Усовершенствование молекулярно-биологических, гематологических и патолого-анатомических методов диагностики инфекционной анемии цыплят

• Автор: Селиверстова, Наталья Андреевна
• Шифр специальности: 06.02.02
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 2013
• Место защиты: Новосибирск
• Количество страниц: 121 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
Список сокращений, используемых в диссертации
ВВЕДЕНИЕ
1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
1.1 Особенности распространения вируса инфекционной анемии цыплят
1.2 Характеристика возбудителя инфекционной анемии цыплят
1.2.1 Характеристика и свойства белков у вируса инфекционной анемии цыплят
1.2.2 Пути и способы передачи вируса инфекционной анемии цыплят
1.3 Основные клинические формы проявления инфекционной анемии цыплят
1.4 Патологоанатомические и патоморфологические изменения
при инфекционной анемии цыплят
1.5 Гематологические изменения при инфекционной анемии цыплят
1.6 Иммуносупрессивное действие вируса
1.7 Современные методы диагностики инфекционной анемии цыплят
1.7.1 Серологические методы диагностики инфекционной

анемии цыплят
1.7.1.1 Реакция нейтрализации вируса
1.7.1.2 Реакция непрямой иммунофлюоресценции

1.7.1.3 Иммуноферментный анализ (ЕЫ8А, ИФА)

1.7.2 Определение и дифференциация вируса ИАЦ при помощи ПЦР
1.8 Последовательность генома кур для разработки количественной ПЦР
1.9 Заключение по обзору литературы
2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1 Материалы и методы
2.2 Результаты исследований
2.2.1 Разработка полимеразной цепной реакции для детекции вируса ИАЦ
2.2.1.1 Выбор нуклеотидных последовательностей для
разработки ПЦР
2.2.1.2 Подбор синтетических олигонуклеотидных праймеров
для выявления ДНК ИАЦ
2.2.1.3 Выявление ДНК вируса ИАЦ в полимеразной цепной реакции
2.2.1.4 Адаптация ПЦР для амплификаторов в режиме реального времени
2.2.2 Разработка полимеразной цепной реакции в режиме
реального времени для количественной оценки вируса ИАЦ
2.2.2.1 Разработка полимеразной цепной реакции в режиме реального времени для оценки копийности генома птиц
2.22.2 Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени на ген УР1 вируса инфекционной анемии цыплят
2.2.2.3 Количественное определение вируса инфекционной

анемии цыплят в пробах биоматериала
2.2.3 Гематологическая диагностика инфекционной анемии
цыплят
2.2.4 Усовершенствование патоморфологических методов
исследования при инфекционной анемии цыплят
2.2.5 Изучение диагностической эффективности разработанных методов
3 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ

4 ВЫВОДЫ
5 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ
6 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
7 ПРИЛОЖЕНИЯ

Ирландии необходимо использовать не менее трех рестриктаз. Данные, полученные D. Todd, могут быть использованы для эпизоотологической оценки хозяйств, а также для выбора вакцин.
М.Н.М. Notebom в 1991 году создал совмещенную гнездовую полимеразную цепную реакцию для детекции геномной ДНК инфекционной анемии цыплят. Автор использовал две пары синтетических олигонуклеотидных праймеров, комплементарных области геномной ДНК изолятов ИАЦ. Реакцию проводили в два этапа. После проведения первого этапа в 1%-м агарозном геле различали специфические полоски размером 186 п.н. Продукт ПНР амплифицировали со второй парой праймеров и получали ампликон размером 120 п.н.
1.8 Последовательности генома кур для разработки количественной ПЦР
Для разработки критериев использования реал-тайм ПНР необходимо установить внутренний стандарт, в отношении которого будут сравниваться результаты. Определить, какое количество геномных эквивалентов (ГЭ) вируса ИАЦ приходится в фиксированном количестве проб куриного генома, измеряемого в геномных эквивалентах. В данной реакции куриный геном будет являться внутренним контрольным образцом (ВКО) реакции. В качестве целевого гена для создания диагностикума был выбран авидин. Он представляет собой гликопротеид яичного белка с молекулярной массой 68000, обладающий чрезвычайно высоким сродством к молекулам витамина биотина (Т. Нго, Г. Ленхоффа, 1988).