Механизмы актин-обусловленной подвижности бактерии Listeria Monocytogenes

• Автор: Самарин, Станислав Николаевич
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2004
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 99 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

I. ВВЕДЕНИЕ

II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Актин.

2.2. Тредмиллинг

2.3. Динамика актина в клетке.

2.4. кофилины.

2.5. Профилин и Тр4.

2.6. Копирующие белки и гельзолин.

2.7. Комплекс Агр23

2.8. Белки семейства .
2.9. ii и белок
2 Белки семейства V
III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Белки
3.2. Исследование взаимодействия комплекса Агр23 и V i vi.
3.3 Полимеризационные тесты.
3.4. Видеомикроскопия.
3.5. ii .
3.6. полистиреновые бусины.
3.7. Статистическая обработка данных
IV. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ.
4.1. Для создания новых филаментов комплексом Агр23 необходимы плюсконцы
существующих актиновых филаментов.
4.2. Актиновые филаменты, растущие из одного узла разветвления, имеют равные
4.3. Новые актиновые филаменты растут с плюсконцов филаментовзатравок.
4.4. Комплекс Агр23 не взаимодействует с V
4.5. V не оказывает эффекта на кинетики полимеризации актина в присутствии
комплекса Агр23, активированного растворимым .
4.6. V увеличивает плотность ветвления актиновых филаментов комплексом Агр23, но не меняет кинетики их деветвления.
4.7. микросферы.
4.8. V необходим для движения м и кросфср
4.9. V усиливает нуклеаторный эффект комплекса Агр23, активированного на
поверхности полистиреновых микросфср и ii
4 V связывает актиновые филаменты с на поверхности полистиреновых микросфер независимо от комплекса Агр23.
4 V не связывается с плюсконцами актиновых филаментов и не препятствует кэпированию плюсконцов филаментов копирующими белками.
4 V не участвует в регуляции процесса кэпировання плюсконцов филаментов копирующими белками при движении микросфер
4 V уменьшает плотность ветвления актиновых филаментов активированным комплексом Лгр23, увеличивая расстояние между соседними
точками ветвления
V. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
VI. ОСНОВНЫЕ ВЫВОДЫ
БЛАГОДАРНОСТИ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


V связывает актиновые филаменты с на поверхности полистиреновых микросфер независимо от комплекса Агр23. V не связывается с плюсконцами актиновых филаментов и не препятствует кэпированию плюсконцов филаментов копирующими белками. VI. ПРИЛОЖЕНИЯ. АМФ циклический адснозинЗ. I. ВВЕДЕНИЕ. Актиновый цитоскелет основа клеточной морфологии и подвижности. Актин обнаружен практически во всех типах эукариотических клеток и может составлять более от всего клеточного белка. Из актиновых филаментов построен жсткий, но в то же время подвижный и динамически изменяющийся каркас клетки клеточный кортекс, который придат механическую прочность поверхностному слою клетки и играет ведущую роль в таких важнейших для жизни клетки процессах, как локомоция, изменение формы и различные типы внутриклеточной реорганизации. Полимеризация актина также является движущей силой для внутриклеточного перемещения некоторых патогенных организмов, таких как ii и i. В настоящий момент одним из важнейших вопросов клеточной биологии является вопрос о том, каким образом клетка интегрирует сигналы, приходящие с различных рецепторов, и осуществляет направленную и строго регулируемую полимеризацию актина в ответ на внешнее раздражение. Открытый в году белковый комплекс Агр23 . Состоящий из 7 субъединиц, две из которых Агр2 и АгрЗ имеют структурную гомологию с актином, комплекс Агр23 локализован в примембранном пространстве переднего края движущейся клетки ламеллоподии и в актиновых бляшках, где под действием белковактиваторов он создат актиновые филаменты v. При этом комплекс Агр23 организует филаменты в дихотомически ветвящиеся структуры, придавая дополнительную жсткость актиновой сетке в области выпячивания плазматической мембраны. В клетках эукариотов активаторами комплекса Агр23 являются белки из семейства . выполняет функцию белкаадаптора, передающего сигналы с тирозинкиназных рецепторов и ГТФаз, таких как , на Агр23 комплекс ii . ii . Таким образом, работает как устройство, интегрирующее различные сигналы и инициирующее направленную полимеризацию актина за счет локальной активации комплекса Агр23. Бактериальный мембранный белок А . ii имеет функциональную гомологию с . Этот белок единственный бактериатьньш белок, необходимый для движения ii внутри инфицированной клетки. Благодаря тому, что ii обходит сигнальные пути клетки, а также изза того, гго активирует комплекс Агр23 подобно , ii используется многими исследователями как удобная модельная система для изучения процессов клеточной подвижности. Не так давно в литературе появились данные о вовлеченности белков семейства V . При этом показано, что во время движения ii V взаимодействует с и остатся на поверхности бактерии. Скорость движения ii в отсутствие V очень мата и возрастает в раз, если в среде присутствует V i . Однако до настоящего времени остатся непонятным ни механизм активации Агр23 комплекса белком , ни роль V в этом процессе. Цель и задачи работы. Исходя из вышесказанного, целью данной работы было исследование механизма образования актиновых филаментов активированным комплексом Агр23 и роли V в этом процессе. Изучить процесс ветвления актиновых филаментов комплексом Агр23, активированным . Изучить роль V в регуляции полимеризации актина активированным комплексом Агр23 в растворе. Создать модельную систему для изучения процессов, происходящих на поверхности ii, и использовать е для определения функции V в регуляции движения бактерии. Научная новизна. В настоящей работе было доказано взаимодействие активированного комплекса Агр23 с плюс концом существующих актиновых филаментов для создания новых филаментов. Это разрешило давнюю полемику между сторонниками гипотезы о ветвлении актиновых филаментов комплексом Агр23 с плюс конца существующего филамента i .