Разработка рекомбинантных антигенов и генетических маркеров для диагностики цитомегаловирусной инфекции

• Автор: Суслопаров, Иван Михайлович
• Шифр специальности: 03.00.03
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Кольцово
• Количество страниц: 134 с. : ил.

Содержание

Список использованных сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. История открытия цитомегаловируса.

1.2. Эпидемиология цитомегаловирусной инфекции.

1.2.1. Распространение возраст и демография

1.2.2. Пути передачи.

1.3. Этиология ЦМВ.

1.3.1. Структура вириона, вирусные белки.

1.3.2. Структура генома ЦМВ

1.3.3. Иммунный ответ на цнтомегаловирусную инфекцию
1.4. Патогенез цитомегаловирусной инфекции.
1.5. Диагностика цитомегаловирусной инфекции и антигены ЦМВ.
1.5.1. Лабораторная диагностика
1.5.2. Гснстичсские маркеры ЦМВ
1.5.3. Серодиагностика цитомегаловирусной инфекции.
1.5.3.1. ИФА тестсистемы
1.5.3.2. Антигены ЦМВ
Глава 2. Материалы и методы
Глава 3. Результаты и обсуждение.
3.1. Теоретический анализ
3.1.1. Теоретический анализ иммунодоминантных белков ЦМВ.
3.1.1.1. Главный матричный фосфопротеин рр0
3.1.1.2. ДПКсвязывающий белок р.
3.1.1.3. Матричный белок тегумента рр.
3.1.2. Разработка генетического маркера на основе гена Ь ЦМВ
3.2. Клонирование и экспрессия выбранных генов.
3.3. Разработка генетического маркера
3.4. Выявление маркеров патогенности.
Заключение.
Выводы.
Список цитируемой литературы


Сконструирован бактериальный экспрессирующий вектор, кодирующий последовательность из шести гистидинов на Сконцс целевого рекомбинантного белка, которая является мишенью для аффинной очистки на металлохелатных сорбентах. Продемонстрирована перспективность использования полученных в данной работе рекомбинантных белков гр, грр и грр0 в качестве специфических антигенов для выявления антител к цитомсгаловирусу человека методом ИФЛ. Показано, что меченые моноспецифические кроличьи антисыворотки, полученные к рекомбинантным белкам грр0 и грр, позволяют с помощью иммунофлуоресцентпого анализа диагностировать острую стадию ЦМВ инфекции. Олигонуклсотидныс праймеры, подобранные к участку гена Ь, кодирующему концевой район гликопротеина В ЦМВ, пригодны для специфического выявления геномных ДНК различных штаммов и клинических изолятов цитомегаловируса человека методом ПЦР. В настоящее время в диагностике латентных вирусных инфекций в России главное место принадлежит иммунофермептному анализу ИФЛ, ввиду его общедоступности. Следует отметить, что сертифицировано лишь ограниченное количество отечественных ИФА тестсистем для выявления антител к цитомегаловирусу, а импортные тестсистемы имеют очень высокую стоимость. Поэтому практическая ценность данного исследования заключается, прежде всего, в получении рекомбинантных антигенов, пригодных для разработки на их основе более дешевых отечественных диагностических систем, не уступающих импортным аналогам. Сконструированные в данной работе рекомбинантные антигены в настоящее время используются такими отечественными производителями диагностических наборов, как ЗЛО ВскторБсст Новосибирск, ЗАО Медикобиологический союз Новосибирск и ЗАО Имди Новосибирск Суслопаров МА, Суслопаров ИМ, Ивченко СН, . Разработана, сконструирована и утверждена в ГИСК им. Л.А. Тарасевича стандартная панель сывороток для определения антител класса О к цитомегаловирусу человека Ивченко СН, . Олигонуклеотидые праймеры, подобранные к участку гена иЬ, кодирующему концевой район гликопротеина В ЦМВ, могут быть использованы для создания диагностических ПЦР тестсистем, а также для типирования изолятов цитомегаловируса по генотипам В. Плазмидиая конструкция, включающая фрагмент гена ЦМВ, обеспечивает биосинтез в клетках . ЦМВ. Плазмидиая конструкция, включающая фрагмент гена ЦМВ, обеспечивает биосинтез в клетках . ДНКсвязывающего белка р ЦМВ. Плазмидиая конструкция, включающая фрагмент гена ЦМВ, обеспечивает биосинтез в клетках . ЦМВ. Использование рекомбинантных белков гр, грр и грр0 в ИФА позволяет выявлять антитела, специфичные к цитомсгаловирусу человека. Флуоресцентные антисыворотки к рекомбинантным белкам грр и позволяют детектировать цитомегаловирус в клинических образцах с помощью иммунофлуорссцснтного анализа i i. Олигонуклеотидные праймеры к гену , используемые в системе ПЦР, позволяют обнаруживать геномные ДНК различных штаммов и клинических изолятов цитомегаловируса человека. v I. М., v М. ., v I. V., iv V. М. i i i i ii i vi, , Ii vi , , , , , ii. v . ., v I. М., v I. V., iv V. . i i i i vi, , Ii vi , , , , , ii. Юбилейная конференция, посвященная летию журнала Молекулярная биология ПОЛУЧЕНИЕ РЕКОМБИНАНТНЫХ АНТИГЕНОВ ЦИТОМЕГАЛОВИРУСА ЧЕЛОВЕКА V. Институт молекулярной биологии им. В.А. Энгсльгардта РАН, Москва. . . v, I. . v, . . v, М. . i, . . v, . . iv, . v, . . . v, I. . v, М. . i, I. V. v, . Суслонаров . ., Суслопаров И. М. Генетические маркеры герпесвирусов человека. Российская научнопрактическая конференция Генодиагностика инфекционных болезней, Новосибирская обл. Сосновка, октября г.