Подходы к созданию вакцин против гепатита В на основе HBcAg

• Автор: Веремейко, Татьяна Александровна
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 111 с. : ил.

Оглавление

Список сокращений.

Введение

1. Обзор Литературы

1.1. Гепатит В.

1.2. Вакцины против гепатита В.

1.3. Вакцины на основе химерного НВсА.

1.4. Способы доставки антигенов НВУ .

2. Материалы и методы

Выделение плазмидных ДНК.

Трансформация бактериальных клеток.

Конструирование рекомбиантных ДНК
Выделение рекомбинантных белков
Электрофорез в акриламидном геле и иммуноблоттинг белков
Электронная микроскопия
Иммунизация лабораторных животных
Иммуноферментиый анализ
Трансфекция.
ЕЫРОТ
Математические методы исследований
3. Результаты и обсуждения.
3.1. Конструирование химерных
3.1.1. Выбор иммуногенных фрагментов поверхностного белка IIV.
3.1.2. Конструирование плазмид, экспрессирующих химерные белки НВс, несущие эпитопы и 2
3.1.3. Анализ физикохимических параметров встроек в .
3.2. Исследование иммуногенности химерных частиц .
3.3. Способы доставки
3.3.1. Доставка с помощью аттенуированного штамма сальмонеллы . iiii В
3.3.2. Конструирование и исследование иммуногенных свойств ДНК вакцины на основе
4. Заключение
И ы воды.
Список публикаций
Благодарности
Список литературы


Для разработки вакцин, стимулирующих мукозальный иммунный ответ можно использовать такие подходы, как липосомные конструкции, содержащие антигены , , вирусные вектора, доставляющие гены патогенов , i i, . Весьма интересным в этом плане представляется создание вакцин на основе живых аттенуированных штаммов сальмонелл, продуцирующих чужеродные антигены. Ослабленные, но способные к инвазии рекомбинантные штаммы сальмонелл являются привлекательным средством представления гетерологичных антигенов слизистой и системной иммунной системе. Сальмонеллы обладают естественной способностью проникать через эпителий слизистой, преимущественно через Мклетки и размножаться как в локальных интерстинальных лимфоидных образованиях, гак и парентеральной лимфоидной ткани. Таким образом, сальмонеллы дают возможность непарентерального способа введения вакцин, индуцируют клеточный, гуморальный и секреторный звенья иммунитета, способствуя развитию резистентности во входных воротах инфекции i 3, , . Так как клеточный иммунный ответ играет значительную роль в элиминации вируса из организма необходимо, чтобы вакцина против ГВ, обеспечивала усиление именно этого звена иммунитета. Одним из таких подходов может быть ДНК вакцинация. Работы последних лет показывают, что наиболее полного и адекватного иммунного ответа при вакцинации можно достичь, применяя схемы, включающие в себя несколько способов доставки, такие как рекомбинантный белок и ДНК вакцина. КошбЫ е а, СоЬап е1 а1, Xi е а, . Цслыо данной работы было получение и исследование иммуногенности химерных частиц НВсА несущих эпитопы районов ргеБ 1 и рге поверхностного белка НВУ получение и исследование иммуногеиных свойств аттенурованного штамма сальмонелл, продуцирующего IШ и ДНК вакцины, содержащей ген НВсА НВсА несущие эпитопы районов ргеБ Вирус гепатита В, относящийся к семейству vii, обнаруживается у человека и у обезьян i, . Было показано, что изолятами V, выделенными у человека можно заражать обезьян , . Вопрос о возможности заражения человека вирусом гепатита В, циркулирующим в популяции обезьян остается не выясненным. Существуют близкородственные вирусы вирус гепатита пекинских уток и вирус гепатита хомяков, которые служат моделью для исследования ГВ i, v , . Геном вируса гепатита В достигает п. ДНК, состоящую из двух цепей, одна из которых плюсцепь на 13 короче минусцепи. Геном вируса кодирует четыре белка рис. Ген имеет три стартовых кодона, которые обеспечивают синтез трех белков разной длины. Самый маленький из них, содержит только основную часть и имеет обозначение . Второй по длине М белок i, имеет дополнительный район, называемый . Наиболее крупный белок состоит из трех частей основной, и 2 районы. Поверхностные белки закреплены в липидной мембране и образуют оболочку вирусной частицы. Соотношение белков различной длины в оболочке 325 , . белок II является каркасным, составляющим основную часть оболочки. район поверхностного белка несет сайт связывания с рецепторами гепатоцитов i , . Функции района 2 не ясны, но есть данные о сайте связывания сывороточного альбумина в районе 2 белка , . Другой ген с обеспечивает синтез двух белков Нс и НВе рис. НВс организуется в цитоплазме сначала в димерную форму, а затем в икосаэдрические частицы по 0 или 0 субъединиц, называемые кором или . Внутри коровой частицы упаковывается геномная ДИК и молекула ДНКполимеразы. НВе имеет дополнительный участок с конца белковой молекулы, позволяющий ему секретироваться из клетки. Присутствие этого антигена в сыворотке пациента позволяет судить о высоком уровне репликации вирусной ДНК. Несмотря на идентичность большей части аминокислотной последовательности НВс и НВе белков, антигенные и иммуногенные свойства двух антигенов различаются i , . Это отражает разницу третичной структуры белков и способность НВс белка, в отличие от НВе, формировать частицы. Рис. Структура генома А и строение частицы вируса гепатита В Б.