Кинетические свойства катеисина Д в сердце, головном мозге при ишемии миокарда и значение эмоционально-болевого стресса в их изменении

• Автор: Крисанова, Наталья Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1991
• Место защиты: Запорожье
• Количество страниц: 159 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
Введение

Глава 1. Свойства катепсина Б и особенности протеолиза в

органах при экстремальных состояниях.

1.1. Структура и специфичность действия, локализация в органах, методы выделения.

1.2. Ингибиторы протеолитической активности катепсина

1.3. Особенности регуляции активности катепсина Б в норме.

1.4. Свойства катепсина Б при ряде патологических состояний

1.5. Особенности протеолиза в органах в норме и при ряде патологических состояний.

Глава 2. Методы исследований.

2.1. Общая характеристика работы.

2.2. Методы выделения препаратов катепсина Б К. Ф.
3. 4. . 5 из сердца и больших полушарий головного мозга крыс.
2.3. Изучение общей, неседиментирующей и седиментирующей активностей катепсина Б К. Ф. 3. 4. . 5 в сыворотке крови и органах крыс
2.4. Методы исследования кинетических характеристик препаратов катепсина Б К. Ф. 3. 4. . 5, выделенных из сердца и больших полушарий головного мозга крыс.
2. 5. Методы изучения влияния . концентраций кальция и
циклического аденозинмонофосфата на активность препаратов катепсина Д К. Ф. 3. 4. . 5, выделенных
из сердца и больших полушарий головного мозга
2.6. Методы определения общей активности нейтральных протеиназ в сыворотке крови, цитозольной нейтральной трипсиноподобной протеиназы К. Ф. 3.
. и акрозина К Ф. 3. 4 в субклеточных фракциях левого желудочка сердца и больших полушарий головного мозга крыс
2.7. Метод определения концентрации белка в пробах.
2. 8. Статистическая обработка материалов данных
2. 9. Характеристика используемых моделей эксперимента
2. 9.1. Воспроизведение перевязки коронарной артерии
2. 9. 2. Методика воспроизведения стресса
Глава 3. Активность катепсина Б и других протеолитических ферментов в сыворотке крови, а также в субклеточных фракциях левого желудочка сердца и больших полушарий головного мозга крыс при исследуемых экспериментальных моделях
Глава 4. Кинетические свойства катепсина О из сердца и больших полушарий головного мозга здоровых крыс и животных, перенесших эмоциональноболевой стресс.
Глава 5. Кинетические свойства катепсина Б из сердца и больших полушарий головного мозга крыс с ишемией
миокарда, воспроизведенной после предварительно
перенесенного стресса х
Глава б. Заключение
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Чувствительность к ингибирующему влиянию сАМР восстанавливается лишь к 7 сут после ПС. Обнаружено, что ПКА сопровождается расширением оптимума действия катепсина 0 из БПГМ и потерей его чувствительности к эффекторам. Цри ПКА, воспроизведенной после ПС, в при
сутствии указанных концентраций Са и сАМР, катепсин Б ведет себя аналогично ферменту от интактных животных, однако оптимум действия фермента близок к данному показателю при ПКА. ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ работы заключается в том, что в ней впервые определены кинетические характеристики катепсина Б, выделенного из сердца и головного мозга при ишемии миокарда и перенесенном стрессе, а также установлено значение перенесенного стресса в изменении указанных свойств фермента при
последующей ишемии миокарда. ПРАКТИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ работы связано с тем, что в ней обоснованы пути регуляции активности катепсина 0, играющего важную роль в процессах повреждения структуры клеток, через изменение концентрации таких внутриклеточных мессенджеров,
как ионы Са и с АМР, что должно занять важное место в комплексной разработке принципов антистрессорной терапии. Предварительно перенесенный стресс и ишемия миокарда являются важными факторами изменения кинетических свойств катепсина 0. Ионы Са и сАМР выполняют роль модуляторов активности катепсина Э как в норме, так и при патологии стрессорной природы. При анализе процесса лабилизации лизосом и выхода катепсина 0 в цитоплазму в условиях воздействия стрессфактора на организм необходимо учитывать кинетические свойства фермента и его чувствительность к концентрации ионов кальция и сАМР. Глава 1. Свойства катепсина и особенности протеолиза в норме и при ряде патологических состояний обзор литературы. Структура и специфичность действия, локализация в органах, методы выделения. Кателсин это лизосомальная тканевая кислая протеиназа, первые литературные ссылки о которой относятся к концу х годов. В году М. В х годах Е. К. Ф. Лизосомальное происхождение катепсина было доказано v С. Именно с этого момента начинается интенсивное изучение свойств данного фермента, его локализации в органах и тканях, субстратной специфичности, природных и синтетических ингибиторов. Уже к концу х годов в научных журналах появилось несколько обзоров по данному ферменту . Н. ,, . В настоящее время известно, что катепсин это гликопротеид, содержащий одну полипептидную цепь, концевой аминокислотой которой является глицин. Молекулярная масса катепсина варьирует в пределах кД в зависимости от источ
ника выделения, фермент обладает значительной молекулярной гетерогенностью. Во многом катепсин сходен по своей структуре с пепсином и другими кислыми протеазами из микробиологических источников, однако своей специфичностью он отличается от пепсина , трипсина и химотрипсина i К. I Т. I. . У представителей большинства видов животных молекула катепсина содержит четыре дисульфидные связи и не имеет свободных групп. Катепсин расщепляет белки и пептиды, содержащие не менее пяти аминокислотных остатков в молекуле. Катепсин отличается от других лизосомальных протеиназ субстратной специфичностью, он не воздействует на синтетические субстраты катепсинов А, В, С, а от катепсина Е отличается отличается оптимумом действия Дингл Д. Оптимум действия фермента для большинства синтетических и природных субстратов лежит в интервале 2,,5. Фермент имеет очень строгую зависимость сродства к субстратам от среды, что в настоящее время используется в очистке катепсина методом аффинной хроматографии Казакова О. В. и др. К. . При очистке фермента очень часто используют методы гельхроматографии ii . В таблице 1. Однако спектр локализации катепсина по различным органам и тканям гораздо шире . Активность фермента определена в сердце . Т. . Строев Е. А. и др. ВавиловаТ. П. и др. Т. . По данным Т. Р. . Гольджи. Непосредственно в связывании прокатепсина участвует клатрин мембранносвязанный белок, фиксация осуществляется через олигосахарид, содержащийся в структуре катепсина . Д, процесс образования конформации фермента и структуру нативной молекулы .