Механизм действия ферментов лизоамидазы на клеточные стенки бактерий

• Автор: Бегунова, Елена Альбертовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2001
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 125 с.

Исследования взаимоотношений микроорганизмов в биоценозах, так как ферменты, растворяющие клеточные стенки бактерий, делают доступными для разрушения компонеты соседних микробных клеток и являются, таким образом, важной частью в цепи обмена веществ биоценоза. Возможности широкого использования бактериолитических экзоферментов в научной и практической деятельности человека. В частности, для лечения ряда заболеваний, вызваных патогенной микрофлорой, множественно устойчивой к различным антибиотикам. Особенно актуален в настоящее время вопрос получения антистафилококковых ферментов, так как в последние десятилетия борьба со стафилококковыми инфекциями стала одной из серьезных проблем здравоохранения. Поскольку, различные бактериолитические ферменты имеют вполне определенный спектр микроорганизмов, на которые они могут действовать, для создания антимикробного препарата с широким спектром действия необходимо, в качестве составных частей, вводить ферменты, активнее в отношении различных грамположительных и грамотрицательных бактерий. Возможно также применение литических ферментов совместно с антибиотиками. Все это стимулирует проводить интенсивный поиск продуцентов различных литических ферментов, их выделение, очистку, изучение свойств и механизма действия на клеточные стенки бактериймишеней. В ИБФМ РАН из фильтрата кульгуральной жидкости бактериального штамма ИБФМЧЛ, относящегося к роду Хапбютопаь получен ферментный препарат лизоамидаза Би 7, Б 8, Би 1. Лизоамидаза содержит три фермента, способных разрушать клетки золотистого стафилококка две пептидазы и мурамидазу, большое количество полисахарида, стабилизирующего их, а также металлопротеазу, бакгериолитическую протеиназу и фосфатазу с нейтральным оптимумом Кулаев и др. Степная и др. Северин и др. Кулаев и др. Кулаев, . Препарат высокоэффекшвен в отношении клеток грамположительных бактерий, особенно стафилококков. На основании успешных клинических испытаний Фары комитет СССР принял решение о производстве лизоамидазы для применения в медицине. В начале х г. Вышний Волочек. Цель и задачи исследования. Разработать схемы разделения и очистки бактериолитичсской пептидазы Л1 и мурамидазы, охарактеризовать их основные физикохимические свойства. Определить субстратную специфичность бактериологических ферментов лизоамидазного комплекса в отношении пептидогликана . Исследовать роль гейхоевых. Изучить возможность лизиса лизоамидазой грамотрицательных бактериймишеней. Найти подходы к изучению взаимодействия ферментов лизоамидазы с входящим в этот препарат полисахаридом. Научная новизна. Впервые разработаны схемы очистки пептидазы I1 и мурамидазы, с использованием которых ферменты получены в электрофоретичсски гомогенном виде. Определены их основные физикохимические свойства. Показано, что пепгидогликан . Л1 гидролизует как глицилглицинэндопептидаза и мурамоилаланинамидаза, в то время как пептидаза Л2 обладает на этом субстрате только мурамоилаланинамидазной активностью. Выявлено, что первичное связывание лизоамидазы и ее бактериолитических ферментов с клеточной стенкой грамположительных бактериймишеней носит характер электростатического взаимодействия и определяется зарядом тейхоевых, тейхуроновых кислот клеточной стенки этих бактерий. Впервые показано, что лизоамидаза и гомогенные бактериолитические ферменты способны гидролизовать пептидогликан и грамотрицательных бактерий, а в сочетании с полимиксином В лизировать их клетки. Определено, что полисахарид лизоамидазы увеличивает активность мурамидазы по отношению к клеткам . Оацетильныс группы полисахарида играют существенную роль в этом процессе. Практическая значимость. Одной из важнейших проблем современной медицины является борьба с гнойными инфекциями вызванными грам положительным и и грамотрицательными патогенными бактериями. Лизоамидаза эффективно разрушает клетки грамположительных антибиотикоустойчивых бактерий, но почти не действует на грамотрицательные эубактерии. В работе показано, что в сочетании с полимиксином В, лизоамидаза способна разрушать клетки ряда патогенных грамотрицательных бактерий, в том числе, клетки синегнойной палочки. Результаты исследований позволят существенно расширить литический спектр, а следовательно, и эффективность действия препарата. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.