Разработка методов молекулярной оценки селекционного материала основных овощных культур (лук, морковь, капуста белокочанная) на основе RAPD технологии

• Автор: Лаптева, Марина Николаевна
• Шифр специальности: 06.01.05
• Научная степень: Кандидатская
• Год защиты: 1999
• Место защиты: Москва
• Количество страниц: 147 с. : ил.

СОДЕРЖАНИЕ
ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ЕЕ Использование морфологических и биохимических признаков в геномной идентификации растений.
1.2. Молекулярные маркеры на основе ДНК в геномной идентификации растений Е2.Е RFLP технологии и их использование в геномной идентификации растений.
Е2.2. PCR технология и методы разработанные на ее основе геномной идентификации растений.

Е2.3. RAPD метод.

Е2.4. Оценка различных методов молекулярного маркирования в сравнении с RAPD методом.

Е2.5. Методы выделения ДНК из растительных тканей.

Е2.6. Оптимизация условий проведения PCR со случайными праймерами.

ЕЗ. Области применения RAPD технологии.

ЕЗ.Е Картирование признаков и генетические карты.
Е3.2. RAPD маркеры в оценке биоразнообразия зародышевой плазмы.
ЕЗ.З. RAPD маркеры в сортовой идентификации и семенном контроле.
Е4. Таксономия рода Allium и изучение филогенетических связей между видами на основе морфологических и цитологических признаков.
Е5. Межвидовая гибридизация и ее значение в селекции лука.
2. Молекулярно-биологические исследования лука в анализе филогенетических связей и прикладных аспектах селекции и семеноводства.

3. Андрогенез и гиногенез в создании исходного материала для гетерозисной селекции моркови и методы его оценки на выравненность
ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
2.1. Растительный материал
2.2. 8Б8-электрофорез запасных белков семян в полиакриламидном геле
2.3. Выделение геномной ДНК
2.4. Амплификация геномной ДНК
2.5. Электрофорез в агарозном геле и визуализация продуктов амплификации
2.6. Математическая обработка полученных данных
ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ
3.1. Микрометод выделения геномной ДНК для ЛАРО анализа
и характеристика полученных препаратов
3.2. ЛАРИ технология: оптимизация и подбор условий
проведения ПЦР
3.2.1. Обсуждение результатов
3.3. Геномная идентификация в изучении культурного и
дикого ассортимента луков
3.3.1. Подбор праймеров
3.3.2. ЛАРО анализ в изучении межвидового и внутривидового полиморфизма луков
3.3.3. ЛАРИ анализ в сортовой идентификации
3.3.4. Обсуждение результатов
3.4. Биохимическая и молекулярная оценка коммерческих партий
семян
3.4.1. Сравнительный анализ эффективности использования биохимических методов и ЛАРО технологии в оценке коммерческих партий семян лука
3.4.2. ЛАРН технология в сортовой идентификации и оценке коммерческих партии семян капусты белокочанной

3.4.3. Обсуждение результатов
3.5. Анализ межвидовых гибридов лука
3.5.1. Использование RAPD технологии в анализе межвидовых гибридов
3.5.2. Обсуждение результатов
3.6. Молекулярная оценка выравненности линейного материала моркови, полученного с использованием культуры in vitro
3.6.1. Подбор праймеров
3.6.2. Молекулярный анализ андрогенных растений моркови
RAPD методом
3.6.3. Молекулярный анализ гиногенных растений моркови
RAPD методом
3.6.4. Обсуждение результатов
ВЫВОДЫ
СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ
ПРИЛОЖЕНИЕ

интенсификации и механизации всего процесса производства. На сегодня в Госреестре селекционных достижений РФ у таких овощных культур как томат, огурец, морковь, капуста белокочанная значительную долю составляют гетерозисные гибриды (Пивоваров и др., 1997). Создание и производство гетерозисных гибридов сопряжено с получением высокогомозиготного селекционного материала, идентификацией и паспортизацией исходных линий с высокой комбинационной способностью и их гибридов Fi, а также с защитой авторских прав. Закон РФ «О селекционных достижениях», принятый в 1993 году гласит, что необходимыми условиями патентования и защиты авторских прав селекционеров должны быть отличимость (наличие минимальных дистанций между сортами и гибридами), новизна, стабильность проявления признаков или их изменчивость в установленных рамках. В этой связи, в литературе обсуждается вопрос об использовании ДНК «фингерпринтинга» молекулярно-биологическими методами (RFLP и RAPD) для идентификации инбредных линий, гибридов, сортов и защиты авторских прав селекционеров (Smith, 1992; Marsan et al., 1993; Pecchioni et al., 1993). Так RAPD метод с успехом использовался для оценки генетической чистоты и подлинности гибридных семян томата (Rom et al., 1995), огурца (Truksa, Prochazka, 1996). У гибридов капустных культур RAPD метод был использован для определения уровня инбредности партий семян из-за возможного загрязнения семенами от самоопыления материнской линии (Boury et al., 1992). Но пока не у всех культур идентификация линий, сортов и гибридов этим методом оказалась успешной. В большинстве случаев это наблюдалось у аллогамных культур, обладающих высоким уровнем генетической гетерогенности. Вследствие этого не удалось установить четких отличий между инбредными линиями лука репчатого (Bradeen, Havey, 1995), между сортами сахарной свеклы (Ford-Lloyd et al., 1993), между линиями и гибридами F( у моркови (Grzebelus et al., 1997). При этом Ford-Lloyd с соавторами (1993) делают вывод, что использование RAPD метода для сортовой идентификации у видов-перекрестников ограничено, потому что не может отвечать двум из трех критериев Бейли (Bailey, 1983), т.е. наличию различимой межсортовой изменчивости и минимальной внутрисортовой изменчивости.
Анализ генетической чистоты коммерческих партий семян с помощью RAPD метода можно ускорить и упростить за счет совершенствования методов выделения