Структурно-функциональное состояние иммуноцитов при их взаимодействии с гуморальными факторами иммунной системы в условиях УФ-облучения

• Автор: Двурекова, Евгения Александровна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2005
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 213 с. : ил.

1.1. Функциональные особенности клеток иммунной системы.

1.2. Основные рецепторы на поверхности иммуноцитов

1.3. Общая характеристика цитокинов. Роль фактора некроза опухоли

в иммунологических реакциях.

1.4. УФиндуцированные изменения структурного и функционального

состояния иммуноцитов.

ГЛАВА 2. Система комплемента особенности строения, функциони

рования и регуляции активности С4 компонента

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования

3.1 .Объекты исследования.

3.2. Методы исследования
3.2.1. Выделение лимфоцитов из крови человека.
3.2.2. Получение Тлимфоцитов
3.2.3. Выделение макрофагов из перитонеальной жидкости мыши
3.2.4. Получение супернатанта иммуноцитов.
3.2.5. Выделение нейтрофилов из крови человека
3.2.6. Получение сыворотки крови
3.2.7. УФоблучение исследуемых образцов
3.2.8. Инкубация макрофагов с фактором некроза опухоли а
3.2.9. Метод иммуноферментного анализа для изучения процессов взаимодействия С4 фактора комплемента с мембранами иммуноцитов.
3.2 Метод иммунофлуоресценции для изучения структурных
1 свойств мембран иммуноцитов
3.2 Определение функциональной активности С4 фактора системы комплемента методом гемолитического титрования
3.2 Регистрация и анализ ИКспектров белка С
3.2 Регистрация электронных спектров поглощения белка С4.
3.2 Проведение дискэлектрофореза в полиакриламидном геле белка С4.
3.2 Измерение буферной емкости и снятие кривых титрования белка С4.
3.2 Получение лимфоцитарных и макрофагальных лизатов
для определения концентрации фактора некроза опухоли а и цитотоксической активности макрофагов.
3.2 Метод иммуноферментного анализа для определения концентрации ФНОа в лизатах Тлимфоцитов.
3.2 Измерение интенсивности люминолзависимой хемилюминесценции иммуноцитов .
3.2 Метод определения ТБКактивных продуктов в суспензии лимфоцитов
3.2 Определение пероксидазной активности лимфоцитов
3.2 Определение супероксиддисмутазной активности лимфоцитов методом люминолзависимой хемилюминесценции.
3.2 Определение цитотоксической активности макрофагов
3.2 Определение жизнеспособности макрофагов с помощью трипанового голубого
3.2 Статистическая обработка результатов экспериментов.
ГЛАВА 4. Влияние УФсвета на процесс взаимодействия С4 фактора системы комплемента с мембранами иммуноцитов.
4.1. Взаимодействие С4 фактора системы комплемента с мембранами лимфоцитов и макрофагов в условиях УФО.
4.1.1. Влияние УФсвета на функциональное состояние мембраносвязанного С4.
4.1.2. Влияние УФсвета на структурное состояние СЯ1рецепторов с лигандированным С4 на поверхности лимфоцитов и макрофагов
4.1.3. Взаимодействие фотомодифицированных иммуноцитов с сывороточным С
4.1.4. Влияние УФсвета на гемолитическую активность белка С4
4.1.5. Влияние УФсвета на структурнофункциональное состояние сывороточного С4
4.2. Взаимодействие С4 компонента комплемента с мембранами нейтрофилов крови человека в условиях УФО.
4.3. Определение роли фотомодификаций белка С4 и мембран иммуноцитов в изменение антителосвязывающей способности изучаемых
систем
ГЛАВА 5. Анализ УФиндуцированных структурных модификаций
С4 белка системы комплемента
5.1. Влияние УФсвета на ИКспекгральные характеристики С4 белка системы комплемента
5.2. Электронные спектры поглощения УФоблученных
растворов С4.
5.3. Электрофоретические характеристики фотомодифицированного белка С4.
5.4. Влияние УФсвета на буферную емкость растворов белка С4
ГЛАВА 6. Влияние УФсвета на некоторые функциональные свойства лимфоцитов крови человека
6.1. Уровень продукции фактора некроза опухоли а Тлимфоцитами в условиях УФоблучения
6.2. Изучение процессов ГТФОЛ, протекающих на мембранах лимфоцитов
6.2.1. Влияние УФсвета на хемилюминесцентные свойства лимфоцитов
6.2.2. Дозовая зависимость накопления ТБКактивных продуктов
в суспензии лимфоцитов в условиях УФоблучения.
6.3. Влияние УФсвета на ферментанивную активность лимфоцитов
6.3.1. Влияние УФсвета на пероксидазную активность лимфоцитов
6.3.2. Влияние УФсвета на супероксиддисмутазную активность лимфоцитов
ГЛАВА 7. Исследование сочетанного действия УФсвета и фактора некроза опухоли а на функциональную активность макрофагов
7.1. Изменение цитотоксической активности макрофагов в условиях УФоблучения.
7.2. Исследование сочетанного действия УФсвста и ФНОа на уровень спонтанной хемилюминесценции макрофагов
7.3. Исследование уровня жизнеспособности УФ и цитокинмодифицированных макрофагов с помощью красителя трипанового голубого.
7.4. Влияние сочетанного действия УФсвета и ФНОа на фагоцитарную активность макрофагов.
7.5. Влияние сочетанного действия УФсвета и фактора некроза опухоли на состояние СЮрецепторов с лшандированным С4 на поверх
ности макрофагов
7.6. Изучение сочетанного действия УФсвета и ФНОа на супероксиддисмутазную активность макрофагов.
7.7. О процессах, ответственных за изменение функциональной активности фотои цитокинмодифицированных макрофагов.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Главными эффекторными клетками в борьбе с внеклеточными возбудителями являются нейтрофилы. Их поглотительная способность и бактерицидностъ резко увеличиваются в присутствии системы комплемента, I, ФНОо, ИЛ, ИЛ6 и других цитокинов 1, 2. Нейтрофилы это полиморфноядерные лейкоциты размером мкм. Сгранулы и1працитоплазматические везикулы представляют собой малые везикулоподобные органеллы, в состав которых входят желатиназа, катепсины, Ыацилрглюкозаминаза, кислая фосфатаза, а также микросомальная фракция со слабой активностью щелочной фосфатазы ,5. Срок жизни и проявления активности Короткий дня Длительный нед. Благодаря множеству рецепторных структур на своей поверхности, нейтрофилы способны отличать вирусинфицированные клетки от неинфицированных и влиять на развитие вирусного морфогенеза 4. В последнее десятилетие отмечена способность нейтрофилов синтезировать ряд цитокинов ИЛ1, ИЛ6, ИЛ, ФНОсц гранулоцитарномакрофагальный колониестимулирующий фактор ГМКСФ и т. Макрофаги образуются из промоноцитов костного мозга, которые после дифференцировки в моноциты крови задерживаются в тканях в виде зрелых макрофагов, где и формируют систему мононуклеарных фагоцитов . Характерной особенностью человеческих моноцитов, которую они, как правило, утрачивают при дифференцировке в макрофаги, является содержание в цитоплазме миелопероксидазы. После выхода в ткани и превращения в макрофаг размеры клетки увеличиваются, диаметр достигает мкм. Тканевые макрофаги относятся к долгоживущим клеткам продолжительность их жизни исчисляется месяцами и годами 3, 5. Макрофаги обладают широким набором функций, играющих важную роль в поддержании низкого уровня инфицирования, в развитии специфического иммунитета, в удалении денатурированных белков, различных продуктов из очага воспаления или инфицирования , 2. Спустя часов от начала воспаления макрофаги становятся доминирующими клетками инфильтрата, приходя на смену нейтрофилам . Тканевые макрофаги и их предшественники моноциты, промоноциты являются одними из основных эффекторных клеток системы естественной противоопухолевой резистентности организма. Они способны лизировать как лейкозные, так и изолированные из солидных опухолей клеткимишени , 6, 0. К важнейшим функциям макрофагов следует отнести фагоцитоз, процессинг антигенов и представление процессированного антигена лимфоцитам табл. Моноцитымакрофаги способны секретировать и продуцировать более 0 различных молекул табл. Большая часть из них являются индуцибсльными, а конститутивно синтезируются и секретируются лишь отдельные молекулы ростовые факторы, лизоцим. Синтез многих соединений регулируется липополисахаридами, фагоцитируемыми частицами, лимфокинами, агрегированными иммуноглобулинами, комплексом антигенантитело. Для нейтрофилов и макрофагов характерны два хорошо различимых функциональных состояния исходное, с низким уровнем протекания процессов, и активированное, переход в которое обусловлен взаимодействием клеток с различными стимуляторами. Презентация антигена Контакт с Тхелпером через его рецептор для антигена, активация цитокинами ИЛ1 и др. Лизосомные ферменты Протеазы, дезоксирибонуклеазы, липаза, лизоцим, коллагеназа, эластаза и др. Кислородные радикалы Пероксид водорода, супероксид, нитроксид и др. Активация фагоцитов сопровождается существенными морфологическими, биохимическими и биофизическими перестройками клеток. В конечном счете резко увеличивается потребление кислорода, глюкозы, активность ферментов гексозомонофосфатного шунта, образование активных форм кислорода АФК и других прооксидантов, продуктов активации лило и циклооксигеназ. Внезапность и скорость, с которыми развиваются данные реакции, послужили поводом назвать это явление кислородным, или респираторным взрывом , 4. Известно, что нормальные фагоциты обладают небольшой функциональной активностью. Однако, если их прединкубировать для активации фагоцитов, а затем воздействовать на них тем же стимулятором или какимлибо другим, но взятым в стимулирующей концентрации, то наблюдается увеличение эффекторных ответов фагоцитов по сравнению с контролем.