Частота клеток с мутациями в локусе Т-клеточного рецептора и радиационно-индуцированный апоптоз лимфоцитов как возможные показатели повышенного канцерогенного риска

• Автор: Орлова, Нина Владимировна
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2002
• Место защиты: Обнинск
• Количество страниц: 105 с. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ

ГЛАВА I ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ключевая роль мутаций при возникновении

злокачественных опухолей

1.2. Высокая частота мутантных клеток в организме

как показатель повышенного канцерогенного

1.3. Апоптотическая гибель клеток с поврежденной

ДНК один из механизмов поддержания

генетической стабильности соматических клеток

на уровне мног оклеточного организма.

1.4. Методы определения индивидуального уровня

апоптоза клеток человека в ответ на повреждение ДНК
ГЛАВА II МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Метод определения клеток, несущих мутации по
локусуТклеточного рецептора ТСЯметод
2.2. Подготовка прогонного цитометра к анализу и
сортировка образцов.
2.3. Методы оценки апоптотической гибели
лимфоцитов
2.3.1. Определение доли клеток с гиподиплоидным
содержа и ем ДНК.
2.3.2. Определение доли клеток, связывающих
аннексии V, в разных субпопуляциях лимфоцитов
2.3.3. Определение субпопуляционного состава
лимфоцитов
2.3.4. Морфологический анализ апоптоза.
2.4. Статистический анализ.
ГЛАВА III РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1. Частота мутантных клеток у здоровых
доноров и онкологических больных
3.2. Исследования гибели лимфоцитов путем
апоптоза после гаммаоблучения i vi.
3.2.1. Определение оптимальных условий удаления из
клеток фрагментированной ДНК в процессе апоптоза
3.2.2. Сопоставление результатов морфологического и
прогочноцитометрического анализа гибели клеток
3.2.3. Зависимость доли клеток с признаками апоптоза
и некроза от времени после облучения.
3.2.4. Уровень апоптотической гибели лимфоцитов при
разной концентрации клеток во время культивирования.
3.2.5. Зависимость апопготической гибели лимфоцитов
здоровых доноров от дозы облучения
3.2.6. Анализ возможного влияния субпопуляционного
состава лимфоцитов на их
радиочувствительность в отношении
апоптоза
3.2.7. Зависимость аноптотической гибели лимфоцитов
онкологических больных от дозы облучения.
3.3. Сопоставление частоты ТСЛмутантных клеток с
радиочувствительностью лимфоцитов в
отношении апоптоза
3.4. Сравнение уровня аноптотической гибели
лимфоцитов и непосредственной реакции опухоли на лучевое воздействие
ГЛАВА IV ОБСУЖДЕН И Е РЕЗУЛЬТАТОВ
4.1. Высокая частота ТСЯмутантных клеток как
показатель повышенного канцерогенного риска онкологических заболеваний
4.2. Характеристика метода определения
индивидуального уровня апоптоза лимфоцитов после гаммаоблучения.
4.3. Вариабельность радиационноиндуцированного
апоптоза лимфоцитов в группе здоровых доноров и онкологических больных
4.4. Определение индивидуального уровня апоптоза
для прогнозирования адекватности лучевого лечения опухолей
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.
ВЫВОДЫ.
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


ДНК. Морфологический анализ апоптоза. Статистический анализ. ЗАКЛЮЧЕНИЕ. ВЫВОДЫ. Оценка риска возникновения злокачественных опухолей при действии ионизирующих излучений является актуальной проблемой радиобиологии. Среди специалистов нет единого мнения по многим вопросам, связанным с канцерогенным действием радиации на организм человека. Особенно много неопределенностей существует при оценке и прогнозировании канцерогенных эффектов облучения в малых дозах воздействия, которому подвергаются большие группы населения, в связи с радиоактивным загрязнением окружающей среды или условиями работы , . Недостаточность информации по этому вопросу обусловлена, наряду с другими причинами, отсутствием точных представлений о механизмах канцерогенного действия ионизирующих излучений. В то же время существенный прогресс в понимании общих механизмов злокачественного перерождения клеток, достигнутый в последнее время, указывает на ряд возможностей для выработки биологических критериев повышенного канцерогенного риска , . Молекулярнобиологические исследования показали, что определяющими событиями в злокачественной трансформации являются мутации в соматических клетках i . ., . В частности, установлена важная роль мутаций в протоонкогенах, генахонкосупрессорах, а также ряде генов, контролирующих пролиферациию клеток и репарацию ДИК. Имеющиеся в настоящее время данные свидетельствуют, что высокий уровень мутагенеза обусловленный как наследственными особенностями, так и действием генотоксических факторов сопровождается повышенной вероятностью злокачественных новообразований. Хорошо известно, что частота мутантных клеток по любому локусу увеличивается при действии генотоксических факторов, в том числе ионизирующих излучений. Причем, как показано при обследовании переживших атомную бомбардировку Хиросимы и Нагасаки, выход частоты мутантных по локусу гликофорина А клеток на единицу дозы выше примерно в 2 раза у лиц с онкологическими заболеваниями, чем без них ii . Поэтому есть основания предполагать, что повышенная частота клеток с мутациями в локусах, не связанных непосредственно с канцерогенезом, отражая общий уровень мутагенеза в соматических клетках, может являться показателем повышенного канцерогенного риска. Очевидно, что методы оценки частоты мутантных клеток должны быть пригодны для обследования больших контингентов в относительно короткие сроки. В настоящее время известно несколько методов, удовлетворяющих этому условию, и среди них метод определения частоты клеток, несущих мутации по локусу Тклеточного рецептора Т ТС, который был использован в данной работе. Важным барьером на пути к злокачественной трансформации является элиминация клеток с поврежденной ДНК путем апоптоза . . . . Это представление опирается в значительной мере на результаты исследования роли и механизмов действия продуктов генов р и семейства , которые позволяют полагать, что нарушение процесса апоптотической гибели клеток в ответ на повреждение ДНК является одним из факторов, обусловливающих возникновение иили развитие злокачественной опухоли.