюминесценция и ее применение при исследовании природных сред и живых систем

1.1 Молекулярная организация люминесцентной системы у

бактерий

1.2 Использование люминесцирующих бактерий в системе

биотестирования природных сред

1.3 Использование люминесцирующих микроорганизмов при

исследовании живых систем.

Глава 2 Материалы и методы исследований

2.1 Общая характеристика объектов исследования

2.1.1 Люминесцирующие бактерии.
2.1.2 Бесклсточная ферментная система генерации свечения
2.1.3 Биологические среды, содержащие потенциальные фаторы опсонизации
2.1.4 Нейтрофилы переферической крови человека
2.2 Методы люминесцентного исследования фагоцитарной системы
2.2.1 Метод биолюминесцентного анализа
2.2.2 Метод хемилюминесцентного тестирования
2.2.3 Анализ спектральных характеристик био и
хемилюминесценции.
2.3 Дополнительные методы исследования
2.3.1 Бактериологический метод оценки количества жизнеспособных микроорганизмов в анализируемых пробах.
2.3.2 Метод исследования спектра жирных кислот использованных микроорганизмов
2.3.2 Метод определения содержания гликозилированного
гемоглобина в крови человека
2.4 Методы статистической обработки результатов
Глава 3 Определение оптимальных условий для использования люминесцирующих бактерий к качестве объектов фагоцитоза
3.1 Обоснование варианта опсонизации рекомбинантных
люминесцирующих бактерий ii i
3.2 Определение оптимального люминесцирующего штамма для оценки фагоцитоза
3.3 Определение соответствия между биолюминесценцией
бактериальных клетокмишеней и развивающимся в их отношении в
фагоцитарной системе киллинговым эффектом
Глава 4 Раздельное определение биолюминесценции и
хемилюминесценции в фагоцитарной системе.
Глава 5 Устройство для осуществления биохсмилюминесцентного метода оценки фагоцитоза. дд
Заключение.
Выводы.
Список использованной литературы


На данной основе разработан биохемилюминесцентный метод оценки фагоцитоза, позволяющий проводить одновременную оценку активации кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов и выраженности обусловленного их действием киллингового эффекта в отношении бактериальных клетокмишеней, приоритет которого подтвержден патентом на изобретение 3 Биохемилюминесцентный способ оценки фагоцитарной активности нейтрофилов. Для реализации данного способа разработан и создан опытный образец двухканального биохемилюмипометра, позволяющего проводить регистрацию анализируемых параметров в режиме реального времени Патент РФ на полезную модель 8. Патент РФ на полезную модель 3. Разработанный метод оценки фагоцитарной активности нейтрофилов с использованием в качестве фагоцитируемых объектов рекомбинантных люминесцирующих микроорганизмов существенно сокращает длительность и трудоемкость исследований, а также позволяет в режиме реального времени получать комплексную информацию как об уровне активации кислородзависимых бактерицидных систем фагоцитов, так и об интенсивности обусловленного этим бактерицидного эффекта. Апробация разработанной биохемилюминесцентной технологии при оценке фагоцитарной активности нейтрофилов периферической крови у лиц, больных сахарным диабетом 2го типа позволила констатировать сочетанное изменение регистрируемых показателей Акт внедрения МСЧ ГОУ ОГУ от г. Техническая документация на двухканальный биохемилюминометр и комплект сменных кюветных отделений к нему передана Специальному конструкторскотехнологическому бюро Наука Красноярского научного центра Сибирского отделения Российской Академии наук, где реализована в серии устройств линии БЛМ МК Акт внедрения от г. При этом данное устройство, наряду с его прямым использованием при оценке фагоцитоза, может применяться и для совершенствования иных технологий люминесцентного анализа, оценивающих свободнорадикальные и ферментативные процессы в живых организмах перекисное окисление липидов, биотестирование и др. В качестве объекта для биолюминесцентной оценки фагоцитоза рекомендуется рекомбинантный люминесцирующий штамм ii i с клонированным ихопероном i ii, опсонизированный нормальным иммуноглобулином человека. Раздельная оценка бактериальной биолюминесценции и люминолзависимой хемилюминесценции в фагоцитарной системе возможна на неперекрывающихся 0 нм и 0 им участках спектров их световой эмиссии. Реализация биохемилюминесцентного метода оценки фагоцитоза возможна с использованием двух канального биохемилюминометра, снабженного располагаемыми между анализируемой пробой и фотоэлектронными умножителями светофильтрами. Использование природных и генноинженерных люминесцирующих бактерий для тестирования абиотических сред и биологических жидкостей, а также при поддержке фанта РФФИ 6р офи Разработка биохемилюминесцентного метода оценки фагоцитоза в режиме реального времени и создание устройства для его осуществления. Научные положения и выводы диссертации полностью базируются на результатах собственных исследований автора. Пермь Н. Новгород, , Российской научной конференции с международным участием Физиология и генетика микроорганизмов в природных и экспериментальных системах Москва, , V Международном конгрессе Слабые и сверхслабые поля и излучения в биологии и медицине СПб, . Разработка Двухканальный биохемилюмииометр и технологии его использования для оценки бактерицидных систем крови человека награждена золотой медалью VIII Московского международного салона инноваций и инвестиций Москва, . Основные результаты проведенных исследований представлены в печатных работах, в том числе 4 статьях в рецензируемых журналах, рекомендуемых ВАК РФ для публикации материалов диссертационных исследований. По материалам исследований получен патент РФ на изобретение и 2 патента РФ на полезные модели. Структура и объем диссертации. Диссертация изложена на 5 страницах машинописного текста и состоит из введения, 5 глав, включая обзор литературы, описание материалов и методов, 3 глав результатов собственных исследований, заключения, выводов, списка цитируемой литературы, содержащего 2 источника отечественных и зарубежных авторов. Диссертация иллюстрирована 6 таблицами и рисунками.