Определение аминокислот и их оптических изомеров в виде o-фталевых и дансильных производных методом высокоэффективной жидкостной хроматографии

• Автор: Чернобровкин, Михаил Геннадьевич
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 150 с.

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 1. Определение модифицированных аминокислот методом обращеннофазовой высокоэффективной жидкостной хроматографией. Обзор реагентов для предколоночной дериватизации аминокислот
1.1 Определение аминокислот со спектрофотометрическим и флуориметрическим детекторами

1.2 Определение аминокислот с электрохимическим детектором

1.3 Дансилхлорид, как модифицирующий реагент для аминокислот

1.4 Использование офталсвого реагента для предколоночной дериватизации аминокислот в обращеннофазовой ВЭЖХ

1.5 Детектирование офталевых производных аминокислот

1.6 Определение энантиомеров аминокислот после дериватизации с офталевым альдегидом

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 2. Исходные вещества, аппаратура, методика эксперимента

2.1 Исходные реактивы и растворы
2.2 Получение производных аминокислот с офталевым альдегидом
2.3 Получение дансильных производных аминокислот
2.4 Аппаратура, сорбенты и подвижные фазы
2.5 Методика хроматографического эксперимента
Глава 3. Предколоночная дериватизация аминокислот с офталевым альдегидом в обращеннофазовой ВЭЖХ
3.1 Исследование устойчивости ОФА2МЭ производных аминокислот в процессе разделения на колонке с гидрофобизированным силикагелем
3.2 Оптимизация условий разделения ОФАНАЦ производных аминокислот
3.2.1 Влияние природы органического растворителя подвижной фазы на селективность разделения ОФАНАЦ производных аминокислот
3.2.2 Влияние и ионной силы подвижной фазы на разделение ОФЛНАЦ производных аминокислот
3.2.3 Разделение ОФАНАЦ производных сложной смеси аминокислот
3.3 Изучение свойств нового хирального модификатора ЫКманделил5цистеина
3.3.1 Чувствительность детектирования ОФАНАЦ и ОФАНМЦ производных аминокислот
3.4. Электрохимическое детектирование ОФАНАЦ производных аминокислот Глава 4. Определение аминокислот после дериватизации дансилхлоридом методом обращеннофазовой ВЭЖХ
4.1 Оптимизация условий получения дансильных производных аминокислот
4.2 Ампсромстрическос детектирование дансильных производных аминокислот в обращеннофазовой ВЭЖХ
Глава 5. Определение аминокислот и их оптических изомеров в пиве и фармацевтических препаратах методом обращеннофазовой ВЭЖХ
5.1 Определение аминокислот и их энантиомеров в виде офталевых производных в пиве
5.2 Определение аминокислот и их энантиомеров в виде офталсвых производных в фармацевтических препаратах
5.3 Определение аминокислот в виде дансильных производных в фармацевтических препаратах
ЛИТЕРАТУРА
ВВЕДЕНИЕ
Актуальность


Такая хроматографическая система используется только для анализа аминокислот и характеризуется не высокой эффективностью. Современные системы для ионообменного анализа аминокислот полностью автоматизированы, программное обеспечение гарантирует высокоточную подачу реагентов. Фирма ii i США разработала приставку для постколоночной дериватизации, которая позволяет создавать температурный градиент термостата колонки. Использование данной приставки значительно улучшает хроматографическое разделение и сокращает время анализа. Одновременное детектирование аминокислот с первичными и вторичными аминогруппами возможно после дериватизации с продажным реагентом на основе нингидрина I ii i, США. Недавно фирмой ix США был разработан вариант прямого анализа аминокислот методом анионообменной хроматографии с амперометрическим детектированием. М аминокислоты 4. Согласно другому методу, для определения аминокислот используют обращеннофазовую хроматографию ОФ ВЭЖХ с предколоночным переводом аминокислот в гидрофобные соединения. Предколоночная дериватизация аминокислот не требует специального оборудования и производится обычно в специальном сосуде или непосредственно в петле дозатора. Производные аминокислот разделяют на колонке, заполненной обращеннофазовым сорбентом в режиме градиентного элюирования, что позволяет сократить продолжительность анализа до минут и повысить эффективность разделения и чувствительность детектирования. К преимуществам этого варианта анализа следует также отнести универсальность используемой хроматографической системы, то есть хроматограф можно легко приспособить для выполнения других задач по ВЭЖХ. Также, используя хиральные модификаторы, возможно определение оптических изомеров аминокислот. Благодаря вышеперечисленным достоинствам, ОФ ВЭЖХ аминокислот занимает в настоящее время лидирующее положение среди остальных методов публикаций посвящено проблемам ОФ ВЭЖХ аминокислот. Предколоночная дериватизация аминокислот в ОФ ВЭЖХ достигается с применением различных органических реагентов. Некоторые из реагентовмодификаторов взаимодействуют, как с первичными, так и со вторичными аминогруппами аминокислот, другие селективно с первичными или вторичными аминогруппами. Селективность и чувствительность определения аминокислот зависит от выбранного модификатора и используемого вида детектирования. Для детектирования аминокислот применяют спектрофотометрический, флуориметрический и электрохимический детекторы. В последующих разделах рассматриваются свойства органических модификаторов аминокислот, классификацию реагентов проводили по виду детектирования. Введение хромофорных групп позволяет детектировать неароматические аминокислоты со спектрофотометрическим детектором на достаточно больших длинах волн на границе ультрафиолетовой и видимой областей где влияние других соединений не сказывается. Для флуориметрического детектирования проводят модификацию аминокислот флуорофорными группами. Очевидно, что чувствительность флуориметрического детектора на несколько порядков выше, чем спсктрофотометрического. Кроме того, при флуоресцентном детектировании используется две длины волны длина волны возбуждения и испускания, величины которых полностью определяются химическим строением детектируемого соединения. Этот факт гарантирует более высокую селективность флуоресцентного детектора по сравнению со спекгрофотометрическим. Для повышения селективности и чувствительности детектирования используют лазерноиндуцированную флуоресценцию ЛИФ 5,6. Для спектрофотометрического и флуориметрического детектирования аминокислот было предложено несколько десятков реагентов, однако широкое распространение в аминокислотном анализе продуктов питания и лекарств получили лишь некоторые из них. Можно отметить, что производные аминокислот с нингидрином не подходят для предколоночной дериватизации в ВЭЖХ, главным образом, изза не высокой устойчивости. Структурные формулы используемых реагентов, образующихся производных и побочных продуктов дериватизации аминокислот приведены в табл. Таблица 1. Продолжение табл. Продолжение табл. Из данных приведенных в табл.