Разработка и совершенствование методов молекулярно - генетической диагностики аденоматоза легких овец

• Автор: Шобогоров, Николай Михайлович
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Покров
• Количество страниц: 105 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ
1 ВВЕДЕНИЕ
1.1 Актуальность темы
1.2 Степень разработанности проблемы
1.3 Цели и задачи исследования
1.4 Научная новизна результатов исследований
1.5 Теоретическая и практическая значимость работы
1.6 Публикация результатов исследований
1.7 Степень достоверности и апробация результатов
1.8 Основные положения, выносимые на защиту
1.9 Объём и структура работы
1.10 Личный вклад соискателя
2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
2.1 Историческая справка
2.2 Распространение и энзоотическая ситуация аденоматоза легких

2.3 Характеристика возбудителя аденоматоза легких овец
2.3.1 Структура вириона и геномная организация вируса
аденоматоза легких овец

Механизм вирусной репликация
2.4 Экзогенные и эндогенные ретровирусы
2.4.1 Эндогенные вирусы овец (еМБПУэ)
2.5 Патогенез аденомтоза легких овец
2.6 Функциональные различия патогенеза аденоматоза легких овец
у экспериментально зараженных и естественно инфицированных животных

2.7 Механизмы онкогенеза аденоматоза легких овец
2.8 Клинические признаки аденомтоза легких овец
2.9 Патологоанатомические изменения
2.10 Гистологические изменения и электронная микроскопия
2.11 Диагностика аденомтоза легких овец
2.12 Заключение по обзору литературы
3 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
3.1 Материалы
3.1.1 Вирусы
3.1.2 Животные
3.1.3 Плазмида и бактериальные штаммы
3.1.4 Питательные среды
3.1.5 Реактивы
3.1.6 Лабораторное оборудование
3.2 Методы
3.2.1 Выделение и очистка нуклеиновых кислот
3.2.1.1 Выделения нуклеиновых кислот методом фенол-
хлороформной экстракции
3.2.1.2 Выделения нуклеиновых кислот с использованием различных типов сорбентов
3.2.2 Подбор праймеров и зондов
3.2.3 Проведение ПЦР с электрофоретической детекцией
3.2.4 Анализ ПЦР-продуктов
3.2.5 ПЦР с детекцией продуктов амлификации в режиме реального
времени
3.2.6 Молекулярное клонирование продуктов ПЦР
3.2.7 Нуклеотидное секвенирование

3.2.8 Компьютерный анализ и сравнение нуклеотидных последовательностей фрагментов генома вируса АЛО, построение филогенетических дендрограмм
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1 Разработка метода ПЦР с электорофоретической детекцией для выявления и идентификации генома экзогенных форм вируса аденоматоза легких овец, позволяющего дифференцировать его от эндогенной формы вируса
4.1.1 Подбор олигонуклеотидных праймеров
4.1.2 Оптимизация условий постановки ПЦР с электрофоретической детекцией
4.1.3 Определение специфичности метода ПЦР с электрофоретической детекцией
4.2 Разработка тест-системы на основе ПЦР-РВ для выявления
генома вируса АЛО
4.2.1 Оптимизация тест-системы на основе ПЦР в режиме
реального времени для обнаружения генома вируса аденоматоза легких овец
4.2.2 Определение эффективности разработанной тест-системы на
основе ПНР в режиме реального времени по выявлению участка генома вируса аденоматоза легких овец
4.2.3 Определение специфичности ПЦР в режиме реального времени
4.3 Создание положительного контроля для тест-системы на
основе ПЦР в режиме реального времени
4.4 Изучение филогенетического родства АЛО
4.5 Экспериментальное заражение животных
5 ОБСУЖДЕНИЕ

тип дыхания) наблюдается прогрессирующая одышка, постепенно понижается упитанность животных. Появляется лёгкая одышка в начале болезни и обнаруживается у животных только после движения [J. М. Sharp, 1983; 2003].
Число дыхательных движении увеличивается, достигая 120 - 140 в минуту. Однако, вполне очевидно также что, вирус может распространятся до проявления клинических признаков [N. Dungal, 1938; R.C. Tustin, 1969; М. Caporale, 2005; С. Cousens, 2008].
Характерными признаками АЛО является непродолжительный кашель, выделение пенисто-слизисто-гнойных истечений из носовых отверстий животного, при опускании головы ниже грудной клетки. Окончательный диагноз АЛО может быть поставлен только после гистопатологического исследования (рисунок 5) [С. Cousens, 2009].
Рисунок 5 - Истечения из носоглотки [С. Соивепв, 2009].
Неизбежным исходом болезни является гибель животного, которая нередко ускоряется в результате бурного развития пневмонии, вызываемой