Кариологическая и цитохимическая характеристика перевиваемых линий клеток пермиссивных и непермиссивных (резистентных) к вирусу классической чумы свиней

• Автор: Колбасова, Ольга Львовна
• Шифр специальности: 03.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 150 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ стр.

Список сокращений

1. Введение

1.1. Актуальность темы

1.2. Щель работы и основные задачи исследований

1.3. Научная новизна

1.4. Практическая значимость

1.5. Основные положения, выносимые на защиту

1.6. Апробация и публикации результатов

2. Обзор литературы

2.1. Клеточные культуры в биотехнологии

2.1.1. Первичные культуры клеток
2.1.2. Перевиваемые линии клеток
2.1.3. Контаминация клеточных культур
2.2. Клеточные культуры в изучении вируса классической чумы свиней
2.3. Проблемы вирусной пермиссивности и резистентности клс точных культур
2.4. Методические подходы к изучению механизмов пермиссив НОС1 и
2.4.1. Клонирование как метод получения и изучения пермиссивности клеточных культур к вирусам
2.4.2. Кариологический анализ
2.4.3. Цитохимический анализ
2.4.4. Рецепторный анализ
2.5. Заключение по обзору литературы
3. Собственные исследования
3.1. Материалы
3.1.1. Культуры клеток
Введение


За этот период произведены сотни миллионов доз этой вакцины, что позволило снизить уровень распространения этой особо опасной болезни, и не обнаружено какихлибо нарушений у привитых животных, по крайней мере, в течение лет наблюдения после введения вакцины 2, . До недавнего времени производство большинства вирусных препаратов основывалось на использовании первичных культур клеток из нормальных тканей различных видов домашних и лабораторных животных. Широкое применение таких препаратов в ветеринарной практике дало возможность достичь больших успехов в борьбе со многими опасными вирусными болезнями животных. Так, например, для культивирования вируса трансмиссивного гастроэнтерита свиней ТГЭС используют первичные культуры клеток тестикул, кожи, легких, почки поросенка . Для культивирования вируса парагрипиа3 КРС I П 3 первичную культуру клеток почки теленка. Первичные культуры клеток почек зеленых мартышек используют для приготовления полиовирусной вакцины , , , . Для культивирования вирусов чумы мелких жвачных животных, оспы, пограничной болезни овец, вирусной диареи КРС широко используют первичные культуры клеток почек и тестикул ягнят. Однако первичные культуры клеток во многих отношениях не являются перспективными клеточными субстратами по сравнению с перевиваемыми клеточными линиями , . В течение многих лет во всем мире использовали антирабические вакцины, получаемые из нервной ткани животных. Имеющийся опыт их применения свидетельствует об их эффективности. Однако общепризнанно, что при применении их для профилактики бешенства у человека, показатель риска поражений центральной нервной системы у реципиентов подобных вакцин составляет приблизительно 1 случай на введенных доз. В связи с этим ВОЗ рекомендовал заменить вакцины, содержащие компоненты нервной ткани на антирабические вакцины, изготовленные на перевиваемых клеточных линиях. Это позволило улучшить качество и увеличить количество вакцин 3. Одним из недостатков первичных культур клеток является то, что, их приготовление связано с периодическим убоем животных, а это создаст проблемы сырьевого обеспечения и дороговизны материала . Первичные культуры клеток отличаются отсутствием стандартности т. Первичные культуры таят в себе опасность эндогенной контаминации различными вирусами и микроорганизмами , , , которую трудно выявить в сроки, обусловленные коротким периодом их использования. Их трудно культивировать в условиях крупносерийного производства в связи с низкими ростовыми свойствами и сложностью технологии производства. Стоящая задача может быть решена лишь путем использования перевиваемых линий клеток, отличающихся способностью к бесконечным пересевам вне организма, высокой стандартностью, низкой стоимостью , . Перевиваемые линии клеток, в отличие от первичных и диплоидных культур клеток, полученных из нормальных тканей, и имеющих ограниченный срок жизни, являются трансформированными. Главное достоинство трансформированных клеток способность к бесконечному размножению и улучшенные ростовые свойства делают их чрезвычайно привлекательными в качестве клеточного субстрата в биотехнологии производства противовирусных вакцинных препаратов. Основные возражения против использования перевиваемых линий клеток для репликации вирусов и векторных рекомбинантов в производстве вирусных вакцин заключались в их возможной онкогенности изза контаминации вакцин клеточной ДНК или генными продуктами регуляторными белками, базировавшееся на распространенном мнении 8, что трансформационные изменения, возникающие при становлении ПЛК, полученных из нормальных тканей, эго неопластический процесс i vi, а гстероплоидность свидетельствует о злокачественной природе клеток. Успехи фундаментальных наук, в том числе изучающих биологию клетки, позволили изменить мнение в отношении использования перевиваемых линий клеток в биомедицине и ветеринарии. Комитет экспертов ВОЗ, основываясь на многочисленных исследованиях в области культур клеток, пришел к заключению, что трансформационные изменения при становлении ПЛК из диплоидных штаммов клеток, полученных из нормальных тканей доноров, не следует отождествлять с бессмертием клеточных линий, полученных из онкогенных опухолей , 3.