Механизмы праймирования респираторного взрыва нейтрофилов

• Автор: Миллер, Анна Викторовна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 126 с. : ил.

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Нейтрофил

1.1.1. Функции нейтрофилов

1.2. Респираторный взрыв нейтрофилов

1.2.1. оксидаза

1.2.1.1. Структура и функции субъединиц

оксидазы

1.3. Праймирование нейтрофилов

1.3.1. Прашшрующие агенты

1.3.2. Механизмы праймирования респираторного взрыва нейтрофилов

1.4. Внутриклеточные системы, вовлеченные в передачу сигнала от рецептора ФМЛФ при развитии респираторного взрыва
1.4.1. Митогенактивируемые протеинкиназы
1.4.2. Ферменты гидролиза фосфолипидов
1.4.3. ФосфатидилинозитолЗкиназа
1.4.4. Утилизация глюкозы при респираторном взрыве нейтрофилов
1.5. Праймирование липополисахаридом
1.6. Праймирование инсулином
Глава 2. Материалы и методы
2.1. Материалы
2.2. Методы
2.2.1. Биологический объект
2.2.1.1. Изоляция нейтрофилов мышей
2.2.2. ДДСэлектрофорез и иммуноблоттинг
2.2.2.1. Фосфорилирование клеточных белков
2.2.3. Регистрация хемилюминесценции
2.2.4. Статистическая обработка результатов
Глава 3. Результаты исследований
3.1. Активация респираторного взрыва ФМЛФ в различных концентрациях
3.2. в активации и праймировании респираторного взрыва нейтрофилов
3.2.1. Участиер МАРК ир в действии инсулина
3.2.2. Участие р МАРК в действии ЛПС на респираторный взрыв нейтрофилов
3.3. Действие фосфолипаз при активации и праймировании инсулином и ЛПС респираторного взрыва нейтрофилов
3.4. Определение участия ФИЗК в действии инсулина на респираторный взрыв нейтрофилов
3.5. Вклад глюкозы в прайм про ван не инсулином и ЛПС респираторного взрыва нейтрофилов
3.6. Исследование вклада глюкозы в праймирование кальциевым ионофором иономицином и в активацииию ФМА респираторного взрыва нейтрофилов
3.6.1. Праймирование кальциевым ионофором реакции нейтрофилов на ФМА в средах с глюкозой и 2ДОГ
3.6.2. Оценка вклада кальцийзависимых процессов в утилизацию глюкозы при развитии респираторного взрыва Глава 4. Обсуждение
4.1. Роль митогенактивируемых протеинкиназ в праймировании инсулином и липополисахаридом респираторного взрыва нейтрофилов.
4.2. Участие фосфолипаз в праймировании инсулином и пипополисахаридом респираторного взрыва нейтрофилов
4.3. Участие фосфатидилинозитол3киназы в действии инсулина на респираторный взрыв нейтрофилов
4.4. Вклад глюкозы в пЬраймирование кальциевым ионофором иономицином и в активацииию ФМА респираторного взрыва нейтрофилов
Выводы
Список литературы


Полиморфноядерные нейтрофильные гранулоциты нейтрофилы участвуют во врожденном иммунном ответе и обеспечивают первую линию защиты организма от вторгшихся бактерий. Миграция нейтрофилов в очаг острого воспаления происходит в градиенте хемотаксических факторов, одним из которых является формилМетЛейФен ФМЛФ. Респираторный, или дыхательный, взрыв нейтрофилов представляет собой массированный выброс активных форм кислорода при усиленном потреблении кислорода и глюкозы. Активация фермента вызывает уменьшение концентрации в клетке, что активирует окисление глюкозы через гексозомонофосфатный шунт ГМШ основной поставщик в нейтрофилах . При этом может утилизироваться глюкоза из внеклеточной среды иили глюкоза, запасенная в клетке . С ФЛС, инозитол1,4,5трисфосфата, Са2 и протеинкиназы С по . Кроме того, было показано участие каскада митогенактивируемых протеинкиназ . ФИЗК . Многими авторами разрабатывается концепция активации нейтрофилов как двухступенчатого процесса . Сначала нейтрофилы взаимодействуют с агентами, которые не активируют клетку, а переводят ее в состояние готовности к ответу , . Затем уже подготовленный нейтрофил получает соответствующий стимул, что приводит его к полностью активированному состоянию. Процесс, при котором предварительная обработка клетки агентом приводит к последующему усилению ответа на активацию, называют праймированием от англ. В настоящее время интенсивно изучается праймирование функций нейтрофилов цитокинами, хсмотаксическими факторами, метаболическими регуляторами, действующими через рецепторы, принадлежащие к разным семействам . Сами праймирующие агенты не вызывают изменений функций нейтрофилов, в том числе респираторного взрыва, но их предварительное воздействие приводит к усилению ответа на активацию. В зависимости от рецептора, через который действует праймирующий агент, могут реализоваться разные механизмы праймирования нейтрофилов изменения в уровне экспрессии адгезивных молекул на поверхности клетки освобождение содержимого гранул полимеризация актина фосфорилирование синтез белка v модуляция Са2 активация фосфолипаз образование биоактивных липидов i . Показано, что при праймировании активность протсинкиназ, в том числе и тирозиновых киназ, может увеличиваться в несколько раз i . Одним из механизмов праймирования является усиление фосфорилирования белков по остаткам тирозина. Запуск тирозинового фосфорилирования осуществляется через рецепторы, обладающие своей собственной тирозинкиназной активностью, к ним относят рецептор инсулина. Данные о праймирующем действии инсулина на респираторный взрыв нейтрофилов отсутствуют. Известно, что праймирование нейтрофилов бактериальным липополисахаридом ЛПС, основным рецептором которого на нейтрофилах считается , гликозилфосфатидилинозитолсвязанный гликопротеин i , vi i, , сопровождается усилением респираторного взрыва i , . Однако последовательность внутриклеточных событий после связывания ЛПС нейтрофилами неизвестна, как и характер взаимодействия сигнальных систем рецепторов ЛПС и формулированных пептидов в регуляции респираторного взрыва нейтрофилов. Изучение внутриклеточных сигнальных систем, вовлеченных в праймирование, поможет понять механизмы, которыми регулируются специфические функции нейтрофилов, и развить терапевтические стратегии против чрезмерной цитотоксичности нейтрофилов. Цели и основные задачи исследования. Цель работы заключалась в исследовании механизмов праймирующего действия инсулина и ЛПС и участия глюкозы в респираторном взрыве нейтрофилов. ЛПС. Научная новизна работы. ФМЛФ. Показано, что утилизация внутриклеточной глюкозы в нейтрофилах при развитии респираторного взрыва происходит с участием кальцийзависимых процессов. Научнопрактическая ценность. Полученные результаты раскрывают некоторые аспекты функционирования нейтрофилов на уровне внутриклеточной сигнализации, а также дают основу для новых терапевтических стратегий при лечении воспалений и могут быть использованы при прогнозировании течения многих заболеваний. Апробация работы. Норвегия, i i i i Бельгия, . АЦ аденилатциклаза.