Ионы металлов как метки для определения иммунореагентов

• Автор: Дыхал, Юлия Ивановна
• Шифр специальности: 02.00.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2000
• Место защиты: Казань
• Количество страниц: 117 с.

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

1. КЛАССИФИКАЦИЯ ИММУНОХИМИЧЕСКИХ

МЕТОДОВ АНАЛИЗА

1.1. Основные факторы, лежащие в основе классификации методов ИХА

1.1.1 Метки, используемые в иммуиохимическом анализе

1.1.2. Способы детекции бноспецифическнх взаимодействий

1.2. Тенденции развития иммунохимического анализа

2.1ШКОТОРЫЕ АСПЕЮГЫ КАТАЛИТИЧЕСКОГО ВЫД0ЛЕИЯ ВОДОРОДА И ВОЗМОЖНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ ДЛЯ ЦЕЛЕЙ ИММУНОАНАЛИЗА

2.1. Общая характеристика процессов, связанных с каталитическим выделением водорода

2.2. Механизм каталитического выделения водорода
3. ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ, АППАРАТУРА, ОБЪЕКТЫ ИССЛЕДОВАИЯ И УСЛОВИЯ ЭКСПЕРИМЕНТА
3.1. Постановка задачи
3.2. Обьекты исследования и приготовление растворов
3.3. Приборы и техника измерений
3.4. Иммобилизация иммунореагентов для проведения иммунохимических определений
3.5. Определение удельной активности рибонуклеазы
3.6. Получение ангидрида ДТГ1А
3.7. Получение меченного ионом СоГ1 антигена РНКазы
3.8. Качественная оценка образования иммунокомилексов
4. ВЫБОР ИЩИКЛТОРНОЙ СИСТЕМЫ ДЛЯ РЕГ ИСТРАЦИИ БИОСПЕЦИФИЧЕСКИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ
4.1. Электрохимическое поведение систем ион переходного металла иммунореагент
4.2. Влияние некоторых факторов на процессы электровосстановления ионов СоП и 1 в присутствии белков
4.3. Изучение свойств нитроцеллюлозных мембран с некоторыми модификаторами в присутствии ионов металлов
4.4. Иммунохимическое определение Аг РНКазы
4.5. Использование каталитических волн выделения водорода ятя оценки биоспенифического взаимодействия
в системах АтАг РИВ и АтАг СагМУ
4.6. Влияние рибонуклеиновой кислоты на рибонуклеазу
4.7. Влияние различных факторов на удельную
активность рибонуклеазы
5. КОНКУРЕНТНЫЙ ИММУНОАНАЛИЗ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ КОНЪЮГАТА, СОДЕРЖАЩЕГО ИОНЫ МЕТАЛЛА
5.1. Получение конъюгата РНКазаангидрид ДТПАСоП и определение молярного соотношения компонентов в нем
5.2. Оценка иммунологических свойств конъюгата и образование иммунных комплексов в присутствии и в отсутствие
немеченых антигенов
5.3. Отщепление метки и разрушение иммунных комплексов
5.4. Определение антигена рибонуклеазы
5.5. Возможность использования разработанного конкурентного иммуноанализа для определения некоторых других антигенов
ВЫВОДЫ
ЛИТЕРАТУРА


Один из путей достижения этой цели использование для регистрации биоспецнфнческнх взаимодействий в качестве меток ионов металлов. Несмотря на многообразие существующих методов, использованию металлов в качестве меток уделяется мало внимания. Ионы металлов лег ко детектируются по своей собственной электрохимической активности в достаточно широкой и доступной области потенциалов, а использование каталитических эффектов с их участием может позволить снизить нижний предел определяемых концентраций, сделать анализ более чувствительным и значительно расширить число определяемых биологически активных соединений, включив в их ряды и те, которые сами по себе не обладают электрохимической активностью. Научная новизна и практическая значимость. Показана и обоснована возможность использования ионов СоП и iII в качестве меток для иммунохимического анализа некоторых антигенов. Разработаны новые варианты иммунохимического анализа, отличающиеся по способу введения метки в один из компонентов биоспецнфического взаимодействия. Для оценки степени протекания иммунных реакций использована способность комплексов некоторых белков в присутствии ионов СоП и i I вызывать каталитическое выделение водорода. Ат прот ив панкреатической рибонуклеазы быка. Найдены условия функционирования систем на основе иммобилизованных Ат и конъюгата антигена Аг с металлической меткой, позволяющие регистрировать каталитическую волну выделения водорода. Предложены новые варианты иммунохимических определений с аналитическими характеристиками, отвечающими требованиям иммуноанализа. Обоснованы подходы, позволяющие предложить разработанные методики для определения рибонуклеазы в биологических жидкостях и вируса крапчатости гвоздики в растительных экстрактах на уровне наномолей. Разработанные способы анализа основаны на использовании доступных реагентов в качестве метки ионы металлов и
более просты в исполнении по сравнению с используемыми в настоящее время видами иммуноанапиза. Работа по теме диссертации выполнялась в соответствии с координационном планом РАН по направлению разделы . Российского фонда фундаментальных исследований проекты 2 и 9. Материалы диссертации были представлены на Ной Всероссийской конференции молодых ученых Современные проблемы теоретической и экспериментальной химии Саратов, г. ЬХХХ Поволжской региональной конференции Физикохимические методы в координационной и аналитической химии Казань, г. Москва, г. Международной конференции по электроанализу Бонн, г. Всероссийской конференции Химический анализ веществ и материалов Москва, г. Всероссийской конференции с международным участием Сенсор . Сенсоры и . СанктПетербург, г. Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 работ. Из них 1 статья и 6 тезисов докладов на всероссийских и международных конференциях, одна статья принята к печати. Структура н объем работы Диссертация изложена ка 7 страницах машинописного текста, содержит 6 таблиц и рисунков. Работа состоит из введения, пяти глав, выводов и списка литературы, включающего 0 наименований. В первой главе литературный обзор представлена классификация нммунохимических методов анализа, в основу которой положены различные признаки. Аналитические возможности основных вариантов иммуноанализа показаны на примере результатов работ, опубликованных в последнее время. Отмечены основные достоинства и недостатки различных методов, а также тенденции развития иммунохимнческого анализа. Вторая глава литобзора обобщает сведения о каталитическом выделении водорода в растворах комплексных соединений некоторых металлов с органическими лигандами. Рассмотрены факторы, влияющие на величину каталитического эффекта, а также возможные механизмы этого процесса. Третья глава содержит постановку задачи, описание объектов исследования и использованные методики проведения эксперимента. Четвертая глава посвящена выбору индикаторных систем переходный металл определяемый Аг для разработки новых вариантов иммунохимнческого анализа. Описано электрохимическое поведение ионов металлов в присутствии изучаемых Аг.