Воздействие УФ-света и активированных кислородных метаболитов на структурно-функциональные свойства лимфоцитов человека в присутствии биогенных аминов

• Автор: Попова, Людмила Ивановна
• Шифр специальности: 03.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2008
• Место защиты: Воронеж
• Количество страниц: 199 с. : ил.

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Характеристика лимфоцитарных клеток человека, их

участие в многоуровневой системе иммунной защиты.

1.1. Структурнофункциональные свойства лимфоцитов человека и их популяций

1.2. Характеристика субпопуляций лимфоцитарных клеток

1.2.1. Тлимфоциты.

1.2.2. Влимфоциты.

1.2.3. Натуральные клеткикиллеры

ГЛАВА 2. Механизмы действия УФизлучения на структурнофункциональное состояние компонентов иммунной системы
ГЛАВА 3. Активированные кислородные метаболиты общая характеристика пути генерации, конверсии и утилизации в
биосистемах роль в процессах клеточного метаболизма.
ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ
ГЛАВА 4. Объекты и методы исследования.
4.1. Объекты исследования
4.2. Методы исследования.
4.2.1. Выделение лимфоцитов из крови доноров.
4.2.2. Разделение лимфоцитов на Т и Впопуляции.
4.2.3. Метод иммунофлуоресценции.
4.2.4. Инкубация лимфоцитов с биогенными аминами.
4.2.5. УФоблучение исследуемых образцов.
4.2.6. Системы генерации активных форм кислорода.
, 4.2.7. Получение клеток асцитной карциномы Эрлиха
4.2.8. Определение цитогоксической активности лимфоцитов при
помощи колориметрического МТТанапиза
4.2.9. Исследование антителообразующей способности лимфоцитов методом локального гемолиза.
4.2 Определение жизнеспособности клеток.
4.2 Определение уровня экспрессии поверхностных маркеров методом иммуноферментного анализа.
4.2 Получение лизатов лимфоцитов для определения концентрации ФНОа
4.2 Метод иммуноферментного анализа для определения концентрации ФНОа в лизатах лимфоцитов
4.2 Статистическая обработка результатов экспериментов
РЕЗУЛЬТАТЫ ЭКСПЕРИМЕТОВ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.
ГЛАВА 5. Исследование структурнофункциональных характеристик лимфоцитов человека после воздействия У Фсвета.
5.1. Влияние УФоблучения нащитотоксическую активность лимфоцитов донорской крови
5.2. Исследование жизнеспособности лимфоцитов и клеток асцитной карциномы Эрлиха после УФоблучения лимфоцитов
5.3. Исследование антителопродуцирующей способности Влимфоцитов после их УФоблучения.
5.4. Изучение изменений экспрессии поверхностных маркеров лимфоцитарной мембраны в условиях воздействия .УФоблучения
5.4.1. Исследование уровня экспрессии Рсрецепторов лимфоцитов
после их УФоблучения.
5.4.2. Изучение УФиндуцированных изменений экспрессии С6 лимфоцитарной мембраны
5.4.3. Исследование уровня экспрессии СЭ8 лимфоцитарных клеток
после воздействия У Фсвета.
5.4.4. Изучение уровня экспрессии СЭЗ и СЭ лимфоцитов, модифицированных УФсветом
ГЛАВА 6. Изучение структурнофункциональных свойств лимфоцитов человека в условиях генерации активных форм кислорода
6.1. Исследование функциональной активности лимфоцитов в условиях экзогенной генерации активных форм кислорода.
6.2. Определение жизнеспособности лимфоцитов в условиях воздействия активных форм кислорода.
6.3. Изучение изменений продукции фактора некроза опухолей лимфоцитами в условиях.генерации активных форм кислорода
6.4. Исследование изменений уровня экспрессии некоторых поверхностных маркеров лимфоцитарной мембраны в условиях
воздействия активных форм кислорода.
ГЛАВА 7. Исследование структурнофункциональных свойств лимфоцитов человека после воздействия УФсвета в присутствии биогенных аминов
7.1. Структурнофункциональные свойства биогенных аминов
7.2. Исследование функциональных свойств лимфоцитов человека, модифицированных УФсветом в присутствии биогенных аминов
7.2.1. Сочетанное действие УФсвета и биогенных аминов на цитотоксическую активность лимфоцитов человека
7.2.2. Изучение жизнеспособности лимфоцитов человека после УФоблучения в присутствии биогенных аминов
7.2.3. Изучение антителообразующей способности Влимфоцитов человека после воздействия УФсвета в присутствии некоторых биогенных аминов
7.2.4. Продукция ФНОа лимфоцитами человека в присутствии
биогенных аминов.
7.3. Исследование УФиндуцированных изменений уровня экспрессии некоторых поверхностных маркеров мембраны лимфоцитов в
присутствии биогенных аминов
7.3.1. Влияние УФсвета на уровень экспрессии Гсрецепторов
лимфоцитов в присутствии биогенных аминов
7.3.2. Сочетанное воздействие УФсвета и биогенных аминов на
уровень экспрессии 8 лимфоцитов человека
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Ядро содержит плотно агрегированный хроматин. Цитоплазма располагается вокруг ядра в виде узкого ободка и содержит разрозненные митохондрии, а также единичные цистерны эидоплазматического ретикулума, свободные рибосомы и лизосомы А. Е. Вершигора, Ю. А. Уманский, В. Г. Пинчук, А. Ройт, . Установлено, что В и Тлимфоциты, несмотря на общие морфологические свойства, обладают существенными отличиями в структуре . Vvi . Средний диаметр Тклеток составляет 6,6, мкм, а Влимфоцитов 8,8, мкм. В цитоплазме клеток Гпопуляции хорошо развит гладкий эндоплазматический ретикулум, содержится много монорибосом, отдельные лизосомы. Для Влимфоцитов характерно наличие большого числа митохондрий, хорошо развитого аппарата Гольджи, полирибосом и шероховатого эндоплазматического ретикулума. Хроматин ядра Вклеток сконденсирован в меныисй степени, чем у Тлимфоцитов В. А. Труфакин, М. В. Робинсон и др. Известно, что незрелые формы В и Тклеток различаются менее четко. Процесс активации лимфоцитов приводит к морфологической и функциональной дифференцировке, делению клеток, индукции синтеза различных ферментов и веществ с иммунорегуляторным типом действия В. А. Ляшенко и др. В результате стимуляции антигеном происходит увеличение размера клеток до мкм, уменьшение плотности хроматина в ядре. При этом ободок цитоплазмы становится шире и часто содержит азурофильные гранулы, а также большое количество рибосом А. Е. Вершигора, Г. И. Козинец, . Процесс активации лимфоцитов сопровождается увеличением уровня мРНК и усилением синтеза белка. Морфометрический анализ активированных иммуноцитов выявляет различия в размерах клеток, их ядер, ядерноцитоплазматичсских отношениях, содержании и распределении хроматина А. Е. Вершигора, Г. И. Козинец и др. Особую роль в активации иммуноцитов играет состояние плазматической мембраны клеток, определяющее передачу внешнего сигнала в цитоплазму и, таким образом, участвующее в переключении метаболизма В. А. Ляшенко и др. Мембрана лимфоцитов представляет собой универсальную модель плазматической мембраны, но с сохранением ряда особенностей. Количество липидов в лимфоцитах составляет от 2 до 9 сухой массы клеток. Липидная часть представлена фосфолипидами , холестерином , триглицеридами , жирными кислотами в основном пальмитиновой и олеиновой М. В. Робинсон и др. Установлено что сфингомиелин и фосфатидилхолин присутствуют, главным образом, в наружном монослое и контактируют с углеводными компонентами гликопротеинов, а фосфатидилэтаноламин во внутреннем монослое , . I. v, Дж. Робинсон, . Наружный монослой Влимфоцитов содержит нейтральные гликопротеины, а поверхностный слой Гклеток богат сиалопротеинами. Впопуляция имеет в составе мембраны большее количество сиаловых кислот по сравнению с Тпопуляцией, возможно, изза большей поверхности М. В. Робинсон и др. Полагают, что морфологические свойства поверхности лимфоцитарных клеток зависят от степени их диффсренцировки М. В. Робинсон и др. Елисеев и др. Гладкий тип поверхности имеют покоящиеся В и Тлимфоциты, а при активации клетки образуют многочисленные выросты М. В. Робинсон и др. В настоящее время известно, что разнообразные ворсинки и выросты на иммуноцитах выполняют роль распознавателя антигенов, ангигенпрезентирующих, регуляторных и эффекторных клеток Ю. М. Крымский, . Структурные особенности В и Тлимфоцитов находят свое отражение в функциональных свойствах данных иммуноцитов. Вклетки формируют гуморальный иммунный ответ посредством активной продукции специфических иммуноглобулинов, а Глимфоциты определяют клеточную форму иммунного реагирования через разрушение чужеродных клеток при непосредственном контакте с ними и участвуют в регуляции обеих форм иммунитета В. Г. Галактионов, . Поверхностный фенотип лимфоцитов являегся определяющим фактором в ходе реализации ими разнообразных функций. Помимо этого, изучение экспрессии специфических антигенов и рецепторов на мембранах лимфоцитов признано корректным методом идентификации популяций и субпопуляций иммуноцитов И. С. Фрейдлин, Тотолян, .