Модуляция физико-химическими агентами структурно-функционального состояния нейтрофилов крови человека

• Автор: Михилева, Елена Александровна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 205 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Нейтрофильные лейкоциты, их роль в регуляции иммунного гомеостаза организма

1.1. Морфологические и функциональные особенности нейтрофи

1.2. Рецепторы и белки на поверхности нейтрофилов

1.3. Участие активных кислородных метаболитов в реализации эффекторного потенциала нейтрофилов.
1.4. Цитокины как медиаторы иммунного ответа. Роль фактора некроза опухоли в иммунологических реакциях.

ГЛАВА 2. Воздействие УФсвета на состояние компонентов иммунной системы

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 3. Объекты и методы исследования.

3.1.Объекты исследования.
3.2. Методы исследования.
3.2.1. Выделение нейтрофилов из крови человека.
3.2.2. Получение сыворотки крови.
3.2.3. УФоблучение исследуемых образцов.
3.2.4. Инкубация нейтрофилов с фактором некроза опухоли а
3.2.5. Метод иммуноферментного анализа для определения поверхностных рецепторов нейтрофилов.
3.2.6. Метод иммунофлуоресценции для изучения структурных свойств мембран нейтрофилов.
3.2.7. Получение лизатов нейтрофилов для определения концентрации
. ФНОсх
3.2.8. Метод иммуноферментного анализа для определения концентрации ФНОа в лизатах нейтрофилов.
3.2.9. Измерение интенсивности люминолзависимой хемшпоминесценции нейтрофилов.
3.2 Получение супернатанта нейтрофилов
3.2 Определение активности супероксиддисмутазы нейтрофилов крови человека.
3.2 Определение продукции оксида азота нейтрофилами крови человека
3.2 Определение активности миелопероксидазы нейтрофилов крови человека .
3.2 Определение концентрации белка методом Лоури.
3.2 Определение жизнеспособности нейтрофилов с помощью трипанового синего
3.2 Статистическая обработка результатов экспериментов.
ГЛАВА 4. Влияние УФсвета на процесс взаимодействия мембран нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента
4.1. Взаимодействие мембран нейтрофилов с СЗ фактором системы комплемента в условиях УФоблучения
4.2. Влияние УФсвета на функциональное состояние мембраносвязанного СЗ.
4.3. Взаимодействие фотомодифицированных нейтрофилов с сывороточным СЗ
4.4. Влияние УФсвета на структурнофункциональное состояние сывороточного СЗ.
4.5. Влияние УФсвета на локализацию СЛ1рецепторов с лигандированным СЗ на поверхности нейтрофилов.
4.6. Определение роли фотомодификаций мембран нейтрофилов и белка СЗ в изменении антителосвязывающей способности изучаемой системы
ГЛАВА 5. Исследование сочетанного действия УФсвета и фактора
некроза опухоли а на функциональную активность нейтрофилов.
5.1. Влияние сочетанного действия УФсвета и ФНОа на уровень спонтанной хемилюминесценции.
5.2. Исследование уровня жизнеспособности УФ и цитокинмодифицированных нейтрофилов с помощью красителя трипанового синего .
5.3. Влияние сочетанного действия УФсвета и ФНОа на фагоцитарную активность нейтрофилов
5.4. Исследование сочетанного действия УФсвета и ФНОа на активность супероксиддисмутазы нейтрофилов.
5.5. Исследование активности миелопероксидазы нейтрофилов в условиях сочетанного действия УФсвета и ФНОа.
5.6. О процессах, ответственных за изменение функциональной активности УФ иили цитокинмодифицированных нейтрофилов.
ГЛАВА 6. Влияние сочетанного действия УФсвета и фактора некроза опухоли а на структурнофункциональное состояние рецепторов иммунной адгезии.
6.1. Исследование сочетанного действия УФсвета и ФНОа на структурнофункциональное состояние рецепторов с лигандированным иммуноглобулином на мембранах нейтрофилов.
6.2. Исследование сочетанного действия УФсвета и ФНОа на десорбцию молекул свободного и связанного на рсцеиторах иммуноглобулина с УФ иили цитокинмодифицированных нейтрофилов
6.3. Исследование сочетанного действия УФсвета и ФНОа на структурнофункциональное состояние 3 рецепторов на мембранах нейтрофилов .
6.4. О вкладе рецепторного аппарата в реализацию функционального потенциала нейтрофилов
ГЛАВА 7. Влияние УФсвета на цитотоксическую активность нейтрофилов .
7.1. Влияние УФсвета на продукцию оксида азота нейтрофилами крови человека
7.2. Влияние УФсвета на продукцию ФНОа нейтрофилами крови человека .
7.3. Влияние УФсвета на активность супероксиддисмутазы нейтро
филов крови человека.
7.4. Продукция оксида азота и активность супероксиддисмутазы УФмодифицированных нейтрофилов в присутствии циклогексими
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Праймеры имеют различную природу к ним относятся ировоспалительные цитокины, колониестимулирующие факторы, продукты ПОЛ, растворимые иммунные комплексы и другие 7, 4. На молекулярном уровне эффект праймирования трактуется как процесс, приводящий к активации протеинкиназы С вследствие накопления 1,2диацилглицерина и формированию сигнала путем мобилизации Са2 с участием 1,4,5инозитолтрифосфата 8. К наиболее ярким проявлениям реактивности нейтрофилов относят респираторный взрыв, способность к реакциям адгезии, миграции, к фагоцитозу и эндоцитозу, к секреторной дегрануляции, к взаимодействию с каскадными воспалительными гуморальными системами организма, бактерицидность, цитотоксичность, цитостатичность, дитачмент отщепление клеточных элементов от однослойных клеточных культур и способность влиять на функциональную активность клеток организма 7. Респираторный кислородный взрыв, обычно сопутствующий фагоцитозу, это процесс образования продуктов частичного восстановления кислорода, свободных радикалов, перекисей и других соединений, обладающих высокой антимикробной активностью. Образование этих метаболитов сопровождается усилением потребления глюкозы и ее расщеплением с участием НАДФ по механизму гексозомонофосфатного шунта, что, в свою очередь, индуцирует накопление НАДФН. Ог . НАДФНоксидаза КФ 1. О2 и состоящей из мембраносвязанных и цитозольных компонентов 5. ФАДсодержащий флавопротеин 4. Цитозольными компонентами являются две белковые субъединицы комплекса с молекулярными массами 0 и 0 Да рр,,ох и ррЬох соответственно, которые в покоящейся клетке связаны с третьим цитоплазматическим компонентом с молекулярной массой 0 Да ррох. Молекулярная масса НАДФНоксидазного комплекса составляет Да 1. Стимуляция фагоцитирующих клеток представляет собой последовательные процессы транслокации цитоплазматических компонентов НАДФНоксидазы к мембране, их взаимодействия с флавоцитохромом с формированием белкового ансамбля и генерации АФК активированным ферментом 3. Кроме того, в функционировании и активации НАДФНоксидазы участвуют мембранный ГТФсвязывающий белок ЛарА и цитозольные белки из семейства малых ГТФсвязывающих цитозольных белков ргас1 и ргас2 5. При последующих реакциях, в которые вовлекаются ионы водорода, образуются другие продукты с бактерицидной активностью пероксид водорода Н2О2, синглетный кислород Ог и гидроксильный радикал ОН. Образование 2О2 в результате дисмутации О2 происходит как спонтанно, так и с участием супероксиддисмутазы. При участии миелопероксидазы МПО из Н2О2 с участием ионов галогенов формируются дополнительные бактерицидные продукты гипогалоиды 1. МПО Н2О2 оксидоредуктаза, КФ . Да, состоящий из двух тяжелых а Да и двух легких 3 Да субъединиц Рсубъединицы соединены единичной дисульфидной связью и содержат две ковалентносвязанные железосодержащие простстические группы 4. Очищенная МПО катализирует комплекс реакций и имеет интенсивный зеленый цвет. Нф и составляет около 5 сухой массы клетки 8. Образующиеся в результате работы НАДФНоксидазной и миелопероксидазной систем активные кислородные метаболиты АКМ способны причинить вред организму. Для предотвращения ущерба собственным клеткам от накопления этих продуктов, цитотоксичных не только в отношении микроорганизмов, срабатывают механизмы их инактивации путем превращения в воду и кислород с участием главных компонентов антиоксидантной системы Нф супероксиддисмутазы СОД и каталазы. СОД КФ . Известно три типа СОД человека, для функционирования которых необходимо наличие марганца, меди и цинка. Медьцинковая форма СипСОД содержится в ядрах, цитозоле, нероксисомах и межмембраином пространстве митохондрий эукариотических клеток 5. МпСОД локализована в митохондриях эукариот . Экстрацеллюлярная высокомолекулярная форма СОД, содержащая медь, является главным изоэнзимом межклеточных жидкостей плазмы, лимфы, синовиальной жидкости, и в небольших количествах обнаруживается практически во всех тканях 7. Молекула Си,7пС0Д состоит из двух идентичных субъединиц, связанных дисульфидным мостиком. Каждая субъединица содержит один атом
Си и один атом . О2 1.