Маркеры дифференцировки хорды в эмбриональном развитии белуги

• Автор: Глинка, Андрей Вадимович
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 210 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР. РЕГУЛЯЦИЯ СИНТЕЗА БЕЛКОВ

В ПРОЦЕССЕ КЛЕТОЧНОЙ ДИФФЕРЕНЦИРОВКИ.

Глава I. Дифференцировка клеток хрусталика глаза .

1. Гкристаллины

2. кристаллины II

3. обкристаллины

Глава П. Дифференцировка клеток яйцеводов кур

Глава Ш. Дифференцировка клеток печени

Глава 1У. Появление структурных компонентов соединительной ткани в ходе дифференцировки
1. Структура и функции протеогликанов
2. Использование протеогликанов в качестве маркеров дифференцировки соединительной ткани
3. Структура и функции коллагенов .
4. Коллагены как маркеры дифференцировки
5. Коллагены как индукторы дифференцировки
о гипотезе информационной роли коллагена . э
6. Молекулярные механизмы регуляции биосинтеза коллагенов.
7. Регуляция биосинтеза коллагенов при трансформации клеток.
Глава У. Некоторые закономерности регуляции биосинтеза маркеров клеточной дифференцировки в рассмотренных системах . .
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. Биологический материал
2. Получение экстрактов тканей и зародышей .
3. Определение концентрации белков .
4. Получение иммунных сывороток
5. Электрофорез, иммуноэлектрофорез и изоэлектрофокусирование белков.
6. Получение препаратов коллагена
7. Хроматографическое разделение белков
8. Обработка ферментами
9. Радиоактивное мечение белков
. Радиоиммунологическое определение белков
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.
Часть I. Маркеры дифференцировки хорды.
1. Обнаружение специфического антигена хорды белуги
и его очистка от посторонних антигенов .
2. Характеристика свойств хордина
3. Очистка и характеристика коллагена из хорды
Часть П. Появление маркеров дифференцировки хорды
в ходе эмбриогенеза .
1. Количественное определение общего содержания коллагена П типа в развивающихся зародышах белуги .
2. Количественное определение содержания хордина
в развивающихся зародышах белуги
ПБПЕЕ ОБСУЖДЕНИЕ
ЗАКЛЮЧЕНИЕ задачи дальнейших исследований.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Действие актиномицина Д на культивируемые кусочки яйцевода увеличивало синтез овальбумина примерно в 1,6 раза, а общего белка в 1,3 раза. Эти результаты трактовались как доказательства трансляционного контроля в регуляции биосинтеза овальбумина 8. Однако, последующие исследования, в которых были использованы более мягкие условия для выделения полирибосом, а для измерения содержания овальбуминовой мРНК метод гибридизации с кДНК, показали, что основная масса овальбуминовой мРНК сразу поступает в полирибосомы , на долю ядер приходится 5 и вне полирибосом 2 . Что же касается явления супериндукции, вызываемого актиномицином Д, то было показано, что усиление синтеза, вопервых, имеет место у всех основных секреторных белков яйцевода, и, вовторых, актиноми ция Д не меняет времена полужизни соответствующих мРНК 6. Эти данные отвергают возможность существования короткоживущей нуклеазырегулятора, исчезновение которой могло бы вызвать увеличение синтеза белков яйцеводов. В связи с тем, что нет пула не связанной в полирибосомы мРНК или он очень мал и все равно не может давать заметный прирост в биосинтезе белка высказывается предположение 6 , что актиномицин Д ускоряет инициацию и элонгацию рассматриваемых матриц. Через 2 ч после инъекции начинает выявляться синтез овальбумина и его мРНК анализ ыРНК проводился в бесклеточной ретикулоцитной системе с использованием меченых аминокислот и осаждением продукта специфическими антителами. Нарастание синтеза овальбумина и его мРНК происходит до ч, после чего начинает спадать, причем кривые для мРНК и овальбумина параллельны. Полученные данные свидетельствуют в пользу того, что синтез овальбумина прекращается в результате распада соответствующих матриц . Если после дней инъекций эстрогена прекратить его введение, то происходит уменьшение веса яйцеводов с 1,5 до 0,4 г, а также уменьшается число железистых клеток. НкДНК. При этом время полужизни овальбуминовой мРНК уменьшается с ч измеренное при ежедневных инъекциях эстрогена до ч при отмене этих инъекций . В данном случае, повидимому, существует механизм стабилизации овальбуминовых матриц, вызываемый инъекциями эстрогена. Через дней после отмены инъекций эстрогена гибридизация суммарной РНК из яйцевода с кДНК для овальбумина не выявляет не только целых овальбуминовых мРНК, но и каких бы то ни было фрагментов этих матриц . Это свидетельствует о том, что после отмены гормона полностью прекращается транскрипция, а соответствующие мРНК полностью распадаются. Если через дней после отмены эстрогена провести одну инъекцию этого гормона, то снова появляются матрицы для овальбумина и начинается его синтез. В зависимости от использованного метода мРНК определяется в среднем уже через 0,5 ч после инъекции гормона . Вся эта мРНК сразу же включается в полирибосомы, величина которыхоколо рибосом максимальна и не меняется по ходу активации синтеза белка. С другой стороны, практически вся мРНК для овальбумина, определяемая в клетках, содержится в зоне полирибосом. Для исключения возможного влияния ингибиторных РНК, выявляющихся в зоне седиментации полирибосом, содержащих от 6 рибосом и менее, измерялось их ингибирующее действие на внесенную в пробу глобиновую мРНК, и полученная поправка вносилась в расчеты содержания овальбуминовых мРНК в соответствующих фракциях сахарозного градиента. Несмотря на это, содержание овальбуминовых матриц вне полирибосомной зоны оказалось практически не отличимым от нуля 3 . Подобные изменения после однократной инъекции, следующей за дневной паузой в инъекциях эстрогена, происходят, повидимому, и с остальными основными секреторными белками кональбумином, овомукоидом и лизоцимом. Инъекция других стероидных гормонов вызывает аналогичный, но более слабый эффект. Однако совместное с эстрогеном введение ряда других гормонов вызывает более сильный эффект, что свидетельствует о синергизме их действия 2 . Так, совместное действие тестостерона и эстрогена вызывает более сильную индукцию овомукоида, чем действие лишь одного эстрогена 4 .