Закономерности образования аберраций хромосом в лимфоцитах человека при нейтронном облучении в различных стадиях митотического цикла

• Автор: Богатых, Борис Александрович
• Шифр специальности: 03.00.01
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1984
• Место защиты: Обнинск
• Количество страниц: 138 c. : ил

ОГЛАВЛЕНИЕ
ВВЕДЕНИЕ.

Глава I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общие представления о митотическом цикле

1.2. Влияние ионизирующего излучения на продвижение клеток в митотическом цикле .

1.3. Качественные и количественные закономерности образования аберраций хромосом в различные периоды митотического цикла .

1.4. Причины изменения радиочувствительности хромосом

на протяжении митотического цикла

1.5. Особенности вариации радиочувствительности клеток по циклу при действии плотноионизирующих излучений .

Глава И. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

.1. Обьект исследования и методика культивирования лимфоцитов.

.2. Приготовление препаратов хромосом .
.3. Анализ аберраций хромосом
.4. Радиоавтографический метод
.5. Условия облучения и дозиметрия
.6. Статистическая обработка полученных данных
Глава III. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
IIIЛ. Закономерности изменения процента меченых метафаз и выхода аберраций хромосом в культуре лимфоцитов человека при гаммаоблучении Со в дозе 2 Гр в различные периоды митотического цикла при фиксации клеток через ч
1.2. Закономерности изменения процента меченых метафаз и аберраций хромосом в культуре лимфоцитов человека при гаммаоблучении Со в дозе
2 Гр в различные периоды митотического цикла
при фиксации клеток через ч
1.3. Закономерности возникновения аберраций хромосом в митотическом цикле культуры лимфоцитов человека при воздействии промежуточными 0, МэВ
и быстрыми 0, МэВ нейтронами .
стр
1.3.1. Количественные закономерности выхода аберраций хромосом при воздействии промежуточными и быстрыми нейтронами в различные периоды митотическо1 го цикла при фиксации клеток через ч
1.3.2. Количественные закономерности выхода аберраций хромосом при воздействии промежуточными и быстрыми нейтронами в различные периоды митотического цикла при фиксации клеток через ч.
1.3.3. Качественные закономерности возникновения аберраций хромосом в митотическом цикле под влиянием промежуточных и быстрых нейтронов
при двух сроках фиксации клеток и ч.
Глава 1У. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ.
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Для определения того, в каком именно периоде митотического цикла находится клетка в данный момент времени, применяют метод двойной метки, обычно и 4СтимидинВооЬзта . В последнее время для установления количества пройденных клеткой митотических циклов широко используется 5БДУ, который при добавлении в культуру клеток в период репликативного синтеза ДНК, успешно замещает в ней эндогенный тимин. После двух репликативных синтезов ДНК одна из хроматид каждой хромосомы полностью будет содержать 5БДУ, и при соответствующем окрашивании препаратов метафазных хромосом клеток второго митоза эта хроматида окрасится в более светлый цвет по отношению к хроматиде, в которой одна из полинуклеотидных нитей ДНК не содержит 5БДУ. Именно это позволяет точно идентифицировать клетки второго митоза. Появление же метафазных пластинок,содержащих окрашенными в светлый цвет обе хроматиды каждой хромосомы,свидетельствует о прохождении клетками трех репликативных синтезов ДНК. Таким образом, применение указанных методов, в отдельности или в сочетании друг с другом, позволяет определить не только продолжительность самого митотического цикла, но и отдельных его периодов, а также способствует изучению биохимических и генетических процессов, протекающих в отдельных периодах цикла. Лимфоциты периферической крови человека, представляющие собой
конечный этап клеточной дифференцировки, находятся в естественно синхронизированном состоянии в периоде покоя б0, сохраняя при этом пролиферативные способности. При инкубации в питательной среде в присутствии ФГА они подвергаются бластрансформации. Довольно продолжительный первый митотический цикл ч в культуре делает лимфоциты удобным объектом при изучении как кинетики продвижения клеток по циклу и отдельным его периодам, так и в радиационной цитогенетике. Исследования с применением тимидина показали, что из всех лейкоцитов к делению способны лишь мононуклеарные лейкоциты, в частности, Тлимфоциты , ii . Бендер и Преекот , , первыми показали, что вплоть до часов культивирования лимфоцитов в присутствии ФГА вся популяция находится в предсинтетическом периоде цикла. Последующие часов клетки находятся в периоде, а затем, в течение часов, в периоде. Через часа в их экспериментах появлялись единичные митозы в культуре, а на часу уже заметный их уровень. На часу культивирования авторы подвергали клетки импульсному воздействию тимидина, фиксируя на часу меченые клетки в первом митозе. В дальнейшем это время фиксации ч обычно использовали многие авторы в радиационноцитологических экспериментах, забывая о том, что в момент введения метки в культуре наблюдались уже митозы. Однако в последующем, с привлечением других методов исследования, включая радиационноцитогенетические и дифференциальную окраску хромосом с помощью 5БДУ, были внесены существенные коррективы в параметры митотического цикла культуры лимфоцитов человека. В частности, было показано, что пик митозов первой генерации наблюдается через часов после стимуляции ФГА лимфоцитов, в то время как при фиксации клеток через часа культи
вирования популяция представляет собой уже смесь Iго, 2го и даеж 3го митозов, при наибольшем количестве клеток второго митоза , i i, , , , , , Н. А.Порядкова, . В то же время Леонард и Декат , , наблюдали всего лишь 3 клеток второго митоза при фиксации на часу культивирования, а Гиолотто и соавт. Iго митоза даже после часов с начала инкубации. Причем у разных доноров наличие метафаз Iго митоза в эти сроки фиксации варьировало от до , что, как предполагают авторы, связано с индивидуальной реакцией лимфоцитов на ФГА. Столь разнородные результаты, повидимому, можно объяснить, с одной стороны, разными условиями культивирования лимфоцитов, временные параметры митотического цикла которых изменяются в зависимости от типа используемых сред, ФГА, сыворотки, газовой смеси и т. Vii, , . Все это диктует необходимость соблюдения, повозможности, идентичных условий при постановке опытов. С другой стороны, ряд авторов придерживаются точки зрения, что популяция ФГАстимулированных лимфоцитов не является однородной, а состоит из нескольких субпопуляций, отличающихся по длительности митотического цикла i . Л.Г. Дубинина, .