Метаболические и молекулярно-генетические маркеры антиоксидантной защиты у больных ишемической болезнью сердца

• Автор: Пардо, Пералес Георгина
• Шифр специальности: 03.00.04, 03.00.15
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Санкт-Петербург
• Количество страниц: 148 с. : ил.

1.1. Активные формы кислорода.

1.2. Роль параоксоназы 1 в развитии ИБС.

1.2.1 Семейство параоксоназы

1.2.2 Структура и свойства белкафермента параоксоназы

1.2.3 Субстраты параоксоназы

1.2.4 Содержание и активность параоксоназы 1 в организме

1.2.5 Варианты гена 1 и их влияние на активность параоксоназы 1 .

1.2.6 Роль вариантов 2 и гена I в развитии ишемической

болезни сердца

1.2.7. Варианты в регуляторных областях гена 1.

1.3. Роль супероксиддисмутаза в развитии ИБС

1.3.1. Семейство супероксиддисмутазы
1.3.2 Супероксиддисмутаза 2 СОД
1.3.3 Полиморфизм супероксиддисмутаза 2
1.4 Роль каталазы в развитии ИБС
1.4.1 Полиморфизм гена каталазы .
1.5 Ишемическая болезнь сердца и свободнорадикальное окисление липидов
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Объект исследования
2.2. Клиническая характеристика обследуемых групп
2.3. Биохимические методы исследования
2.3.1. Определение окислительной модификации белков плазмы крови
2.3.2. Электрофоретические методы.
2.3.3. Определение содержания малонового альдегида в сыворотке и эритроцитах крови.
2.3.4. Определение активности параоксоназы сыворотки крови
2.3.5. Определение активности эритроцитарной каталазы.
2.3.6. Определение активности супероксиддисмутазы.
2.3.7. Определение липидных и липопротеиновых показателей сыворотки крови.
2.4. Методы генетического исследования.
2.4.1. 2 полиморфизм гена параоксоназы 1 1.
2.4.2. полиморфизм гена параоксоназы 1.
2.4.3. 2 полиморфизм гена каталазы САГ
2.4.4. V полиморфизм гена супероксиддисмугазы2 2.
2.5. Методы статистики, использованные в работе
2.5.1 Номинальные случайные переменные.
2.5.2 Порядковые случайные величины
2.5.3 Непрерывные случайные величины.
2.5.4 Относительные случайные переменные.
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕНТОВ
3.1. Оценка проксидантной активности крови.
3.1.1. Исследование состояния белков в крови больных при инфаркте
миокардом
.3.1.2. Перекисное окисление липидов.
3.2. Активность антиоксидантной системы
3.2.1. Активность ферментовантиоксидантов, уровень МДА и липидгых показателей сыворотки крови
3.3. Молекулярногенетическое тестирование и сравнительный анализ распределения аллелей генов I 2 и , С2Т и 2 V у мужчин и женщин, здоровых и больных
3.3.1. Анализ частот аллелей и генотипов 2 гена 1 в исследуемых группах мужчин и женщин.
3.3.2. Анализ встречаемости аллелей и генотипов в исследуемых группах мужчин и женщин.
3.3.3. Анализ частот аллелей и генотипов 2 в
исследуемых группах мужчин и женщин
3.4. Анализ встречаемости сочетания аллелей V гена 2, 2Т
гена гена 1 и М гена у пациентов исследованных групп мужчин и женщин.
3.5. Изучение прооксидантных и антиоксидантных факторов и молекулярногенетических маркеров генов I 2 и , СС2Т и 2 V у пациентов, перенесших инфаркт миокарда, и в контрольной
3.5.1. Анализ акгивности ферментов антиоксидантной системы у больных с ИМ до лет и здоровых мужчин.
3.5.2. Изучение уровня малонового альдегида в сыворотке крови в обследованных группах мужчин при различных генотипах 1 2 и , С2Т и 2 V
3.6. Анализ липидного спектра в группах мужчин и женщин, носителей разных аллелей гена I 2 и
3.6.1. Анализа липидного спектра в группах мужчин и женщих, носителей разных аллелей гена
3.6.2 Анализ липидного спектра у носителей различных вариантов гена
Глава 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ


Полученные результаты характеризуются своей практической направленностью для медицины и являются полезными для выявления окислительного повреждения белков, которое, как правило, сопровождается необратимыми повреждениями тканей при ряде заболеваний, в том числе и ИБС. ИМ у пациентов. А у лиц, имеющих предрасположенность к развитию сердечнососудистых заболеваний, своевременное выявление низкой антиоксидангной активности крови позволит оптимизировать лечение и проводить первичную профилактику ИБС. Полученные результаты использовались в лекционных курсах и лабораторном практикуме на кафедре биохимии для студентов СанктПетербургской государственной химикофармацевтической академии. Результаты исследования внедрены в практику подготовки и усовершенствования специалистов в области кардиологии на кафедре ФПК и ПП им. И.М. Воронцова ФПК ГОУ ВПО СП6ГМА Росздрава. Результаты исследования используются в курсах подготовки врачей общей практики, а также в лаборатории молекулярной диагностики с расширенной группой экогенетики НИЦ ГОУ ВПО СПбГПМА Росздрава для усовершенствования специалистов в области медицинской и лабораторной генетики. Автором самостоятельно проведен аналитический обзор отечественной и зарубежной литературы по изучаемой проблеме. Биохимические исследования, молекулярногенетическое тестирование, анализ, интерпретация, изложение полученных данных, формулирование выводов и практических рекомендаций в основном выполнены автором лично. СанктПетербург, , научнопрактической конференции Фармация XXI века достижения, проблемы и пути их решения СанктПетербург, , XX Ii i i , i , . Уровень окислительной модификации белков и показатели активности ферментов антиоксидантной системы крови, каталазы, параоксоназьг и супероксиддисмутаз могут использоваться для оценки степени окислительного стресса у больных, перенесших ИМ как в молодом, так и в старшем возрасте. Группы больных ИБС разного пола и возраста различаются по частотам аллелей и генотипов 2 и , С2Т и 2 V и их сочетаний. Выявлена ассоциация низкой активности параоксоназы с генотипом по гену 1 2 у мужчин, перенесших ИМ до лет. Генотип ТТ по гену С2Т и сочетание аллелей 2, М гена 1, 2Т гена и V гена 2 ассоциированы с изменениями липидного спектра крови у мужчин, перенесших ИМ до лет, и женщин с ИБС. Публикации. По теме диссертации опубликовано 8 печатных работ, из них 2 статьи. Диссертация изложена на 8 машинописных страницах и состоит из введения, обзора литературы, экспериментальной части описания материалов и методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов, выводов и списка цитируемой литературы 3 источника. Материал диссертации проиллюстрирован рисунками, содержит таблиц. ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. Биологическое окисление является одним из наиболее распространенных видов биохимических реакций, которые протекают в клетках и обеспечивают жизнедеятельность организма. В частности, в реакциях биологического окисления в качестве окисляемых субстратов выступают белки, липиды и углеводы, а в роли окислителя и акцепторов электронов молекулярный кислород. Основными потребителями кислорода в организме являются митохондрии от до , микросомалыюго от 5 до окисления Осипов А. Н. и соавт. Кроме того, лейкоциты также имеют специализированные системы НАДФНоксидаза для направленного образования всего спектра свободных радикалов кислорода Владимиров Ю. А., . Дополнительным источником АФК является генерация О2 ксантиноксидазой Болдырев , . Основное количество молекулярного кислорода в митохондриях расходуется на окислительный катаболизм субстрата и выработку энергии. С . Концентрация АФК в клетках и тканях относительно невысока, перекиси водорода 8 М, супероксидного радикала М, гидроксил радикала менее М. Н перекисное окисление образован ие поры катал аза. Рисунок 1. Пути генерации и способы защиты от АФК по Скулачев В. Основными мишенями, с которыми в клетках взаимодействуют АФК, являются биомолекулы, в повреждении которых и проявляется повреждающее действие кислородных радикалов. Поэтому при чрезмерном накоплении АФК, пероксидов и их продуктов возникает состояние, так называемый окислительный оксидативный стресс, который и приводит к развитию различных патологических состояний.