Особенности роста опухолевых клеток in vitro после облучения в малых дозах

• Автор: Демидова, Наталья Игоревна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1991
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 114 с. : ил

Введение5

I. Обзор литературы.

1.1. Роль естественного радиационного фона.9

1.2. Понятие малые дозы и их стимулирующее

действие.

1.3. Понятие гормезис

1.4. Отдаленные эффекты, индуцируемые малыми

дозами ионизирующей радиации.

1.5. Закономерности роста клеточных культур

Экспериментальная часть

II. Материал и методы исследования

2.1. Культура клеток
2.2. Облучение.
2.3. Метод авторадиографии.
2.4. Метод радиометрии.
2.5. Определение клоногенной способности.
2.6. Определение размеров клеток в
различных стадиях роста
2.7. Исследование топографии поверхности клеток методом растровой электронной микроскопии в различных стадиях роста.
Результаты собственных исследований
III. Действие малых доз ионизирующего излучения 0,1 Гр на кинетику роста опухолевых клеток
НеЬа.
3.1. Кривые роста необдученной и облученной в
дозе 0,1 Гр популяции клеток НеЬа
3.2. Динамика изменения количества ДНКсинтезирующих клеток и интенсивности синтеза нуклеиновых кислот в необдученной и облученной 0,1 Гр популяции в процессе
роста
3.3. Определение размеров клеток культуры НеЬа необдученной и облученной в дозе 0,1 Гр популяций в процессе культивирования
3.4. Микрорельеф поверхности клеток НеЬа,
в различных фазах роста.
3.5. Резюме
IV. Кинетика открепления клеток в суспензию в контрольной и облученной 0,1 Гр культуре
4.1. Кривые открепления клеток в суспензию.
4.2. Жизнеспособность открепившихся клеток.
4.3. Пролиферативная способность открепившихся
клеток
4.4. Резюме
V. Изучение восстановления популяции опухолевых клеток НеЬа после облучения в различных режимах.
5.1. Выживаемость клоногенных клеток после
облучения в различных режимах.
5.2. Радиочувствительность клоногенных клеток в разные сроки после однократного
облучения в дозе 0.1 Гр.
5.3. Резюме
Обсуждение.
Выводы
Библиография


Исследований, выполненных на клеточном уровне чрезвычайно мало. Нам казалось целесообразным расширить представление о возможных последствиях действия малых доз ионизирующего излучения на моделях i vi. Таким образом, целью настоящей работы явилось исследование эффектов, индуцируемых малыми дозами ионизирующей радиации в популяции опухолевых клеток в процессе ее роста логстацфазы. Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи. Изучить влияние облучения в малых дозах на процесс перехода опухолевых клеток из логарифмической фазы в стационарную. Исследовать влияние облучения в дозах гормезиса на кинетику открепления и жизнеспособность вышедших в суспензию клеток в процессе роста культуры. Изучить эффект предварительного облучения малыми дозами ионизирующего излучения на восстановление популяции опухолевых клеток от повреждений, вызванных последующим воздействием в больших дозах радиации. В результате проведенных исследований получены новые данные об отдаленных последствиях воздействия малых доз ионизирующего излучения у потомков облученных клеток. Впервые было показано, что облучение в дозе 0,1 Гр меняет кинетику роста популяции клеток, проявляющуюся в потере способности клеток переходить в стационарную стадию роста. Эти данные были подтверждены исследованиями, в которых использовались дополнительные методы метод авторадиографии, метод радиометрии, анализ гистограмм распределения клеток по размерам в процессе роста культуры. Методом растровой электронной микроскопии были также подтверждены полученные данные рельеф клеточной поверхности у облученных клеток и их потомков не меняется на протяжении процесса культивирования, вплоть до открепления их из монослоя. Впервые было обнаружено, что среди открепившихся в суспензию клеток существует небольшая доля жизнеспособных клеток 1, которые могут давать колонии. Облучение в дозе 0,1 Гр усиливает процесс перехода клеток из монослоя в суспензию и уменьшает долю жизнеспособных клеток в суспензии. Впервые было показано, что однократное облучение в дозе 0,1 Гр снижает эффективность восстановления популяции от последующих воздействий в поражающих дозах радиации и существенно увеличивает радиочувствительность потомков облученных клеток, препятствуя появлению резистентной фракции в популяции, наблюдаемое в однократно облученной группе после 7х суток. Практическая значимость. Полученные результаты дают возможность прогнозировать радиационные последствия действия ионизирующего излучения в малых дозах. Представленные данные являются важными для выяснения феномена синергизма с воздействием различных повреждающих факторов. Основные положения, выносимые на защиту. Облучение в дозе 0,1 Гр меняет кинетику роста популяции клеток, проявляющуюся в потере клетками способности переходить в стационарную стадию роста. Облучениев дозе 0,1 Гр способствует более интенсивному откреплению клеток в суспензию. Среди открепившихся клеток есть небольшая доля жизнеспособных клоногенных клеток 1. Однако, жизнеспособность и пролиферативная активность облученных в дозе 0,1 Гр клеток значительно ниже, чем необлученных. Однократное облучение в дозе 0,1 Гр снижает эффективность восстановления от последующих поражающих доз и увеличивает радиочувствительность потомков облученных клеток. I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. I.I. Роль естественного радиационного фона. В настоящее время все большую актуальность приобретает изучение действия малых доз ионизирующей радиации на живые объекты. Говоря о действии малых доз ионизирующей радиации, надо выяснить, какой вклад вносит естественное фоновое излучение при действии на живые объекты. Еще в тридцатые годы А. Л. Чижевский выдвинул гипотезу о наличии обратной связи между размножением патогенных микроорганизмов, возникновением эпидемий и периодичностью солнечной активности. Известно, что в годы активного солнца, уровень естественного радиационного фона наиболее низкий. Вспышки заболеваемости приходятся на годы, когда радиационный фон земли максимальный, то есть через 12 года после года солнечной активности .