Получение биоаналитических реагентов на основе полимерных дисперсий

• Автор: Генералова, Алла Николаевна
• Шифр специальности: 02.00.06
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 136 с. : ил.

1.1. Основные принципы биоаналитических исследований.

1.2. Получение полимерных микросфер для биологических исследований.

1.2.1. Способы получения окрашенных полимерных суспензий.

1.2.2. Синтез полимерных суспензий с альдегидными группами на поверхности.

1.3. Применение полимерных микросфер в биоанализе.

1.3.1. Полуколичественные методы тесты, проводимые при участии частиц полимерных суспензий.
1.3.2. Количественные методы анализы, основанные на использовании микросфер полимерных суспензий.

ГЗ.З.Комплсксиые методы анализа биоспецифических взаимодействий,

проявляемых с помощью частиц полимерных суспензий.

Глава II. Экспериментальная часть.

.1. Исходные вещества.

.2. Методы исследования.
Глава III. Результаты и их обсуждение.
III. 1 Синтез полимерных микросфер.
1.1.1. Получение полиакролеиновых микросфер в присутствии
ксантеновых красителей.
III. 1.2. Получение суспензий полиакролеина в присутствии
поверхностноактивных веществ.
Ш.1.3. Синтез полиакролеиновых частиц в присутствии водного
раствора аммиака.
III.1.4. Получение полимерных микросфер для инструментальных
методов анализа.
III. 1.5. Синтез полимерных дисперсий для маркирования холестерина
клеточных мембран.
Ш.2. Применение полиакролеиновых дисперсий для гибридизационного
анализа нуклеиновых кислот.
Ш.З. Использование полиакролеиновых дисперсий для детекции гаптена
2, методом латексной агглютинации в планшете.
Ш.4. Турбидимстрические исследования реакции латексной агглютинации
при определении 2
Ш.5. Использование полимерных микросфер для маркирования холестерина
клеточных мембран.
Глава IV. Выводы.
Глава V. Литература.
Список сокращений.
Введение


Одним из способов детекции биоспецифических реакций антигенантитело и биотинстрептавидин заключается в том, что антиген антитело или стрсптавидин иммобилизуют на полимерные частицы, в результате чего реакцию между компонентами данных пар, которая в этом случае носит название реакции латексной агглютинации, можно наблюдать визуально 4. Н4М ГМН
Рис. Биотин. Для устранения этого недостатка было предложено использовать окрашенные латексы , которые позволяют повысить чувствительность метода. Одним из процессов, во многом определяющим развитие таких заболеваний, как атеросклероз, ишемическая болезнь сердца, является накопление холестерина в плазматических мембранах различных клеток организма. Холестерин рис. Нарушение сбалансированности транспорта холестерина в клетку и из нее служит главной причиной развития атеросклероза , . Однако, сведений о количестве и закономерностях распределения холестерина в илазмолемме клеток в норме и при заболевании недостаточно. Известные в настоящее время методы определения либо требуют большого количества биологического материала , либо характеризуются низкой специфичностью , либо для выявления холестерина необходимо его присутствие в клетке в значительных количествах, , . Все это требует создания простого и доступного метода оценки содержания холестерина и изучения его топографии распределения в мембранах клеток. В начале го века Виндаус открыл, что холестерин образует со стероидным гликозидом дигитонином рис 1. Реакция комплексообразования обладает высокой стереоспецифичностью . Рис. Холестерин. Аддукт холестерина с дигитонином холестериндигитонид имеет незначительную растворимость. Благодаря этому дигитонин является наиболее подходящим сапонином для осаждения холестерина. В некоторых работах предпочтительную роль при взаимодействии компонентов аддукта отдают гидрофобному взаимодействию циклопентапергидрофенантренового цикла , а в других рассматривают их как соединения включения . Соединения включения
Рис. Между гостем и хозяином не образуется ковалентной связи. Если полость в решетке хозяина замкнута со всех сторон гак, что молекулы гости захвачены как в клетке, такие соединения известны как клатраты или клеточные соединения. Соединения включения занимают промежуточное положение между твердыми растворами внедрения и истинными химическими соединениями. Они образуются за счет стереоспецифической комплементарности, те. Включаемое вещество по своей пространственной конфигурации должно соответствовать полости хозяина . Наиболее перспективным представляется создание маркера холестерина, в котором специфический лиганд будет связан с таким носителем, который можно будет непосредственно регистрировать методами электронной микроскопии. В настоящее время в качестве носителей используют макромолекулы гемоцианин, биологические частицы вирусы, бактерии, частицы коллоидною золота , . В то же время имеются все данные для создания количественного метода определения холестерина в мембранах клеток на основе полимерных носителей, содержащих в своем составе дигитонин, способный специфически связываться с холестерином. Получение полимерных микросфер для биологических исследований. Первое сообщение об успешном применении поливинилтолуольных и полистирольных микросфер с узким РЧР для диагностики ревматоидного артрита появилось в г. Сообщалось, что взаимодействие антигенов, находящихся в сыворотке крови пациента, с гаммаглобулином, адсорбированным на поверхности микросфер суспензии, привело к слипанию агглютинации полимерных частиц и образованию крупных агломератов, легко различимых невооруженным взглядом. Вслед за этим появились публикации по использованию полистирольных и метилметакрилатных суспензий в качестве носителей белка при получении диагностических тестсистем на другие типы заболеваний . Для повышения селективности иммунохимичсских реакций, проводимых с участием полимерных суспензий, рекомендуется регулировать гидрофильногидрофобный баланс поверхности полимерного носителя. Для этого проводят модификацию полимерных частиц стирола глутаровым альдегидом, полиэтиленоксидом, полиглицеролом . Полистирольные латексы с заданным содержанием карбоксильных групп получают методом безэмулыа горной полимеризации стирола с небольшими количествами мономеров акрилового ряда , .