Исследование механизма взаимодействия противоопухолевого антибиотика оливомицина с ДНК методами люминесцентно-абсорбционного анализа

• Автор: Питина, Любовь Рафаиловна
• Шифр специальности: 03.00.02, 02.00.10
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Купавна
• Количество страниц: 133 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Выделение и физикохимические

свойства оливошцина.

1.2. Биологическое действие оливошщина

и его производных

1.3. Биологическое действие оливошцина

и его производных

1.4. Взаимодействие оливошцина с ДНК.

1.5. Использование оливошцина в качестве

зонда для ДНК
1.6. ГЦ специфичные антибиотики.
ГЛАВА П. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Исходные препараты и приготовление
растворов
2.1.1. Оливомицин
2.1.2. Оливин
2.1.3. ДНК.
2.1.4. Полимер полиЛТ7 полиАТ7 .
2.1.5. Хлористые соли Аа, Ссс , Му.,
ъ, а,Мг, Со
2.1.6. Этиловый спирт
2.1.7. Сахароза
2.1.8. Диоксан и глицерин
2.2. Измерение спектральных характеристик
2.2.1. Измерение спектров поглощения
2.2.2. Измерение спектров флуоресценции
2.2.3. Измерение характеристических времен затухания флуоресценции
2.2.4. Измерение степени поляризации флуоресценции
2.3. Определение среднего угла флуктуаций подвижности антибиотика, связанного с ДНК, из стационарных измерений
деполяризации флуоресценции.
2.4. Изучение кинетики комплексообразова
ГЛАВА Ш. ЛКХЛИНЕСЦЕНТНОАБСОРЩИОННЫЕ СВОЙСТВА МОЛЕКУЛЫ ОЛИВОМИЦИНА И ЕЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ С ИОНАМИ ДВУХВАЛЕНТНЫХ МЕТАЛЛОВ
3.1. Люминесцентноабсорбционные свойства молекулы оливомицина
3.1.1. Фотодеструкция
3.1.2. Зависимость флуоресценции оливомицина от температуры
3.1.3. Зависимость спектральных свойств оливомицина от концентрации
3.1.4. Влияние ионной силы на спектральные характеристики оливо
глицина
3.1.5. Влияние рНсреды на спектральные характеристики оливомицина.
3.1.6. Влияние полярности растворите
лей на спектральные характеристики оливомицина.
3.1.7. Обсуждение результатов
3.2. Взаимодействие оливомицина с ионами магния
3.2.1. Экспериментальные результаты
3.2.2. Обсуждение результатов.
3.3. Взаимодействие оливомицина с ионами
Сл2,5г2,Еих,2,М,Со2,2.
ГЛАВА . ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ ОЛИВОМИЦИНА С ДНК
4.1. Экспериментальные результаты
4.1.1. Изучение связывания оливомицина с ДНК методом равновесного флуоресцентного титрования
4.1.2. Кинетические измерения
4.2. Обсуждение результатов
4.2.1. Равновесные измерения.
4.2.2. Кинетические эксперименты.
4.2.3. Модель комплекса оливомицин
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ЛИТЕРАТУРА


Во второй главе описаны используемые методы люминесцентноабсорбционных стационарных и кинетических исследований. Мп, либо сходное строение внешней электронной оболочки i . В четвертой главе рассмотрены данные по изучению связывания оливомицина с ДНК. Приведены результаты стационарных и кинетических измерений, на основании которых определены основные константы, характеризующие процесс комплексообразования, и предложена модель комплекса оливолицинДНК. Оливомицины, абурамицины хроыомицины и ауреоловая кислота митрамицин составляют одну из групп природных соединений, которые синтезируются микроорганизмами и подавляют рост злокачественных новообразовании I. Японии хромомицину А тойомпцину, образуемому У1о6йгятусб 3, и к полученному в США митрамицину, продуцируемому Асйшгиш аАЫосе4 4. При изыскании новых антибиотиков противоопухолевого действия Г. Ф.Гаузе с сотр. Выделявши штаммом 9 в окружающую питательную среду антибиотик был получен в кристаллическом виде и. В мицелии продуцента 9 содержится и другой антибиотик, принадлежащий к группе полиенов пентаен, который не имеет отношения к оливомицину. В I мл культуральной жидкости содержится от 0,2 до 0,5 мг оливомицина, который может быть выделен двумя методами 5. Первый метод основан на осаядении антибиотика при 2,53,0 из насыщенной хлористым натрием культуральной жидкости, экстракции полученного осадка смесью метиленхлорида и ацетона или бутилацетата и ацетона и осаждении аморфного продукта петролейным эфиром. Структурные формулы оливомицинов и хромомицинов. К Ас Я 1ЛХ
Рис Л. Таутомерные формы оливомицина. При использовании второго метода получается более чистый продукт. В этих системах оливомицин разделяется на три компонента, обозначаемый I, П, Ш, соответственно скорости движения на хроматограммах. Подавляющее количество от до суммарного препарата составляет оливомицин I. Препаративное разделение компонентов было осуществлено путем хроматографии на промытой кислотой окиси алюминия и на кремниевой кислоте 6. Оливомицин поглощает свет в УФобласти спектра с тремя максимумами при 5, 5 и 5 нм в метаноле 7, в водном растворе 5, 55 плато 8, по более поздним данным последний максимум 8 нм 9. Антибиотик обладает оптической активностью удельное вращение метанол 5. В области 49 антибиотик устойчив, температура плавления 81, рКа 7,2 величина рКа приводится для I компонента оливомицина 5. Оливомицин обладает собственной флуоресценцией. Данные, полученные разными авторами, имеют сильный разброс так, максимум флуоресценции указывается как 00 нм , 0 нм 8, 0 нм II, 5 нм , . Зто может быть связано с методами регистрации флуоресценции и, в особенности, с одновременным наличием оливомицином А, В, С и I в различных соотношениях. Квантовый выход флуоресценции оливомицина составляет 2,8 8. Интенсивность флуоресценции возрастает при изменении от 2,5 до 8, а при дальнейшем увеличении падает . Оливомицин обладает характерным спектром поглощения в ИКобласти, указывающим на наличие таких функциональных групп как про
стая эфирная связь см , сложноэфирные группировки и см, сопряженный карбонил см, , группы , см и ОНгрупш широкая полоса с максимумом см1 7. В присутствии щелочей оливомицин окисляется, причем какихлибо определенных продуктов распада выделено не было. Оливомицин легко гидролизуется кислотами и подвергается алкоголизу так, при глетанолизе в мягких условиях в течение 2 часов при в 0,1 н метанольной С или в течение 3 часов в 0,1 н метанольной i антибиотик расщепляется на агликон и ряд углеводных компонентов. Кристаллический агликон, названный оливином, содержит 1,8диоксинафталиновую систему, но окисляется не так быстро, как это имеет место у обычных перидиоксинафталинов, . Гидроксил, стоящий рядом с этой группировкой, обусловливает первую константу диссоциации оливина рК6,3, а вторая
константа рК9,2 объясняется наличием в оливине еще одного фенольного гидроксила. Следует отметить, что для оливоглицина первая константа диссоциации рК7,2 5. Изучение химических свойств и ЯМРспектров, проведенное Берлиным Ю. А. с сотр.