Исследование взаимосвязи между биологическими свойствами и структурой белка оболочки вируса табачной мозаики

• Автор: Кошкина, Татьяна Евгеньевна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2003
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 85 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ .

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ .

1. Общая характеристика группы тобамовирусов.

1.1. Морфология вирионов.

1.2. Распространение, симптомы, круг хозяев, перенос .

1.3. Транспорт.

1.4. Цитопатология, тельца включений .

1.5. Структура генома

2. Классификация тобамовирусов.

3. Полные инфекционные кДНКкопии тобамовирусов, транскрибируемые i viv и i vi.
4. Белки кодируемые геномом тобамовирусов и их функциональная
4.1. Репликативные белки
4.2. Транспортный белок.
4.2.1. ОРС ТБ
4.2.2. Родь ТБ в тобамовирусной инфекции.
4.2.3. Обеспечение межклеточного транспорта взаимодействие с плазмодесмами и цитоскелетом
4.3. Белок оболочки БО
4.3.1 .ОРСБО
4.3.2. Структура БО
4.3.3. Депротеинизация вирионов.
4.3.4. Влияние мутаций в БО на характер симптомов, круг растений хозяев и гиперчувствительный ответ.
4.3.5. Устойчивость трансгенных по БО растений к вирусной инфекции.
5. Казахские изоляты ВТМ.
5.1. Биологические свойства
5.2. Сравнение аминокислотных последовательностей.
5.3. Корреляция между проявлением биологических свойств и структурой капсидного белка
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.
1. Реактивы
2. Ферменты и наборы
3. Векторы и бактериальные штаммы
4. Определение спектра растенийхозяев.
5. Выделение и очистка препарата изолята ВТМКЗ
6. Выделение РНК
7. Синтез первой цепи кДНК
8. Полимеразная цепная реакция.
9. Очистка ПЦРфрагментов электрофорезом в агарозном геле .
. Получение генноинженерных конструкций
. Выделение плазмидной ДНК.
. Транскрипция i vi
. Инокуляция растений РНКтранскриптами.
. Электрофорез в сочетании с ИФЛ Вестернблоттииг.
. Определение нуклеотидной последовательности ДНК.
. Электронная микроскопия.
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
1. Биологические свойства ВТМКЗ .
2. Клонирование и секвенирование Зконцевой области генома
ВТМКЗ
3. Сравнительный анализ аминокислотных последовательностей
ТБ и БО Казахских изолятов и ВМТо
4. Стратегия проведения мутагенеза
5. Исследование кинетики дальнего транспорта и 4.
6. Электронномикроскопические исследования
ОБСУЖДЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ВВЕДЕНИЕ . ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ . Общая характеристика группы тобамовирусов. Морфология вирионов. Распространение, симптомы, круг хозяев, перенос . Транспорт. Цитопатология, тельца включений . Классификация тобамовирусов. Полные инфекционные кДНКкопии тобамовирусов, транскрибируемые i viv и i vi. Транспортный белок. Родь ТБ в тобамовирусной инфекции. Депротеинизация вирионов. Влияние мутаций в БО на характер симптомов, круг растений хозяев и гиперчувствительный ответ. Устойчивость трансгенных по БО растений к вирусной инфекции. Казахские изоляты ВТМ. Сравнение аминокислотных последовательностей. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ. Определение спектра растенийхозяев. Полимеразная цепная реакция. Очистка ПЦРфрагментов электрофорезом в агарозном геле . Выделение плазмидной ДНК. Инокуляция растений РНКтранскриптами. Электрофорез в сочетании с ИФЛ Вестернблоттииг. Определение нуклеотидной последовательности ДНК. Электронная микроскопия. Биологические свойства ВТМКЗ . Исследование кинетики дальнего транспорта и 4. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ . Тобамовирусы заражают большое количество видов растений, особенно существенный ущерб они наносят семейству пасленовых. Начало исследований феномена вирусов положили работы Ивановского с вызывающим инфекцию агентом на примере мозаичного заболевания табака. В первых биологических испытаниях с растительными вирусами были использованы растения ii i, симптомы инфекции на которых были обнаружены на инокулированных листьях. ВТМ первый вирус, который был выделен и очищен, что позволило установить Баудену и Пирье в г. , . ВТМ первый вирус, палочковидные частицы которого были обнаружены с помощью электронного микроскопа , . Исследования показали, что генетическим материалом ВТМ является РНК. ВТМ был первым вирусом, на котором был проведен мутагенез. Первый вирусный белок, для которого была определена аминокислотная последовательность, был белок оболочки ВТМ. Последующее определение последовательности аминокислот белка оболочки для некоторых штаммов и мутантов помогли установить универсальность генетического кода. Методы инфицирования протопластов растений были отработаны на комбинации табакВТМ, создавшей синхронную систему для изучения инфекционного цикла. Таким образом, вирус табачной мозаики является классическим и, пожалуй, одним из наиболее изученных объектов вирусологии. С тех пор вирус табачной мозаики ВТМ играет центральную роль в современных фундаментальных исследованиях вирусологии.