Выделение, очистка и каталитические свойства моноаминоксидазы формы N из Aspergillus niger

• Автор: Янковская, Виктория Леонидовна
• Шифр специальности: 02.00.10, 03.00.04
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Черноголовка
• Количество страниц: 102 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ

СПИСОК СОКРЛЩЕИЙ

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Общая характеристика МАО

1.2. Распространение и внутриклеточная

локализация

1.3. Регуляция активности МАО

1.4. Формы МАО

1.5. Структурные особенности А и Б форм МАО

1.6. Субстратная специфичность

1.7. Структура активного центра
1.8. Биотрансформация МФТИ и его аналогов
1.9. Взаимодействие с ингибиторами
1.9.1. Ингибиторы первого поколения
1.9.2. Ингибиторы второго поколения
1.9.3. Ингибиторы третьего поколения
1 Характеристика МАО
Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Материалы
2.2. Условия выращивания клеток
2.3. Определение активности фермента
2.4. Ингибиторный анализ МАО
2.5. Получение препарата апофермента
2.6. Проведение кислотного гидролиза для идентификации ФМН и ФАД
2.7. Аналитические методы
Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Очистка МАО
3.2. Хроматография МАО с использованием
сефарозы
3.3. Исследование природы флавинового
кофактора
3.4. Влияние на каталитические свойства
3.5. Взаимодействие МАО с необратимыми ингибиторами
3.6. Сравнительное исследование субстратной специфичности различных форм МАО
3.7. Взаимодействие с обратимыми ингибиторами
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ


Глава 1. Глава 2. Глава 3. Влияние на каталитические свойства
3. МАО моноаминоксидаза КФ 1. В настоящее время для решения фундаментальных проблем биологической и медицинской химии, непосредственно связанных с актуальными задачами теоретической и клинической медицины, первостепенное значение имеет изучение природы ключевых ферментов, нарушение функций которых представляет собой ведущее звено в механизме расстройств процессов обмена веществ при патологических состояниях. К числу таких ферментов принадлежат моноаминоксидазы ферменты, которые катализируют дезаминирование важнейших нейромедиаторов и биогенных аминов нейроактивных и вазоактивных. Хотя эти ферменты были открыты несколько десятилетий назад, внимание к ним биохимиков, фармакологов, клиницистов, геронтологов все более возрастает, что объясняется важностью их функций в организме. Нарушение функций моноаминоксидаз обнаружено для широкого спектра нейронсихичсских заболеваний и расстройств ингибиторы МАО широко применяются в медицинской практике при лечении депрессий, болезни Паркинсона, для стабилизации артериального давления и пр. Роль МАО в этих организмах заключается в обеспечении их азотом в связанной форме. Большое значение придается возможности использования МАО в биосенсорах для детекции широкого круга биологически активных соединений. В организмах млекопитающих этот фермент присутствует в двух формах МАО А и Б, которые первоначально различали по их чувствительности к ацетиленовым ингибиторам хлоргилину и депренилу и по преимущественному окислению различных типов субстратов. Вместе с тем, о структурных особенностях различных форм МАО, в частности, третичной структуре МАО и топографии субстратсвязывающих участков активного центра очень мало известно. Во многом это связано с отсутствием рентгеноструктурных данных по этому ферменту, что обусловлено трудностями в кристаллизации А и Б форм МАО вследствие агрегации фермента при его выделении и очистке. В г. Высказано предположение, что МАО является эволюционным предшественником МАО теплокровных. Таким образом, исследование этого фермента представляет несомненную актуальность как с практической стороны, поскольку отработка эффективных способов выделения МАО может быть использована для решения ряда медицинских и биотехнологических задач, так и с фундаментальной точки зрения, поскольку для гомогенного препарата данного фермента появляется возможность, вопервых, его кристаллизации и, следовательно, изучения его третичной структуры, а, вовторых, получения информации относительно общих структурных характеристик и кинетических особенностей различных форм МАО, чему может способствовать создание химерных форм МАО и МАО теплокровных. Целью настоящей работы являлось получение гомогенно чистого препарата МАО И, его биохимическая и кинетическая характеристика. ГЛАВА 1. Моноаминоксидаза МАО, КФ 1. Этот процесс был детально изучен iv iv . Впервые фермент был описан и назван тираминоксидазой , . Существуют две изоформы фермента моноаминоксидазы А и Б, которые были дискриминированы на основе различной чувствительности к ацетиленовым ингибиторам и субстратам , , , . Оба фермента содержат ФАД в качестве кофактора, который ковалентно связан с активным центром фермента.