Оптимальные многоступенчатые системы спектрофотометрических и хроматографических методов в клинической лабораторной диагностике эндокринных заболеваний: принцип построения и применение в анализе

• Автор: Колоскова, Светлана Владимировна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2006
• Место защиты: Самара
• Количество страниц: 174 с. : ил.

Оглавление
Введение

Г лава 1. Обзор литературы

1.1. Методы определения холестерина в сыворотке крови человека

1.1.1. Химические методы определения холестерина

1.1.2. Ферментные методы определения холестерина.

1.1.3. Определение холестерина методами жидкостной хроматографии

1.1.4. Определение холестерина методом газожидкостной хроматографии

1.2. Определение высших жирных кислот в плазме крови человека.

1.3. Определение катехоламинов в плазме крови человека

Глава 2. Экспериментальная часть

2.1. Реагенты и аппаратура
2.2. Методы исследования
Глава 3. Многоуровневая система определения холестерина в плазме крови человека .
3.1. Определение содержания холестерина методом планарной хроматографии
3.2. Определение холестерина фотометрическими методами
3.3. Определение холестерина методом ВЭЖХ.
Глава 4. Методы определения высших жирных кислот в плазме крови.
Глава 5. Определение катехоламинов и важнейших биохимических маркеров в биологических жидкостях человека
5.1. Определение катехоламинов методом ВЭЖХ
5.2. Определение показателей кальцийфосфорного обмена в биологических жидкостях человека
Глава 6. Использование совокупности параметров для решения классификаци
онных задач в клинической диагностике
Выводы.
Литература


Одна из модификаций прямого метода с применением реактива 33, к которому добавлена фосфорная кислота, разработана авторами
Методы, основанные на реакции 33 и включающие предварительную экстракцию ОХС, в целом аналогичны экстракционным методам, основанным на реакции ЛБ . В качестве экстрагентов используют смеси петролейный эфирэтанол, этанолхлороформ, этанолизопропанол ,. Обычно используют фотометрическую регистрацию Х,пах0 нм , однако для повышения чувствительности применяют и флуориметричсский способ . При этом снижается влияние ряда мешающих компонентов. Для определения ОХС предложены и другие реагенты. В настоящее время лабораторий мира использует ферментный способ определения ХС 6. III стадия определение продуктов реакции Н2 или холест4енЗона или убыли кислорода в процессе ее протекания. Чаще всего содержание ХС находят, определяя Н2, образующийся в ходе реакции 2. Наибольшее распространение получила реакция Н2 с фенолом и 4аминоантипирином в присутствии пероксидазы , , . Образующийся продукт определяют, измеряя светопоглощение при 0 нм. Данный метод отличается простотой, возможностью автоматизации процесса , , реактивы легкодоступны. В работе описан фотометрический метод определения ХС на основе реакций пероксида водорода со смесью 1,фенантрена и 1,7дигидроксииафталина Хтах0 нм. Авторы , , использовали взаимодействие перекиси водорода с восстановленной формой 2,2азино бис 3этилбензотиазолинсульфокислоты, Атоах5 нм в присутствии пероксидазы. Известен также метод, использующий окисление этанола до ацетальдегида, который восстанавливает НАД в присутствии альдегиддсгидрогеназы образуется продукт с Хтах40 нм. Пероксид водорода определяется с помощью НАДН . В последнее время активно развиваются методы с использованием иммобилизованных ферментов ,. Также разработаны специальные анализаторы, которые удобны и легки в обращении и могут использоваться для измерения ОХС даже в домашних условиях . Данные методики чрезвычайно просты и удобны, однако характеризуются значительными погрешностями и, повидимому, пригодны лишь для тех рутинных анализов, к которым не предъявляются высокие требования. Основная трудность при применении ферментативных методов определения ХС с фотометрической регистрацией по Н2 мешающее влияние других веществ, присутствующих в пробе, особенно билирубина. К общим недостаткам ферментных методов можно отнести относительно высокую себестоимость анализа и небольшой до года срок хранения реагентов. К тому же, часто высказываемое в литературе мнение о почти абсолютной специфичности ферментных методов определения ХС, к сожалению, не соответствует действительности. Существуют электрохимические варианты ферментативного метода определения ХС, основанные на регистрации уменьшения парциального давления или увеличения концентрации Н2 в ходе реакции 2. Кислород можно определить с помощью кислородного электрода при этом важна полная изоляция измерительной ячейки от атмосферы. Чаще всего используют электрод Кларка, состоящий из платинового электрода, поляризуемого при 0,6 В, и хлорсеребряного электрода сравнения. Электрохимическое определение Н2О2 можно проводить различными способами. Уменьшение концентрации ионов Г измеряли с помощью иодидселективного электрода. В обоих случаях используют иммобилизованные ферменты. В целом электрохимические способы регистрации при ферментативном определении ХС имеют много достоинств они достаточно экспрессны измерения занимают 6 мин, мало подвержены влиянию веществ, мешающих фотометрическому определению билирубин, гемоглобин и т. Однако они требуют специальной аппаратуры и недостаточно просты для рутинных исследований. В последнее время в анализе липидов в целях изучения их состава и свойств разрабатываются новые методы их разделения, идентификации и количественного определения, к числу которых относится и высокоэффективная жидкостная хроматография ВЭЖХ. С целью отделения ХС, эфиров ХС от других липидов ди и триглицеридов, фосфолипидов, цереброзидов и ряда других проводят экстракцию липидной фракции ХС.