Влияние физиологических лигандов на функционирование легоглобина

• Автор: Космачевская, Ольга Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 193 с. : ил.

Оглавление
Введение

Список использованных сокращений

Часть 1. Обзор литературы

1.1. Гемоглобины распространение, эволюция, функции

1.1.1. Гемоглобины животных

1.1.2. Г емоглобины растений

1.1.3. Гемоглобины грибов и прокариот

1.1.4. Эволюция гемоглобинов

1.1.5.Фу нк ни и гемоглобинов

1.2. Лсгоглобин

1.2.1. Строение, свойства и функционирование легоглобина
1.2.2. Высоко и низкоспиновые комплексы легоглобина
1.2.3. Экспрессия легоглобина в . i
1.3. Легоглобин и окислительный стресс
1.3.1. Активные формы кислорода и азота
1.3.2. Взаимодействие легоглобина с активными формами
кислорода и азота
Часть 2. Материалы и методы исследований
2.1. Условия выращивания растений
2.2. Выращивание и обработка клеток . i редоксмедиаторами
2.3. Получение суммарного белкового препарата из клубеньков бобовых
2.4. Выделение и очистка легоглобина из клубеньков
2.5. Получение белкового экстракта из клеток . i
2.6. Выделение и очистка легоглобина из клеток Е.
2.7. Получение различных форм гемопротеидов
2.8. Определение концентрации гемопрогеидов пиридиигемохромным методом
2.9. Определение общего белка
2 Приготовление образцов НЬ для электрофоретических исследований
2 Электрофорез белков в полиакриламидном геле
2 Определение псроксидазной и каталазной активностей
2 Выделение и очистка лигандов ,
2 Синтез динитрозильных комплексов железа
2 Регистрация динитрозильных комплексов железа методом ЭПР
2 Подготовка клеток для регистрации динитрозильных комплексов железа
2 Регистрация спиновых адцуктов со свободными радикалами
2 Спектрофотометрическое исследование клеток . i
2 Получение гликозилированных гсмопротсидов
2 Спсктрофлуоримстрия
2 Видимая и УФ спектроскопия
2 ИКсисктроскония
2 КДспекгроскопия
2 Метод определения гемоглобинподобпых белков в гетерогенных смесях
2 Реактивы, использованные в работе Часть 3. Результаты и их обсуждение
3.1. Функционирование легоглобина в системе . i
3.2. Функционирование модифицированных легоглобинов
3.2.1. Образование модифицированных легоглобинов i viv
3.2.2. Природа лигандов , и
3.2.3. Взаимодействие глюкозы и метилглиоксаля с гемопротеидами
3.2.4. Взаимодействие соевого а сои с бензилвиологеном, нитрозоппотатионом
и пероксидом третбугила
3.2.5. Пероксидазная активность модифицированного сои
3.2.6. Лиганды , и и соединения В и
3.3. Аитиоксидантное лейст вис динитрозильных комплексов железа, ассоциированных с гемоглобином
Заключение
Выводы
Список цитированной литературы


С момента открытия первого симбиотического гемоглобина у сои в г. . I присутствует даже у примитивного бобового , относящегося к мимозовым i . Обычно Врастениях присутствуют в виде нескольких молекулярных форм которые традиционно называют компонентами . Впервые гетерогенность была обнаружена у сои , В дальнейшем то же самое было показано и для других бобовых. Эпплби высказал предположение, что основные компоненты соевого кодируются разными генами . Впоследствии, это предположение подтвердилось iv . . . Была определена структура генов и ряда других бобовых. У всех изученных бобовых обнаружено по два главных компонента , кодируемых разными генами, а у многих еще найдены и так называемые минорные компоненты. Последние либо также кодируются разными генами, либо являются продуктами посттрансляционной модификации. , так и. V . , , . Как у гороха, так и у сои компоненты , синтезируемые в старых клубеньках, имеют большее сродство к кислороду, чем синтезируемые в молодых клубеньках, что может быть полезно для клубеньков, достигших структурной зрелости, когда нормально функционирует барьер газовой диффузии и количество поступающего в клубенек кислорода ограниченно , , а. У данного растения имеются как корневые, так и стеблевые клубеньки. Оказалось, иго набор компонентов легоглобина различается длядвух типовклубеньков . Первые четкие свидетельства о присутствии симбиотическокого гемоглобина в нсбобовых растениях появились в г. i, так же, как и бобовые, живущего в симбиозе с бактериями ii . i красной ольхи i , казуариновых i ii, мириковых i и i i и лоховых лоха узколистного ii . Гемоглобин был обнаружен и в клубеньках черной ольхи i i i, , , хотя в существенно меньшей концентрации. Начиная с г. , . iv . Матвиенко с соавт. . i . ii vi . . . Все эти растения, кроме ячменя, имеют два и более гена . довольно широко распространены в царстве растений и являются стрессиндуцибельиыми белками . Они обнаружены у мохообразных печеночники и у разных типов водорослей красные водоросли, диатомовые, эвгленовые. обнаружен и у водоросли . , i, . Правда, этот гемоглобин обнаружен в хлоропластах, поэтому его с большим сомнением можно считать настоящим эукариотическим . Следует отметить, чао в растительных тканях присутствуют в микромолярных концентрациях, что намного ниже концентрации в клубеньках мМ. Несимбиотические гемоглобины делят на два класса, согласно их филогении, первичной структуре, биохимическим свойствам и генной экспрессии. Класс 1 белки с чрезвычайно высоким сродством к кислороду, индуцируются в растениях при гипоксии . i . 2 имеют более низкое сродство к кислороду и индуцируются в корнях, листьях исоцветиях при холодовом шоке, обработке цитокининами, а также в ответ на инфекцию патогенами . В отличие от , аминокислотная последовательность 2 близка к , и, вероятно, 2 могут участвовать в транспорте и хранении Ог vi . В , так же, как и в и , 6е координационное положение железа занято остатком гистидина. Таким образом, внешние лиганды конкурируют с дистальным гистидином за место связывания с железом гема , v . Тем не менее, обладают высоким сродством к эгзогенным лигандам и связывают их с высокой скоростью . . Известно, что экспрессия многих гексакоординированных гемоглобииов, в том числе повышается при гипоксии и нитрозативном стрессе . .