Изменение состава легких цепей миозина миокарда при адаптационно-патологических процессах: перспективы для диагностики

• Автор: Бледжянц, Диана Арсеновна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2009
• Место защиты: Пущино
• Количество страниц: 114 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список использованных сокращений

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. СТРУКТУРНЫЕ И ФЕРМЕНТАТИВНЫЕ

1.1. ХАРАКТЕРИСТИКИ МИОЗИНА И ЕГО НИТЕИ Состав молекулы миозина миокарда

1.2. Легкие цепи миозина миокарда

1.3. Функциональная роль легких цепей миозина миокарда

1.4. Изоформы легких и тяжелых цепей миозина миокарда

1.5. Состав миозина предсердий и желудочков в норме

1.6. Структура нитей миозина

1.6.1. Нативные нити сердечного миозина
1.6.2. Синтетические нити миозина
1.6.3. Роль легких цепей в проявлении структурных
1.7. характеристик нитей миозина Ферментативные характеристики миозина и его нитей
1.8. Роль легких цепей в актинактивируемой АТФазной
активности миозина ГЛАВА 2. ИЗМЕНЕНИЯ В МИОЗИНЕ МИОКАРДА ПРИ
2.1. АДАПТАЦИИ И ПАТОЛОГИИ Ремоделирование сократительного аппарата кардиомиоцитов
2.2. при адаптационных процессах Ремоделирование сократительного аппарата кардиомиоцитов
2.3. при дилатационной кардиомиопатии Ремоделирование сократительного аппарата кардиомиоцитов
2.4. при гибернации Внутрисердечная гемодинамика при клапанных патологиях
2.5. Патофизиология ишемических и реперфузионных
2.6. повреждений миокарда Биохимические маркеры повреждения миокарда
Резюме по обзору литературы
1ЩЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ
ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ
ГЛАВА 3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
3.1. Экспериментальный материал
3.2. Клинический материал
3.3. Выделение и очистка белковых препаратов
3.3.1. Выделение и очистка миозина из сердечной мышцы
3.3.2. Выделение и очистка легких цепей миозина из сердечной мышцы человека
3.3.3 Выделение и очистка актина скелетных мышц кролика
3.4. Определение АТФазной активности миозина суслика в
присутствии актина
3.5. Определение концентрации белковых препаратов
3.6. Электрофорез в полиакриламидном геле
3.7. Иммуноблоттинг
3.8. Исследование концентрации троионинаТ и аутоантител к ЛЦ миозина миокарда в венозной крови пациентов с помощью твердофазного иммуноферментного анализа
3.9. Методика искусственного кровообращения
3 Методика выполнения кардиоплегии
3 Методика статистической обработки материала
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЯ
ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ПОВЕДЕНИЯ ЛЕГКИХ ЦЕПЕЙ
МИОЗИНА ПРИ АДАПТАЦИИ И ПАТОЛОГИИ
4.1. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ миозина
миокарда в разных отделах сердца предсердие, желудочек
при разных состояниях сусликов i зимняя спячка, пробуждение, активность
4.2. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина
миокарда человека в желудочках сердца при развитии ДКМГ
4.3. Изучение изменений в изоформном составе ЛЦ1 миозина
миокарда левых отделов сердца человека при клапанной патологии
4.4. Изучение закономерности появления аутоантител к ЛЦ
миозина миокарда в крови пациентов, оперированных по
поводу клапанной патологии сердца ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ
ФИНАНСОВАЯ ПОДДЕРЖКА РАБОТЫ
Список использованной литературы


Подобные исследования в случае ДКМП предстояло провести. Потеря ЛЦ миозина ингибирует ферментативную и регуляторную способность миозина Халина и др. Халина и Подлубная, i . ЛЦ в миокардиальной ткани в свободном, не связанном с ТЦ миозина виде может приводить к их миграции в кровоток. Зарегистрировано появление ЛЦ миозина в крови пациентов с инфарктом миокарда и при сердечной недостаточности i . . . ii . Следовательно, ЛЦ миозина можно отнести не только к важным факторам адаптации, но и к важным белкаммаркерам развития ряда сердечных патологий. В данной работе этот потенциал ЛЦ миозина миокарда исследуется в адаптационных процессах при зимней спячке сусликов i и в адаптационнопатологических процессах при развитии ДКМП, а также при клапанной патологии сердца человека для выяснения роли ЛЦ в этих процессах и создания основы для их диагностики. ГЛАВА 1. Белок миозин фермент АТФаза, присутствующий во всех типах мышц. Молекула миозина состоит из шести полипептидных цепей двух тяжелых цепей ТЦ с молекулярной массой около 5 кДа и двух пар легких цепей ЛЦ с молекулярной массой порядка кДа . i , i, . . . Рис. Две тяжелые цепи закручены в двойную спираль ii и образуют так называемый хвост длиной примерно 0 нм, который на концс переходит в две глобулярные головки размером около 00АхАхА. С каждой головкой нековалентно связана пара ЛЦ. В головках локализованы АТФазный и актинсвязывающий центры. Район перехода между головками и хвостом является гибким шарниром, еще один шарнир имеется в хвосте. Шарнирные участки чувствительны к протсолизу, и при обработке миозина протеолитическими ферментами можно получить определенный набор фрагментов, которые делят между собой свойства исходного миозина . , . Сконцевой фрагмент называется легким меромиозином ЛММ и составляет примерно две трети хвоста. Он нерастворим при низкой ионной силе и определяет агрегационные свойства миозина, а также отвечает за правильную упаковку миозиновых молекул в стволе толстой нити Подлубная, . Тяжелый меромиозин включает в себя две головки субфрагменты1, С1 и часть хвоста субфрагмент2, С2. Он растворим при низкой ионной силе и сохраняет АТФазные и актинсвязывающие свойства. Определение кристаллической структуры миозиновой головки на атомном уровне . Рис. Моторный домен образован концевой частью тяжелой цепи и представляет собой глобулярную часть головки. Здесь аспиральные участки чередуются со складчатыми 3струкгурами. Характерной особенностью строения моторного домена является наличие двух глубоких щелей или карманов . Один из таких карманов формирует нуклеотидсвязывающий центр. Другая глубокая и узкая щель начинается от актинсвязывающсго центра, расположенного на противоположной стороне моторного домена, и заканчивается недалеко от нуклеотидсвязывающего центра. Ей отводится важная роль в осуществлении коммуникации между двумя центрами в ходе сократительного цикла. В Сконцевой части моторного домена, в районе перехода в регуляторный домен, расположены две реактивных группы 7 и 2, которые можно ковалентно сшить определенными бифункциональными реагентами. Сшивка уменьшает расстояние между ними и приводит к запиранию нуклеотида в активном центре , . Это указывает на возможность конформационных изменений в этой области моторного домена в процессе гидролиза АТФ. Регуляторный домен, или район шейки головки, соединяет моторный домен и хвостовую часть миозиновой молекулы. Он состоит из вытянутой асиирали тяжелой цепи длиной около 8. ЛД. Местами присоединения ЛЦ являются копии консервативной аминокислотной последовательности аспирали примерно из остатков. Их принято обозначать как Iучастки , Xi . Механизм, определяющий специфичность связывания конкретной легкой цепи со своим Iучастком тяжелой цепи, до конца не выяснен.